Digitoxin. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Digitoxin For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Digitoxin English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of digitoxin in serum, as an aid in the therapeutic administration of this cardioglycoside. Catalog Numbers: L2KDG2 (200 tests), L2KDG6 (600 tests) Test Code: DGT Color: Red Summary and Explanation Digitoxin is a long-acting cardiac glycoside used in the treatment of congestive heart failure and certain arrhythmias. It is structurally identical to digoxin except for the absence of a single hydroxyl group. Being less polar, digitoxin is absorbed more completely, and circulates to a much greater extent protein-bound. In the liver, it is extensively metabolized to both active and inactive forms. Digitoxin has a comparatively long half-life of 5 to 7 days and, except in the nephrotic syndrome, is largely unaffected by renal dysfunction. A transient peak is associated with the distribution phase; thereafter the circulating level exhibits a steady and very gradual decline. Accordingly, blood samples for digitoxin analysis should be collected just before the next dose or in any case not less than 6 hours after the previous dose to allow time for plasma and tissue levels to reach equilibrium. Serum determinations can assist in verifying compliance and in adjusting the dose to achieve a desired plasma concentration. Monitoring circulating digitoxin levels is especially valuable when there are enterohepatic or renal complications, and during concomitant therapy with drugs like quinidine, which can affect the pharmacokinetics of digitoxin. It must be remembered, however, that the relation between circulating level and clinical response varies greatly from one individual to another, due to the many factors which are at work. This is reflected in the considerable overlap between therapeutic and toxic ranges summarized in the literature. Thus, circulating levels of approximately 10 to 25 ng/ml are observed in the majority of patients exhibiting a satisfactory therapeutic response to digitoxin, while levels greater than 45 ng/ml are typical of patients with symptoms of digitoxin toxicity. 2,4,16 But concentrations higher than the conventional therapeutic range may be required to control certain arrhythmias. Conversely, circulating levels well below 45 ng/ml may give rise to symptoms of toxicity in patients rendered more sensitive to the drug's action by, for example, a lowered potassium level. Even so, the higher the circulating level, the more probable it is that clinical symptoms of toxicity can be attributed to the drug and the lower the level, the less likely. Serum determinations should supplement clinical judgment, not substitute for it. An isolated value should not be used as the sole criterion for the assessment of efficacy or toxicity; rather it should always be interpreted in the total clinical context. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Digitoxin is a solid-phase, competitive chemiluminescent enzyme immunoassay. Incubation Cycles: 1 30 minutes. Specimen Collection Collect blood into plain (without anticoagulant) or heparinized tubes, and separate the serum from the cells. The time of collection should be noted. To avoid misleadingly high digitoxin results, patient samples should be drawn just before the next dose or in any case no less than six hours after the administration of this cardiac glycoside. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. 2 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

3 Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Digitoxin has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum. Storage: 7 days at 2 8 C or 2 months at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Digitoxin Bead Pack (L2DG12) With barcode. 200 beads, coated with polyclonal rabbit anti-digitoxin antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KDG2: 1 pack. L2KDG6: 3 packs. Digitoxin Reagent Wedge (L2DGA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to digitoxin in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KDG2: 1 wedge. L2KDG6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Digitoxin Adjustors (LDGL, LDGH) Two vials (Low and High), 4 ml each, of digitoxin in processed human serum, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KDG2: 1 set. L2KDG6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) SDCM: Bi-level, multi-constituent control Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of digitoxin. IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 3

4 Therapeutic Range The following results are reported in the literature for therapeutic and toxic circulating levels of digitoxin. 16 ng/ml nmol/l Therapeutic Range Toxic Level >45 >59 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Many physiological, pharmacological, pathological and genetic factors may affect the interpretation of results (see the Summary and Explanation section). In cases of overdosage, specimens should be obtained before administering digoxin immune Fab antidote preparations (e.g. Digibind ) since these can be expected to interfere with any digitoxin immunoassay procedure. Once such a preparation has been administered, accurate determinations of digitoxin can be made only by specialized techniques (not routinely available in most clinical settings) until the Fab fragments have been eliminated from the body: this takes several days for patients with intact renal function, and a week or longer for patients with renal impairment. In addition to in vitro effects, these preparations, administered intravenously, cause a rapid rise in pharmacologically inactive, Fabbound, total circulating digitoxin that may be detected immunologically. 15 The presence of Uzara in the serum of patients can result in falsely elevated digitoxin results. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/ml nmol/l Calibration Range: 5 60 ng/ml ( nmol/l). Analytical Sensitivity: 1 ng/ml (1.3 nmol/l) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of multiple days, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with 3 digitoxin solutions (193, 385 and 770 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for digitoxin. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 600 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 20 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer plastic tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of 4 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

5 digitoxin, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Digitoxin procedure. (Heparin) = 0.90 (Serum) ng/ml r = (EDTA) = 0.89 (Serum) ng/ml r = (SST) = 1.07 (Plain Tubes) 0.07 ng/ml r = Means: 7.96 ng/ml (Serum) 7.46 ng/ml (Heparin) 7.50 ng/ml (EDTA) 8.48 ng/ml (SST) Method Comparison 1: The assay was compared to IMMULITE Digitoxin on 86 patient samples. (Concentration range: approximately 7 to 57 ng/ml. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000) = 0.97 (IML) 0.4 ng/ml r = 0.98 Means: 24.0 ng/ml (IMMULITE 2000) 25.1 ng/ml (IMMULITE) Method Comparison 2: The assay was also compared to Coat-A-Count Digitoxin radioimmunoassay on 89 patient samples. (Concentration range: approximately 5 to 55 ng/ml. See graph 2.) By linear regression: (IML 2000) = 1.04 (Coat-A-Count) 1.1 ng/ml r = 0.98 Means: 24.2 ng/ml (IMMULITE 2000) 24.1 ng/ml (Coat-A-Count) References 1) Aronson JK. Clinical pharmacokinetics of cardiac glycosides in patients with renal dysfunction. Clin Pharmacokinet 1983;8: ) Baer DM. Key points for interpretation of drug concentrations: digoxin and digitoxin. In: Baer DM, Dito WR, editors. Interpretations in therapeutic drug monitoring. Chicago: American Society of Clinical Pathologists, 1982: ) Bresnahan JF, Vlietstra RE. Digitalis glycosides. Mayo Clin Proc 1979;54: ) Dito WR. Cardiac glycosides and therapeutic drug monitoring. In: Baer DM, Dito WR, editors. Interpretations in therapeutic drug monitoring. Chicago: American Society of Clinical Pathologists, 1981: ) Fenster PE, et al. Digitoxin-quinidine interaction: pharmacokinetic evaluation. Ann Int Med 1980;93: ) Garty M. Digitoxin elimination reduced during quinidine therapy. Ann Int Med 1981;94: ) Kuemmell HC, et al. Studies to determine individual toxic doses of digitoxin. Munchener Med Wochenschr 1982;124: ) Kuhlmann J. Sources of digitalis intoxication. Med Klinik 1982;77: ) Larsen A, Storstein L. Digitoxin kinetics and renal excretion in children. Clin Pharmacol Ther 1983;33: ) Maier C, Kolenda KD. Digitoxin in the presence of hepatorenal failure. Deutsche Med Wochenschr 1983;108: ) Rietbrock N, Alken RG. The therapy of heart failure with digitalis. Deutsche Med Wochenschr 1980;105: ) Smith TW. Digitalis in the management of heart failure. Hosp Pract 1984 Mar;19(3): ) Smith TW, et al. Digitalis glycosides: mechanisms and manifestations of toxicity. Prog Cardiovasc Dis 1984;26: and ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Digoxin immune Fab. In: McEvoy GK, editor. AHFS Drug Information 92. American Society of Hospital Pharmacists, 1992: ) National Academy of Clinical Biochemistry. Guidelines for therapeutic drug monitoring services. Printed by Durik Advertising, Inc., 1999: Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 5

6 Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 2 in in % 3 4 in in % 1 in % 4 4 in in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 2 v 2. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 2 στα 2. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 2 w 2. Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. 6 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

7 Specificity Compound 1 ng/ml Added 2 % Crossreactivity 3 Digitoxin 100% Digoxin % Aldosterone 100, % Amikacin 100,000 ND Corticosterone 100, % Cortisol 100,000 ND Cortisone 100, % Dexamethasone 100,000 ND 11-Deoxycorticosterone 100, % Hydrocortisone 100, % Estradiol 100,000 ND Estriol 100,000 ND Methotrexate 100,000 ND Prednisolone 100,000 ND Prednisone 100,000 ND Pregnenolone 100,000 ND Progesterone 100, % Spironolactone 100, % Testosterone 100, % Tobramycin 100,000 ND ND: not detectable. 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności Krzyżowej, 4 ND: Nieoznaczlne. Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Digitoxin IMMULITE Digitoxin, ng/ml (IML 2000) = 0.97 (IML) 0.4 ng/ml r = 0.98 Method Comparison 2 IMMULITE 2000 Digitoxin CAC Digitoxin, ng/ml (IML 2000) = 1.04 (Coat-A-Count) 1.1 ng/ml r = 0.98 English. Digitoxin Česky. Digitoxin. Ελληνικά. Διγιτοξίνη. Polski. Digitoksyna. Česky IMMULITE 2000 Digitoxin Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace digitoxinu v séru, jakožto pomůcky při podávání tohoto kardioglykosidu z terapeutických důvodů. Katalogová čísla: L2KDG2 (200 stanovení), L2KDG6 (600 stanovení) Kód metody: DGT Barva: Červená Shrnutí a vysvětlení Digitoxin je dlouhodobě působící kardioglykosid používaný k léčbě městnavého srdečního selhání a některých arytmií. Strukturálně je shodný s digoxinem, má ale o jednu hydroxylovou skupinu méně. Protože digitoxin je méně polární, je i lépe absorbován a v daleko větším rozsahu cirkuluje navázaný na proteiny. V játrech je metabolizován na aktivní i neaktivní formu. Digitoxin má poměrně dlouhý poločas eliminace trvající 5 až 7 dní a s výjimkou nefrotického syndromu zůstává do značné míry nedotčen dysfunkcí ledvin. IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 7

8 Přechodný vrchol koncentrace digitoxinu souvisí s fází distribuce: poté se jeho množství v cirkulaci rovnoměrně a velmi pozvolně snižuje. Proto je třeba vzorky krve pro stanovení digitoxinu odebírat těsně před podáním další dávky v každém případě ale ne dřív něž za 6 hodin od dávky předešlé. Hladina digitoxinu v plazmě a tkáních se za tuto dobu opět dostane do rovnováhy. Stanovení digitoxinu v séru může pomoci ověřit vhodnost aplikace a případně upravit dávkování, čímž se dosáhne požadované koncentrace digitoxinu v plazmě. Sledování množství digitoxinu v cirkulaci je obzvláště cenné při enterohepatických a renálních komplikacích a během souběžné léčby preparáty jako je quinidin, které můžou ovlivňovat farmakokinetiku digitoxinu. Je však třeba mít na zřeteli, že vztah mezi množstvím digitoxinu v cirkulaci a klinickou odezvou se u jednotlivých osob značně liší, přičemž důvodem je zapojení různých faktorů. To se odráží ve značném překrývání terapeutických a toxických rozmezí udávaných v literatuře. U většiny pacientů s uspokojivou terapeutickou odezvou byla koncentrace digitoxinu v cirkulaci přibližně 10 až 25 ng/ml, zatímco pacienti se syndromem digitoxinové toxicity vykázali koncentrace vyšší než 45 ng/ml. 2,4,16 Koncentrace přesahující konvenční terapeutické rozmezí může být ale žádoucí při regulaci některých arytmií. A naopak, množství digitoxinu v cirkulaci hodně pod 45 ng/ml může vyvolat toxické příznaky u pacientů citlivějších na některé z doprovodných účinků digitoxinu například sníženou hladinu draslíku. Platí, že čím vyšší je koncentrace digitoxinu v cirkulaci, tím je pravděpodobnější, že toxické příznaky způsobil právě tento preparát, a čím je cirkulujícího digitoxinu méně, tím je to méně pravděpodobné. Stanovení digitoxinu v séru by mělo být doplňkem klinického hodnocení a ne jeho náhradou. Samotná hodnota koncentrace digitoxinu se nedá použít jako jediné kritérium při hodnocení účinnosti léčby nebo toxicity, ale vždy je třeba ji interpretovat v celkovém klinickém kontextu. Princip stanovení Stanovení Digitoxin na analyzátorech IMMULITE 2000 je konkurenční chemiluminiscenční enzymová imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly: 1 30 minut. Odebírání vzorků Krev odeberte do obyčejných zkumavek (bez prostředků proti srážlivosti) nebo heparinizovaných zkumavek a oddělte sérum od buněk. Poznamenejte čas odběru. Zavádějícím vysokým hodnotám koncentrace digitoxinu zamezíte, když vzorek odeberete těsně před podáním další dávky v každém případě ale ne dřív něž za 6 hodin od podání tohoto kardioglykosidu. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Digitoxin na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 10 µl séra. Skladování: 7 dní při teplotě 2 8 C nebo 2 měsíce při teplotě 20 C. 8 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

9 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovými kódy na krabici. Digitoxin zásobník s kuličkami (L2DG12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených polyklonální králičí protilátkou proti digitoxinu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KDG2: 1 balení. L2KDG6: 3 balení. Digitoxin reagencie (L2DGA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s digitoxinem, v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KDG2: 1 nádobka. L2KDG6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Digitoxin kalibrátory (LDGL, LDGH) Dvě ampulky po 4 ml s vysokou a nízkou koncentrací digitoxinu ve zpracovaném lidském séru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KDG2: 1 sada. L2KDG6: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) SDCM: Dvojúrovňová vícesložková kontrola Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) digitoxinu. Terapeutické rozmezí V literatuře se uvádí následující hodnoty terapeutických a toxických koncentrací digitoxinu v cirkulaci: 16 ng/ml nmol/l Terapeutické rozmezí Toxická koncentrace >45 >59 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 9

10 Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Vyhodnocení výsledků může být ovlivněno četnými fyziologickými, farmakologickými, patologickými a genetickými faktory (viz část Shrnutí a vysvětlení). V případě předávkování je vzorky třeba odebrat před podáním Fab protilátky proti digoxinu (např. Digibind ), protože tato pravděpodobně může interferovat se všemi imunologickými testy ke stanovení digitoxinu. Po podání takového přípravku je správné určení množství digitoxinu možné pouze specializovanou metodou (která na většině klinik není běžně k dispozici), až do vyloučení Fab fragmentů z těla: to u pacienta s neporušenou funkcí ledvin trvá několik dní a asi týden a déle u pacienta s poškozením ledvin. Vedle vlivu in vitro způsobují tyto preparáty, po intravenózním podání, rychlý nárůst množství farmakologicky neaktivního, na Fab navázaného, celkového digitoxinu v cirkulaci, který lze imunologicky stanovit. 15 Přítomnost preparátu Uzara v séru může způsobit falešné zvýšenou koncentraci digitoxinu. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor: ng/ml 1,307 nmol/l Kalibrační rozsah: 5 60 ng/ml (6,5 78 nmol/l). Analytická citlivost: 1 ng/ml (1,3 nmol/l) Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu několika dní, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearita.) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků digitoxinu (193, 385 a 770 ng/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Zpětná výtěžnost.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči digitoxinu. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 600 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: Ke zhodnocení vlivu alternativních typů vzorku byla odebrána krev od 20 dobrovolníků do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer plastových zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byl přidán roztok digitoxinu různých koncentrací, aby byly získány hodnoty napříč celým kalibračním rozsahem stanovení. Ke stanovení byl použit test Digitoxin na analyzátorech IMMULITE (Heparin) = 0,90 (Sérum) + 0,26 ng/ml r = 0,987 (EDTA) = 0,89 (Sérum) + 0,39 ng/ml r = 0, IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

11 (SST) = 1,07 (obyčejné zkumavky) 0,07 ng/ml r = 0,975 Střední hodnoty: 7,96 ng/ml (Sérum) 7,46 ng/ml (Heparin) 7,50 ng/ml (EDTA) 8,48 ng/ml (SST) Srovnání metody 1: Stanovení bylo porovnáno s testem Digitoxin na analyzátoru IMMULITE na 86 vzorcích od pacientů. (Koncentrační rozsah: přibližně 7 až 57 ng/ml. Viz graf 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 0,97 (IML) 0,4 ng/ml r = 0,98 Střední hodnoty: 24,0 ng/ml (IMMULITE 2000) 25,1 ng/ml (IMMULITE) Srovnání metody 2: Stanovení bylo rovněž porovnáno s radioimunologickým testem Digitoxin Coat-A-Count na 89 vzorcích od pacientů. (Koncentrační rozsah: přibližně 5 až 55 ng/ml. Viz graf 2.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) 1,1 ng/ml r = 0,98 Střední hodnoty: 24,2 ng/ml (IMMULITE 2000) 24,1 ng/ml (Coat-A-Count) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Διγιτοξίνη Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό των τιμών διγιτοξίνης στον ορό, ως βοήθημα στην παρακολούθηση της φαρμακευτικής αγωγής με αυτή την καρδιακή γλυκοσίδη. Αριθμοί καταλόγου: L2KDG2 (200 εξετάσεις), L2KDG6 (600 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: DGT Χρώμα: Κόκκινο Περίληψη και επεξήγηση Η διγιτοξίνη είναι μια μακράς δράσης καρδιακή γλυκοσίδη, η οποία χρησιμοποιείται για τη θεραπεία της συγγενούς καρδιακής ανεπάρκειας και ορισμένων τύπων αρρυθμίας. Είναι δομικά ταυτόσημη με τη διγοξίνη, με εξαίρεση την απουσία μιας απλής υδροξυλικής ομάδας. Όντας λιγότερο πολική, η διγιτοξίνη απορροφάται εντελώς και κυκλοφορεί σε μεγαλύτερη έκταση δεσμευμένη σε πρωτεΐνες. Μεταβολίζεται πιο εκτεταμένα στο ήπαρ, τόσο στις ενεργές όσο και στις ανενεργές της μορφές. Η διγιτοξίνη έχει σχετικά μεγαλύτερη διάρκεια ημιζωής, από 5 έως 7 ημέρες, και με εξαίρεση τις περιπτώσεις νεφρωτικού συνδρόμου δεν επηρεάζεται παρά ελάχιστα από τις νεφρικές δυσλειτουργίες. Η παροδική κορύφωση συνδέεται με τη φάση διάχυσης. Στη συνέχεια, τα επίπεδα κυκλοφορίας παρουσιάζουν σταθερή και πολύ σταδιακή μείωση. Συνεπώς, τα δείγματα αίματος για την ανάλυση διγιτοξίνης θα πρέπει να συλλέγονται λίγο πριν την επόμενη δόση ή σε κάθε περίπτωση το πολύ έως 6 ώρες μετά τη χορήγηση της δόσης, ώστε να επέλθει ισορροπία στα επίπεδα πλάσματος και ιστών. Ο καθορισμός του ορού μπορεί να συμβάλει στην επιβεβαίωση της συμμόρφωσης και τη ρύθμιση της δόσης, ώστε να επιτευχθούν οι επιθυμητές συγκεντρώσεις στο πλάσμα. Η παρακολούθηση των επιπέδων κυκλοφορούσας διγιτοξίνης είναι ιδιαίτερα πολύτιμη εκεί όπου παρουσιάζονται εντεροηπατικές ή νεφρικές επιπλοκές, καθώς και στις περιπτώσεις ταυτόχρονης χορήγησης φαρμάκων, όπως η κινιδίνη, η οποία μπορεί να επηρεάσει τις φαρμακοκινητικές ιδιότητες της διγιτοξίνης. Να θυμάστε, ωστόσο, ότι η σχέση μεταξύ των κυκλοφορούντων επιπέδων και της κλινικής ανταπόκρισης διαφέρει από άτομο σε άτομο λόγω πολλών παραγόντων, οι οποίοι μελετώνται. Αυτό αντανακλάται στη σημαντική επικάλυψη μεταξύ του θεραπευτικού και του τοξικού εύρους, όπως συνοψίζεται στη βιβλιογραφία. IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 11

12 Συνεπώς, επίπεδα κυκλοφορίας περίπου 10 έως 25 ng/ml παρατηρούνται στην πλειοψηφία των ασθενών με ικανοποιητική θεραπευτική ανταπόκριση, ενώ επίπεδα υψηλότερα από 45 ng/ml παρατηρούνται συνήθως σε ασθενείς με σύνδρομο τοξικότητας στην διγιτοξίνη. 2,4,16 Ωστόσο, είναι δυνατό να απαιτούνται συγκεντρώσεις άνω του συμβατικού θεραπευτικού εύρους, προκειμένου να αντιμετωπιστούν ορισμένες αρρυθμίες. Αντιστρόφως, επίπεδα κυκλοφορίας χαμηλότερα από 45 ng/ml είναι δυνατό να προκαλέσουν συμπτώματα τοξικότητας σε ασθενείς, οι οποίοι παρουσιάζουν μεγαλύτερη ευαισθησία στο φάρμακο, για παράδειγμα εξαιτίας των χαμηλότερων επιπέδων καλίου. Ακόμη και σε αυτή την περίπτωση, όσο υψηλότερα είναι τα επίπεδα κυκλοφορίας τόσο πιθανότερη είναι η εμφάνιση κλινικών συμπτωμάτων τοξικότητας, ενώ όσο χαμηλότερα είναι τα επίπεδα τόσο απομακρύνεται αυτή η πιθανότητα. Ο καθορισμός των τιμών στον ορό θα πρέπει να συμπληρώνει την κρίση του γιατρού και όχι να την υποκαθιστά. Μια μεμονωμένη τιμή δεν επαρκεί ως μοναδικό κριτήριο για την αξιολόγηση του θεραπευτικού αποτελέσματος ή της τοξικότητας. Αντιθέτως, θα πρέπει να ερμηνεύεται εντός του γενικότερου κλινικού πλαισίου. Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Διγιτοξίνη είναι μια στερεής φάσης ανταγωνιστική, χημειοφωταυγής, ενζυμική ανοσοανάλυση. Κύκλοι επώασης: 1 x 30 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συλλογή δειγμάτων αίματος σε απλούς (χωρίς αντιπηκτικά) ή ηπαρινισμένους σωλήνες με διαχωρισμό του ορού από τα κύτταρα. Να σημειώνεται ο χρόνος συλλογής. Για να αποφύγετε τα παραπλανητικά υψηλά αποτελέσματα διγιτοξίνης, τα δείγματα των ασθενών πρέπει να λαμβάνονται λίγο πριν τη χορήγηση της επόμενης δόσης και σε κάθε περίπτωση όχι μετά το πέρας των έξι ωρών από τη χορήγηση αυτής της καρδιογλυκοσίδης. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Διγιτοξίνη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορού. Φύλαξη: 7 μέρες στους 2 8 C ή 2 μήνες στους 20 C. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί 12 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

13 ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ένα ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων διγιτοξίνης (L2DG12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με πολυκλωνικό αντίσωμα αντί-διγιτοξίνης κουνελιού. Σταθερά στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KDG2: 1 συσκευασία. L2KDG6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίων διγιτοξίνης (L2DGA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συζευγμένης με διγιτοξίνη, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερά στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KDG2: 1 δοχείο. L2KDG6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές διγιτοξίνης (LDGL, LDGH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), έκαστο 4,0 ml, διγιτοξίνης σε επεξεργασμένο ανθρώπινο ορό, με συντηρητικό. Σταθεροί στους 2 8 C επί 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή επί 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2KDG2: 1 σετ. L2KDG6: 2 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) SDCM: Δύο επιπέδων, πολυπαραμετρικός έλεγχος Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) διγιτοξίνης. Θεραπευτικό εύρος Τα ακόλουθα αποτελέσματα αναφέρονται στη βιβλιογραφία, όσον αφορά τα θεραπευτικά και τοξικά επίπεδα κυκλοφορούσας διγιτοξίνης. 16 ng/ml nmol/l Θεραπευτικό εύρος Τοξικά επίπεδα >45 >59 Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Πολλοί φυσιολογικοί, φαρμακολογικοί, παθολογικοί και γενετικοί παράγοντες είναι δυνατό να επηρεάσουν την ερμηνεία των αποτελεσμάτων (βλ. Περίληψη και επεξήγηση). IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 13

14 Σε περίπτωση υπερδοσολογίας, δείγματα πρέπει να λαμβάνονται πριν τη χορήγηση αντιδότων με αντισώματα Fab κατά της διγιτοξίνης (π.χ. Digibind ), εφόσον τα τελευταία αναμένεται να επηρεάσουν τη διαδικασία ανοσοανάλυσης διγιτοξίνης. Μετά τη χορήγηση αυτού του σκευάσματος, ακριβείς μετρήσεις διγιτοξίνης μπορούν να διενεργηθούν μόνον με εξειδικευμένες τεχνικές (οι οποίες δεν είναι διαθέσιμες στις συνήθεις κλινικές συνθήκες), έως ότου τα τμήματα αντισωμάτων Fab αποβληθούν από τον οργανισμό: αυτό απαιτεί αρκετές ημέρες για ασθενείς με φυσιολογική νεφρική λειτουργία και μία εβδομάδα ή περισσότερο για ασθενείς με νεφρική ανεπάρκεια. Εκτός από τα in vitro αποτελέσματα, αυτά τα σκευάσματα, χορηγούμενα ενδοφλεβίως, προκαλούν ταχεία αύξηση της φαρμακολογικά ανενεργούς, δεσμευμένης σε Fab, ολικής κυκλοφορούσας διγιτοξίνης, η οποία μπορεί να εντοπιστεί ανοσολογικά. 15 Η παρουσία Uzara στον ορό του ασθενούς μπορεί να δώσει παραπλανητικά αυξημένα επίπεδα διγιτοξίνης. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας μετατροπής: ng/ml 1,307 nmol/l Εύρος καμπύλης: 5 60 ng/ml (6,5 78 nmol/l). Αναλυτική ευαισθησία: 1 ng/ml (1,3 nmol/l) Ακρίβεια: Για αρκετές ημέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διάφορες αραιώσεις. (Βλ. πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα). Ανάκτηση: Ορισμένα δείγματα (1 έως 19) εμπλουτίστηκαν με 3 διαλύματα διγιτοξίνης (193, 385 και 770 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή εξειδίκευση στη διγιτοξίνη. (Βλ. πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης (συνδεδεμένης και έμμεσης) σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 600 mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικός τύπος δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 20 εθελοντές σε απλούς, ηπαρινισμένους, EDTA και Becton Dickinson SST πλαστικούς δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες συγκεντρώσεις διγιτοξίνης, ώστε να ληφθούν τιμές καθ' όλο το εύρος 14 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

15 καμπύλης της ανάλυσης, και στη συνέχεια εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία της IMMULITE 2000 Διγιτοξίνης. (Ηπαρίνη) = 0,90 (Ορός) + 0,26 ng/ml r = 0,987 (EDTA) = 0,89 (Serum) + 0,39 ng/ml r = 0,973 (SST) = 1,07 (Απλά σωληνάρια) 0,07 ng/ml r = 0,975 Μέσοι όροι: 7,96 ng/ml (Ορός) 7,46 ng/ml (Ηπαρίνη) 7,50 ng/ml (EDTA) 8,48 ng/ml (SST) Σύγκριση της μεθόδου 1: Η ανάλυση συγκρίθηκε με την ανάλυση IMMULITE Διγιτοξίνη σε 86 δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 7 έως 57 ng/ml, βλ. Γράφ 1.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,97 (IML) 0,4 ng/ml r = 0,98 Μέσοι όροι: 24,0 ng/ml (IMMULITE 2000) 25,1 ng/ml (IMMULITE) Σύγκριση της μεθόδου 2: Η ανάλυση συγκρίθηκε επίσης με την ραδιοανάλυση Coat-A-Count Διγιτοξίνη σε 89 δείγματα ορού ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 5 έως 55 ng/ml, βλ. Γράφ 2.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,04 (Coat-A-Count) 1,1 ng/ml r = 0,98 Μέσοι όροι: 24,2 ng/ml (IMMULITE 2000) 24,1 ng/ml (Coat-A-Count) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Digitoksyna Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia poziomu digitoksyny w surowicy, przydatny w trakcie leczenia glikozydami nasercowymi. Numery katalogowe: L2KDG2 (200 testów), L2KDG6 (600 testów) Kod testu: DGT Kolor: Czerwony Wprowadzenie Digitoksyna jest długodziałającym glikozydem nasercowym stosowanym w leczeniu nadkomorowej niewydolności serca i w niektórych arytmiach. Strukturalnie jest identyczna z digoksyną z wyjątkiem braku pojedynczej grupy hydroksylowej. Ze względu na mniejszą polarność lepiej się wchłania i krąży w znacznie większym stopniu w formie związanej z białkami. W wątrobie podlega intensywnemu metabolizmowi do form: aktywnej nieaktywnej. Czas półtrwania digitoksyny, stosunkowo długi, wynosi od 5 do 7 dni i z wyjątkiem zespołu nerczycowego na ogół nie zależy od wydolności nerek. Przejściowe maksimum stężenia ziwązane jest z fazą rozprowadzania leku, następnie poziom w krążeniu wyrównuje się i powoli, stopniowo obniża. Dlatego próbki krwi dla oznaczania stężenia digitoksyny powinny być pobierane tuż przed przyjęciem następnej dawki, a w każdym razie, nie wcześniej niż 6 godzin po przyjęciu poprzedniej dawki leku. Pozwola to na ustalenie równowagi pomiędzy poziomami w osoczu i tkankach. Oznaczenie poziomu leku w surowicy jest przydatne dla ustalenia dawki leku, która pozwoli na osiągnięcie wymaganego stężenia w osoczu. Monitorowanie digitoksyny w krążeniu jest szczególnie przydatne u osób z komplikacjami ze strony wątroby (zapalenie) i nerek, jak również przy równoczesnej terapii takimi lekami jak guanidyna, która wywiera wpływ na farmakokinetykę digitoksyny. IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 15

16 Równocześnie jednak trzeba pamiętać, że zależność pomiędzy poziomem leku w krążeniu i odpowiedzią kliniczną różni się znacznie u poszczególnych osób przyjmujących lek ze względu na wpływ wielu współistniejących czynników. Znajduje to wyraz w znacznym nakładaniu się zakresów terapeutycznych i toksycznych przedstawianych w piśmiennictwie. I tak, u większości chorych satysfakcjonującą odpowiedź terapeutyczną na digitoksynę obserwuje się przy stężeniu leku w granicach ng/ml, natomiast poziomy większe niż 45 ng/ml są typowe dla osób z objawami zatrucia tym glikozydem. 2,4,16 Równocześnie jednak stężenia przewyższające zwyczajowe zakresy terapeutyczne mogą być niezbędne do opanowania niektórych przypadków arytmii. I odwrotnie, stężenia poniżej 45 ng/ml, mogą dawać objawy zatrucia digitoksyną u osób ze zwiększoną podatnościa na działanie leku - na przykład ze względu na niski poziom potasu. Niemniej jednak, im wyższe stężenie digitoksyny w krążeniu, tym bardziej prawdopodobne jest, że kliniczne objawy zatrucia związane są z obecnością leku w organizmie, im niższe, tym mniej prawdopodobne. Oznaczenie leku w surowicy powinno uzupełniać, a nie zastępować ocenę kliniczną. Pojedyncze oznaczenie nie może być traktowane jako jedyne kryterium uznania dawki za wystarczajacą lub toksyczną. Interpretacja wyniku powinna być zawsze połączona z całościowym obrazem klinicznym. Zasada testu IMMULITE 2000 Digitoksyna jest immunoenzymatycznym, chemiluminescencyjnym, testem kompetycyjnym fazy stałej. Czas inkubacji: 1 x 30 minut. Preparatyka próbek Krew należy pobierać do probówek zwykłych (bez antykoagulanta) lub probówek heparynowych, następnie oddzielać krwinki od surowicy. Należy notować czas pobrania materiału. Dla uniknięcia fałszywie wysokich wyników digitoksyny próbki krwi powinny być pobierane tuż przed przyjęciem następnej dawki, a w każdym razie, nie wcześniej niż sześć godzin po przyjęciu poprzedniej dawki leku. Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Digitoksyna nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 10 µl surowicy. Przechowywanie materiału: 7 dni w 2 8 C lub 2 miesiące w 20 C. Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl dodawany jest jako konserwant. 16 IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, )

17 Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu stanowią komplet. Zestaw działa w oparciu o kod kreskowy. Digitoksyna Pojemnik z kulkami (L2DG12) kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-digitoksyna. Stabilne 2 8 C do daty ważności. L2KDG2: 1 pojemnik. L2KDG6: 3 pojemniki. Digitoksyna Klin Odczynnikowy (L2DGA2) Z kodem kreskowym ml fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) związanej z digitoksyną w buforze. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KDG2: 1 klin. L2KDG6: 3 kliny. Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Digitoksyna Kalibratory (LDGL, LDGH) Dwie fiolki (Niski i Wysoki) zawierające po 4 ml teofiliny w preparowanej surowicy ludzkiej, z konserwantem. Po otwarciu stabilne w 2 8 C przez 30 dni lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2KDG2: 1 zestaw. L2KDG6: 2 zestaw. Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały Dostarczane Oddzielnie L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący igłę pipetora LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) SDCM: Dwupoziomowa multikontrola Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie. Próbki Kontrolne: stosować kontrole lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie digitoksyny. Zakres terapeutyczny W piśmiennictwie przytaczane są poniższe terpautyczne i toksyczne poziomy krążącej digitoksyny. 16 ng/ml nmol/l Zakres terapeutyczny Poziom toksyczny >45 >59 Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Szereg czynników fizjologicznych, farmakologicznych, patologicznych i genetycznych może wpływać na interpretację wyników (patrz rozdział Wprowadzenie). W przypadku przedawkowania leku próbki do badania powinny być pobierane przed podaniem antidotum zawierającego fragmenty Fab (np. Digibind ), ze względu IMMULITE 2000 Digitoxin (PIEL2KDG-1 {6}, ) 17