LBP. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 LBP For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 LBP English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of lipopolysaccharide binding protein (LBP) in serum or plasma, as an aid in the diagnosis and prognosis of diseases that are induced by exposure to endotoxin, such as sepsis and infectious complications of surgery and trauma. Catalog Numbers: L2KLB2 (200 tests) Test Code: LBP Color: Brown Summary and Explanation Endotoxins (lipopolysaccharides and lipooligosaccharides; LPS and LOS) produced by gram-negative bacteria represent potent triggers of the inflammatory response, stimulating the production of proinflammatory cytokines (eg., IL-6, TNF, IL-8) by monocytes, endothelial cells, granulocytes and lymphocytes. 1,2,3 The recognition of LPS by effector cells is greatly enhanced through the function of lipopolysaccharide binding protein (LBP), an acute phase protein that binds and recruits the endotoxin to the surface of these cells. 3 LBP is structurally related to the bactericidal/permeability-increasing protein (BPI), a glycoprotein produced in the azurophilic granules of polymorphonuclear leukocytes that kills bacteria and neutralizes as well as clears endotoxin. 4 Due to its critical position in the early response to bacteria and endotoxin, the plasma levels of LBP have been investigated in numerous human populations. In normal individuals, LBP is present in plasma at concentrations between 2 and 10 µg/ml. 5 In some patient populations, LBP levels can exceed 100 µg/ml and may persist for several days. Elevated plasma levels of LBP have been reported in patients with sepsis, 3,6-11 abdominal infections, 10 meningococcemia, 10 SIRS, 12 ulcerative colitis, 10 Crohn's disease, 10 hemolytic uremic syndrome, 13 and cardiopulmonary bypass patients. 14 Injection of endotoxin into healthy volunteers also causes a rise in LBP levels, 6 and longitudinal sampling from liver surgery patients or patients with hemorrhage due to trauma also show elevated LBP levels within 24 hours of the original insult. 10 LBP levels do not appear to be elevated in patients with inflammatory disorders. 6,10 For these reasons, it has been suggested that LBP levels may be indicative of exposure to bacteria or endotoxin and prognostic of disease progression, and may provide a new tool for monitoring patient therapy and long-term patient management. 10,15 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 LBP is a solid-phase, enzyme-labeled chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-lbp antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-lbp antibody. The prediluted patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, lipopolysaccharide binding protein (LBP) in the sample forms the antibody sandwich complex with monoclonal murine anti-lbp antibody on the bead and enzyme conjugated polyclonal rabbit anti- LBP antibody in the reagent. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes. Time to First Result: 35 minutes. Specimen Collection Lipemic or grossly contaminated samples may give erroneous results. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt 2 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

3 by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 LBP has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 5 µl serum or plasma. After automatic sample predilution, 5 µl is used for the immunoassay. Storage: 3 days at 2 8 C, or 1 month (aliquotted) at 20 C. 16 Automatic Predilution Factor: 100 Dispense required volume of diluent (L2LBZ) to a suitable test tube with barcode label applied. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H412 P273, P501 Harmful to aquatic life with long lasting effects. Avoid release to the environment. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: 2-methyl-2Hisothiazol-3-one; LBP Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. LBP Bead Pack (L2LB12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-lbp antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KLB2: 1 pack. LBP Reagent Wedge (L2LBA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-lbp antibody in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KLB2: 1 wedge. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. LBP Adjustors (LLBL, LLBH) 6 vials (Low and High) of lyophilized LBP in a protein/buffer matrix. Reconstitute each vial by adding 1.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion. Stable at 20 C for 30 days (aliquotted) after reconstitution. Once reconstituted or thawed, Adjustors must be used within 4 hours. Do not refreeze. No further dilution is required. L2KLB2: 1 set. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. LBP Sample Diluent (L2LBZ) For the on-board dilution of patient samples. 50 ml of a concentrated (ready-to-use) LBP-free protein/buffer IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 3

4 matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KLB2: 2 vials. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KLB2: 6 labels. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LLBCM: LBP Control Module (bi-level, protein-based) Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of LBP. Expected Values A study performed with IMMULITE 2000 LBP on 151 apparently healthy volunteers yielded a mean of 5.4 µg/ml, a 95th percentile of 8.0 µg/ml and an absolute range of 2.2 µg/ml to 11.4 µg/ml. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in µg/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: µg/ml Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A 17 ): 0.8 µg/ml. Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A 17 ): 1.2 µg/ml. Functional Sensitivity (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP5-A2 18 ): 1.5 µg/ml High-dose Hook Effect: None up to 15,943 µg/ml. Precision: Samples were assayed in duplicate in 40 runs for a total of 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with 3 LBP solutions (265, 1,060 and 2,120 µg/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) 4 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

5 Specificity: The antibody is highly specific for LBP. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 500 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl, may interfere with the assay, causing a slight depression of values. (see Lipemia table for representative data). Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 55 volunteers into plain, lithium-heparin, EDTA, plasma gel barrier PST tubes and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of LBP, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 LBP procedure. (Li-Heparin) = 0.99 (Serum) µg/ml r = (EDTA) = 0.99 (Serum) 0.04 µg/ml r = (SST) = 0.98 (Serum) µg/ml r = (PST) = 0.98 (Serum) µg/ml r = Means: 33.2 µg/ml (Li-Heparin) 32.6 µg/ml (EDTA) 32.8 µg/ml (PST) 32.8 µg/ml (SST) 32.8 µg/ml (Serum) Method Comparison: The assay was compared to IMMULITE/IMMULITE 1000 LBP on 137 patient samples. (Concentration range: approximately 2.63 to 153 µg/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.06 (IML) µg/ml r = Means: 32.4 µg/ml (IMMULITE 2000) 30.4 µg/ml (IMMULITE) References 1) Rietschel E, Holst O, Brade L, Muller-Loennis S, Mamat U, Zahringer U, Beckmann F. Bacterial endotoxin: chemical constitution, biological recognition host response and immunological detoxification. Curr Top Microbiol Immunol. 1996; 216: ) Remick D. Applied molecular biology of sepsis. J Crit Care. 1995; 10(4): ) Ulevitch R, Tobias. Receptor-dependent mechanisms of cell stimulation by bacterial endotoxin. Ann Rev Immunol : ) Elsbach P, Weiss J. Prospects for use of recombinant BPI in the treatment of gram-negative bacteria infections. Infect Agents Dis : ) Meszaros K, Aberle S, White M, Parent, JB Immunoreactivity and bioactivity of lipopolysaccharide binding protein in normal and heat-inactivated sera. Infection and Immunity, 63(1), ) White ML, Ma JK, Mendoza NT, Dedrick, RL, Carroll, SF Differential acute phase response between subjects with inflammatory, infectious and non-infectious diseases. Abstracts of the 35 th ICAAC, p ) Schumann RR, Gramm HJ, Zweigner J, Kirschning C Unbehaun A, Fiedler G, Lamping N, Pfeil D, Reuter D, Hechenberger M, Herrmann F High levels of lipopolysaccharide binding protein (LBP) in patients with septic shock correlate with poor outcome. Abstracts of the 35 th ICAAC, p ) Froon AMH, Dentener MA, Greve JWG, Ramsay G, Buurman WA Lipopolysaccharide toxicity-regulating proteins in bacteremia. Journal of Infections Disease 171: ) Heumann D, Lengacher S, Le Roy D, Jongeneel CV and Glauser MP. The pathogenic role of LBP in gram-negative sepsis and septic shock. Prog Clin Biol Res : ) Carroll SF, Dedrick RL, White ML Plasma levels of lipopolysaccharide binding protein (LBP) correlate with outcome in sepsis and other patients. Sixth Vienna Shock Forum. Abs ) Opal SM, Scannon PJ, Vincent JL, White M, Carroll SF, Palardy JE, Parejo NA, Pribble JP, Lemke JH The relationship between plasma levels of LPS and LPS-binding protein in patients with severe sepsis and septic shock. Journal of Infectious Disease 180: ) Myc A, Buck J, Gonin J, Reynolds B, Hammerling U, Emanuel D The level of lipopolysaccharide binding protein is significantly increased in plasma from patients with the systemic inflammatory response syndrome. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 4: ) Proulx F, Seidman E, Mariscalco MM, Lee K, Carroll SF Increased circulating levels of lipopolysaccharide binding protein in children with Escherchia coli hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 6: ) Bouma M, Maessen J, Weerwind P, Dentener M, Fransen E, de Jong D, Buurman W Release of lipopolysaccharide toxicity- IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 5

6 modulating proteins in patients undergoing cardiopulmonary bypass using noncoated and heparin-coated extracorporeal circuits. Chest 111: ) Schumann RR, Zweigner J A novel acute-phase marker: lipopolysaccharide binding protein (LBP). Clinical Chemistry & Laboratory Medicine 37: ) Data on file. 17) CLSI. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol. 24 (No. 34). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, ) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition. CLSI document EP5- A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (µg/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Linearity (µg/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 6 in % 5 in % 4 in % 3 in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. 6 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

7 Recovery (µg/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Specificity Compound 1 Amount Added 2 µg/ml Apparent 3 U/mL % Crossreactivity 4 Serum Amyloid A 2,500 ND ND IL-6 4,225 ND ND IL ND ND TNFα 5,000 ND ND CRP 7,500 ND ND rbpi 21 * 5,000 ND ND ND: not detectable. 5 * Recombinant bactericidal/permeability increasing-protein 6 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné, 6 Rekombinantní baktericidní/permeabilitu zvyšující protein. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % Διασταυρ.Αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα, 6 Ανασυνδυαζόμενη πρωτεϊνη βακτηριδιοκτόνου δράσης/αυξανόμενης διαπερατότητας. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Ilość stwierdzona, 4 % reaktywności krzyżowej, 5 Nieoznaczlne, 6 Rekombinant białka bakteriobójczego/zwiększającego przepuszczalność błon. Lipemia (µg/ml) Triglycerides added 1 (mg/dl) Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 Neat % 1, % 2, % 3, % 2 Neat % 1, % 2, % 3, % 3 Neat % 1, % 2, % 3, % 4 Neat % 1, % 2, % 3, % 5 Neat % 1, % 2, % 3, % Česky. 1 Přidané triglyceridy, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná, 5 Čistá. Ελληνικά. 1 Προστιθέμενα τριγλυκερίδια, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 Καθαρή. Polski. 1 Dodane trójglicerydy, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 %Z/O, 5 Wyjściowa. IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 7

8 Method Comparison IMMULITE 2000 LBP IMMULITE/IMMULITE 1000 LBP, µg/ml (IML 2000) = 1.06 (IML) µg/ml r = English. LBP Česky. LBP. Ελληνικά. LBP. Polski. LBP. Česky IMMULITE 2000 LBP Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke kvantitativnímu stanovení koncentrace lipopolysacharid vázajícího proteinu (LBP) v séru nebo plazmě, jakožto pomůcky při diagnóze a prognóze onemocnění, které jsou vyvolané kontaktem s endotoxinem, jako jsou sepse a infekční komplikace operací a trauma. Katalogové číslo: L2KLB2 (200 stanovení) Kód metody: LBP Barva: Hnědá Shrnutí a vysvětlení Endotoxiny (lipopolysacharidy a lipooligosacharidy, LPS a LOS) tvořené gramnegativními bakteriemi jsou vysoce účinné spouštěče zánětové odpovědi, stimulující tvorbu prozánětových cytokinů (např. IL-6, TNF, IL-8) monocyty, endoteliálními buňkami, granulocyty a lymfocyty. 1,2,3 Rozpoznání LPS efektorovými buňkami je výrazně zvýšeno prostřednictvím funkce lipopolysacharid vázajícího proteinu (LBP), proteinu akutní fáze, který váže a přivádí endotoxin na povrch těchto buněk. 3 Struktura LBP je příbuzná se strukturou baktericidního/permeabilitu zvyšujícího proteinu (BPI), glykoproteinu tvořeného azurofilními granulemi polymorfonuklearních leukocytů, který zabíjí bakterie a neutralizuje a také čistí endotoxin. 4 Množství LBP v plazmě bylo zkoumáno u četných skupin obyvatel, protože zaujímá významné postavení při časné odpovědi na baktérie a endotoxin. U zdravých jedinců se LBP v plazmě vyskytuje v koncentracích mezi 2 a 10 μg/ml. 5 U některých skupin pacientů může množství LBP přesáhnout 100 μg/ml a přetrvat i několik dní. Zvýšená hladina LBP v plazmě byla zjištěna u pacientů se sepsí, 3,6-11 břišní infekcí, 10 meningokokémií, 10 SIRS, 12 ulcerativní kolitidou, 10 Crohnovou nemocí, 10 hemolytickým uremickým syndromem 13 a u pacientů s kardiopulmonárním bypassem. 14 Endotoxin podaný zdravým dobrovolníkům injekčně může rovněž způsobit nárůst koncentrace LBP. 6 Longitudinální odběr vzorků od pacientů po operaci jater nebo pacientů s krvácením způsobeným šokem rovněž prokázal zvýšené množství LBP během 24 hodin od původního poškození. 10 Zdá se, že koncentrace LBP se nezvyšuje u pacientů se zánětlivými poruchami. 6,10 Z těchto důvodů se jeví, že množství LBP může indikovat kontakt s bakteriemi nebo endotoxiny, předpovídat vývoj onemocnění a může tak představovat nový nástroj pro monitorování léčby a dlouhodobou péči o pacienty. 10,15 Princip Stanovení IMMULITE 2000 LBP je enzymové imunometrické stanovení s enzymem vázaným na chemilumiscent, v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší protilátkou proti LBP Kapalná fáze se sestává z alkalické fosfatázy (telecího střeva) konjugované k polyklonální králičí protilátce proti LBP Naředěné vzorky pacienta a činidlo jsou inkubovány s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. Během této doby, lipopolysacharid, který váže protein (LBP) ve vzorku, formuje protilátkový sendvičový komplex s monoklonální myší protilátkou proti LBP u kuličky a enzym konjuguje k polyklonální králičí protilátce proti LBP v činidle. Nenavázané vzorky a konjugované enzymy jsou pak odstraněny centrivugálním propláchnutím. Nakonec, chemiluminescentní substrát je přidán do testovací jednotky, která obsahuje kuličku 8 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

9 a signál je stanoven úměrně k vázanému enzymu. Inkubační cykly: 1 30 minut. Čas do prvního výsledku: 35 minut. Odebírání vzorků Lipemické nebo značně kontaminované vzorky mohou poskytovat chybné výsledky. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení LBP na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 5 µl séru nebo plazmě. Po automatickém předředění vzorku se pro stanovení použije 5 µl. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 1 měsíc při teplotě 20 C. 16 Faktor automatického předředění: 100 Požadované množství diluentu (L2LBZ) dejte do vhodné testovací zkumavky s nalepeným štítkem s čárovým kódem. Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. UPOZORNĚNÍ: Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H412 P273, P501 Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: 2-methyl-2Hisothiazol-3-jedna; LBP Kalibrátory Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfylis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Chemiluminescenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem. LBP zásobník s kuličkami (L2LB12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti-lbp. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KLB2: 1 balení. IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 9

10 LBP Reagencie (L2LBA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální králičí protilátkou proti LBP v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KLB2: 1 nádobka. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. LBP Kalibrátory (LLBL, LLBH) 6 ampulky s vysokou a nízkou koncentrací lyofilizovaného LBP v proteinové/pufrové matrix. Rekonstituujte každou ampulku přidáním 1,0 ml destilované nebo deionizované vody. Míchejte jemným kroužením nebo překlápěním. Stabilní 30 dní po rekonstituci při teplotě 20 C rozdělené na alikvotní části. Po rozředění nebo rozmrazení musí být adjustory použity do 4 hodin. Po rozmrazení opět nezmrazujte. Další ředění není potřebné. L2KLB2: 1 sada. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. LBP Diluent Vzorků (L2LBZ) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků analyzátorem. 50 ml koncentrované (připravené k použití) bílkovino/pufrové matrice bez LBP. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KLB2: 2 ampulky. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KLB2: 6 štítky. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly L2RXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 Testovací zkumavky na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 Uzávěru na testovací zkumavky na diluent vzorků LLBCM: LBP kontrolní modul (dvojúrovňový, na bázi proteinu) Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontrolní vzorky nebo směsný vzorek s alespoň dvěma koncentracemi LBP (nízkou a vysokou). Očekávané hodnoty Studie provedená pomocí IMMULITE 2000 LBP na 51 zdravých dobrovolnících výkázaly střední hodnoty 5,4 µg/ml, percentil byl 95 z 8,0 µg/ml a absolutní rozmezí od 2,2 µg/ml do 11,4 µg/ml. Tyto hodnoty považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky 10 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

11 tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, anamnézou pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v µg/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 1,2 170 µg/ml Analytická citlivost: Limity slepého pokusu (nejvyšší hodnota pro vzorek bez stanovované látky, stanoveno ve souladu s CLSI EP17-A 17 ): 0,8 µg/ml. Detekční limity (nejnižší zjistitelná koncentrace; ve shodě s CLSI EP17-A 17 ): 1,2 µg/ml. Funkční citlivost: Koncentrace: 20% variační kooficient, stanovený v souladu s CLSI EP5-A2 18 ): 1,5 µg/ml. High-dose Hook Effect: Do µg/ml žádný. Přesnost: Vzorky byly stanoveny ve dvou opakováních v průběhu 40 cyklů a celkem v 80 replikacích. (Viz tabulka Přesnost.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearity.) Zpětná Výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků LBP (265, a µg/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Recovery.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči lipopolysacharid vázajícímu proteinu. (Viz tabulka Specificita.) Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 500 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl může se stanovením interferovat a způsobit léhký pokles hodnot. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Zpětná výtěžnost.) Alternativní typ vzorku: K zhodnocení vlivu alternativního typu vzorku byly odebrány vzorky krve 55 dobrovolníků do obyčejných, lithium-heparinových, EDTA, a do zkumavek s plastovými gelovými bariérami (PST ) a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byl v různých koncentracích přidán LBP, čímž byl pokryt celý kalibrační rozsah, a vzorky byly následně stanoveny pomocí testu LBP na analyzátorech IMMULITE 2000 LBP. (Li-Heparin) = 0,99 (Sérum) + 0,22 µg/ml r = 0,998 (EDTA) = 0,99 (Sérum) 0,04 µg/ml r = 0,997 (SST) = 0,98 (Sérum) + 0,56 µg/ml r = 0,998 (PST) = 0,98 (Sérum) + 0,22 µg/ml r = 0,996 Střední hodnoty: 33,2 µg/ml (Li-Heparin) 32,6 µg/ml (EDTA) 32,8 µg/ml (PST) 32,8 µg/ml (SST) 32,8 µg/ml (Sérum) Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s testem LBP na analyzátoru IMMULITE/IMMULITE 1000 na 137 vzorcích. (Koncentrační rozsah: přibližně 2,63 až 153 µg/ml.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,06 (IML) + 0,213 µg/ml r = 0,986 Střední hodnoty: 32,4 µg/ml (IMMULITE 2000) 30,4 µg/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 11

12 Ελληνικά IMMULITE 2000 LBP Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης δέσμευσης λιποπολυσακχαριτών (LBP) στον ορό ή στο πλάσμα, ως βοήθημα στη διάγνωση και πρόγνωση νόσων, οι οποίες οφείλονται σε έκθεση σε ενδοτοξίνη, όπως είναι η σηψαιμία και οι μολυσματικές επιπλοκές χειρουργικών επεμβάσεων και τραυμάτων. Αριθμός Καταλόγου: L2KLB2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: LBP Χρώμα: Καφέ Περίληψη και επεξήγηση Οι παραγόμενες από αρνητικά κατά gram βακτηρίδια ενδοτοξίνες (λιποπολυσακχαρίτες και λιποολιγοσακχαρίτες ή LPS και LOS) είναι δυνατό να ενεργοποιήσουν φλεγμονώδεις αντιδράσεις, αυξάνοντας την παραγωγή προ-φλεγμονωδών κυταροκινών (π.χ., IL- 6, TNF, IL-8) από τα μονοκύτταρα, τα ενδοθηλιακά κύτταρα, τα κοκκιοκύτταρα και τα λεμφοκύτταρα. 1,2,3 Η αναγνώριση των LPS από τα κύτταρα που προκαλούν την επίδραση ενισχύεται σημαντικά από τη λειτουργία της πρωτεΐνης δέσμευσης λιποπολυσακχαριτών (LBP), μιας πρωτεΐνη οξείας φάσης που δεσμεύει και αξιοποιεί την ενδοτοξίνη στην επιφάνεια αυτών των κυττάρων. 3 Η δομή της LBP προσομοιάζει αυτή της βακτηριδιοκτόνου/αυξητικής της διαπερατότητας πρωτεΐνης (BPI), μιας γλυκοπρωτεΐνης που παράγεται στα αζουρόφιλα κοκκία των πολυμορφοπύρηνων λευκοκυττάρων, η οποία σκοτώνει τα βακτηρίδια, ενώ εξουδετερώνει και καθαρίζει την ενδοτοξίνη. 4 Εξαιτίας της σημασίας τους για την έγκαιρη απόκριση στα βακτηρίδια και την ενδοτοξίνη, τα επίπεδα LBP στο πλάσμα έχουν ερευνηθεί σε πολλούς ανθρώπινους πληθυσμούς. Στα υγιή άτομα, η LBP παρουσιάζεται στο πλάσμα σε συγκεντρώσεις μεταξύ 2 και 10 µg/ml. 5 Σε ορισμένους πληθυσμούς ασθενών, τα επίπεδα της LBP είναι δυνατό να υπερβαίνουν τα 100 µg/ml για διάστημα αρκετών ημερών. Αυξημένα επίπεδα LBP στο πλάσμα έχουν αναφερθεί σε ασθενείς με σηψαιμία, 3,6-11 μολύνσεις της κοιλιακής χώρας, 10 μηνιγγιτιδοκοκκαιμία, 10 SIRS, 12 ελκώδη κολίτιδα, 10 νόσο του Crohn, 10 αιμολυτικό ουραιμικό σύνδρομο 13 και ασθενείς με καρδιοπνευμονικό bypass. 14 Η έγχυση σε υγιείς εθελοντές είναι επίσης δυνατό να αυξήσει τα επίπεδα LBP, 6 ενώ η μακροχρόνια λήψη δειγμάτων από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε επέμβαση στο ήπαρ ή ασθενείς με αιμορραγία από τραύμα εμφάνισε αυξημένα επίπεδα LBP εντός 24 ωρών από την αρχική προσβολή. 10 Τα επίπεδα LBP δεν εμφανίζονται αυξημένα σε ασθενείς με φλεγμονώδεις νόσους. 6,10 Για τους λόγους αυτούς, υποστηρίχθηκε ότι τα επίπεδα LBP είναι πιθανώς ενδεικτικά της έκθεσης σε βακτηρίδια ή ενδοτοξίνη και συνιστούν παράγοντα πρόγνωσης για την εξέλιξη της νόσου, ενώ μπορούν να παράσχουν ένα νέο εργαλείο παρακολούθησης ή μακροχρόνια διαχείριση της θεραπείας. 10,15 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 LBP είναι μια στερεής φάσης, ενζυμική, χημειοφωταυγής, ανοσομετρική ανάλυση Η στερεή φάση (σφαιρίδιο) επικαλύπτεται από μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-lbp ποντικού. Η υγρή φάση συνίσταται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συζευγμένη με πολυκλωνικό αντίσωμα αντί-lbp κατσίκας. Το προαραιωμένο δείγμα ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Κατά την διάρκεια αυτού του χρόνου, η συνδεδεμένη με λιποσακχαρίτη πρωτεΐνη (LBP στο δείγμα σχηματίζει το σύμπλοκο τύπου sandwich του αντισώματος με το μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-lbp πάνω στο σφαιρίδιο και το συζευγμένο πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-lbp κουνελιού στο αντιδραστήριο. Το μη συνδεδεμένο δείγνα ασθενούς και το ενζυμικό συζυγές απομακρύνονται ύστερα μέσω φυγοκεντρικών εκπλύσεων. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στον σωλήνα της αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το δεσμευμένο ένζυμο. 12 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

13 Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Τα λιπιδαιμικα ή τα πολύ μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λάθος αποτελέσματα. Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 LBP δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος Όγκος: 5 µl ορού ή πλάσματος. Μετά την αυτόματη προαραίωση, χρησιμοποιούνται 5 µl για την ανοσοανάλυση. Αποθήκευση: 3 μέρες στους 2 8 C, ή 1 μήνα (διαχωρισμένα) στους 20 C. 16 Αυτόματος Συντελεστής Προαραίωσης: 100 Παρέχεται ο απαιτούμενος όγκος χορήγησης του αραιωτικού (L2LBZ) σε έναν κατάλληλο δοκιμαστικό σωλήνα με ετικέτα με ραβδοκώδικα. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. H412 P273, P501 Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: 2-μεθυλ-2Hισοθειαζολ-3-όνη; Ρυθμιστές LBP Αντιδραστήρια : Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε την μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (Βλέπε ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιείτε δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες με ραβδοκώδικα είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων LBP (L2LB12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-lbp ποντικού. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KLB2: 1 συσκευασία. Δοχείο αντιδραστηρίου LBP (L2LBA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 13

14 συνδεδεμένης με πολυκλωνικό αντίσωμα αντί-lbp κουνελιού σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KLB2: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε τον ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές LBP (LLBL, LLBH) 6 φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλοποιημένης LBP σε μήτρα πρωτεΐνης/ρυθμιστικού διαλύματος. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με προσθήκη 1,0 ml απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ή αναστροφή. Σταθερά στους 20 C για 30 μέρες (διαχωρισμένα) μετά την ανασύσταση. Έπειτα από την ανασύσταση ή την τήξη, οι ρυθμιστές πρέπει να χρησιμοποιηθούν εντός 4 ωρών. Μην επαναψύχετε. Δεν απαιτείται περαιτέρω αραίωση. L2KLB2: 1 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. Αραιωτικό δείγματος LBP (L2LBZ) Για την αραίωση των δειγμάτων των ασθενών. 50 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας πρωτεΐνης/ρυθμιστικού χωρίς LBP. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαλυμένα) στους 20 C. L2KLB2: 2 φιαλίδια. Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2KLB2: 6 ετικέτες. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Έμπλυμα του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης του δείγματος LLBCM: Μονάδα ελέγχου LBP (δύο επιπέδων με πρωτεϊνική βάση). Χρειάζονται επίσης: Δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δείγματα ελέγχου ποιότητας, γυάλινα σωληνάρια. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) LBP. Αναμενόμενες τιμές Μια μελέτη που διενεργήθηκε με την IMMULITE 2000 LBP σε 151 φαινομενικά υγιείς εθελοντές έδωσε μέση τιμή 5,4 µg/ml, εκατοστημόρια 95% στα 8,0 µg/ml και απόλυτο εύρος 2,2 µg/ml έως τα 11,4 µg/ml. Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού 14 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

15 του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, είναι δυνατό να εμφανιστούν αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε µg/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους). Εύρος αναφοράς: 1,2 170 µg/ml Αναλυτική ευαισθησία: Όριο του τυφλού δείγματος (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή ενός δείγματος δίχως αναλύτη, η οποία καθορίζεται με την CLSI EP17-A 17 ): 0,8 µg/ml. Όριο ανίχνευσης (η χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση, η οποία καθορίζεταιμε την CLSI EP17-A 17 ): 1,2 µg/ml. Λειτουργική ευαισθησία (συγκέντρωση με συντελεστή διακύμανσης (CV) 20%, ο οποίος καθορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP5-A2 18 ): 1,5 µg/ml Υψηλή δόση φαινομένου Hook: Καμία επίδραση έως τα µg/ml. Ακρίβεια: Δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν σε 40 τρεξίματα, για ένα σύνολο 80 επαναλήψεων. (Βλέπε Πίνακα Precision ). Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διάφορες αραιώσεις. (Βλ. Πίνακα Linearity ). Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα LBP (265, και µg/ml) και αναλύθηκαν (Βλ. Πίνακα Recovery για τα αντιπροσωπευτικά δείγματα). Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή εξειδίκευση στην LBP. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 500 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι mg/dl μπορεί να επηρεάσουν τη μέθοδο, προκαλώντας πτώση των τιμών. (Δες Πίνακα Lipemia ) Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 55 εθελοντές σε απλούς, ηπαρινισμένους με λίθιο, EDTA, ράβδου γέλης πλάσματος PST και Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες συγκεντρώσεις LBP, ώστε να ληφθούν τιμές καθόλο το εύρος βαθμονόμησης της ανάλυσης, και μετά εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία IMMULITE 2000 LBP. (Li-Ηπαρίνη) = 0,99 (Ορός) + 0,22 µg/ml r = 0,998 (EDTA) = 0,99 (Ορός) 0,04 µg/ml r = 0,997 (SST) = 0,98 (Ορός) + 0,56 µg/ml r = 0,998 (PST) = 0,98 (Ορός) + 0,22 µg/ml r = 0,996 Μέσοι όροι: 33,2 µg/ml (Li-Ηπαρίνη) 32,6 µg/ml (EDTA) 32,8 µg/ml (PST) 32,8 µg/ml (SST) 32,8 µg/ml (Ορός) Σύγκριση της Μεθόδου: Η ανάλυση συγκρίθηκε με την IMMULITE/IMMULITE 1000 LBP σε 137 δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 2,63 με 153 µg/ml.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,06 (IML) + 0,213 µg/ml r = 0,986 Μέσοι όροι: 32,4 µg/ml (IMMULITE 2000) 30,4 µg/ml (IMMULITE) IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 15

16 Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 LBP Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do ilościowego oznaczania stężenia białka wiążącego lipopolisacharydy (LBP) w surowicy i osoczu. Test przydatny jest w diagnozowaniu i prognozowaniu chorób wywołanych endotoksyną, takich jak posocznica i zakażenia stanowiące komplikacje zabiegów chirurgicznych lub urazów. Numer katalogowy: L2KLB2 (200 testów) Kod testu: LBP Kolor: brązowy Wprowadzenie Endotoksyny (lipopolisacharydy i lipooligosacharydy: LPS i LOS) produkowane przez bakterie gram-ujemne są silnymi bodźcami stanu zapalnego, stymulując produkcję cytokin wywołujących zapalenie - IL-6, TNF czy IL-8 - przez monocyty, komórki endotelialne, granulocyty i limfocyty. 1,2,3 Rozpoznanie LPS przez komórki efektorowe jest nasilane przez białko wiążące lipopolisacharydy (LBP), białka ostrej fazy, które wiążąc endotoksynę ułatwiają jej wiązanie się z powierzchnią komórek efektorowych. 3 LBP jest strukturalnie pokrewne białku BPI (bactericidal/permeability-increasing protein białku zwiększającemu bakteriobójczość/przepuszczalność błon), glikoproteinie produkowanej przez azurofline ziarnistości limfocytów polimorfonuklearnych, która zabija bakterie oraz neutralizuje i usuwa endotoksynę. 4 Istotne znaczenie roli LBP w początkowej fazie odpowiedzi organizmu na bakterie i endotoksynę leżało u podstaw badań jego poziomu w licznych populacjach. U osób zdrowych LBP występuje w osoczu w stężeniach pomiędzy 2 a 10 µg/ml. 5 U niektórych chorych poziom LBP może przekraczać 100 µg/ml i może utrzymywać się przez wiele dni. Podniesiony poziom LBP w osoczu stwierdzany jest w przypadku posocznicy 3,6-11 i zakażeń jamy brzusznej, 10 posocznicy meningokokowej, 10 zespołu ogólnoustrojowej reakcji zapalnej (ang. SIRS), 12 wrzodziejącym zapaleniu okrężnicy, 10 chorobie Crohna, 10 zespole uremii hemolitycznej 13 oraz u osób podłączonych do krążenia pozaustrojowego. 14 Poziomu LBP wzrastał u zdrowych ochotników po wstrzyknięciu endotoksyny. 6 Seryjne badania chorych poddanych zabiegom chirurgicznym wątroby i z krwotokami pourazowymi wykazały, że wzrost poziom LBP następuje 24 godziny po urazie. 10 Poziom LPB nie wykazuje wzrostu u chorych ze zmianami zapalnymi. 6,10 Powyższe fakty prowadzą do sugestii, że poziom LBP może wskazywać na ekspozycję na bakterie lub endotoksynę, stanowić prognostyk postępu choroby, a także stanowić środek monitorowania terapii w przypadku długotrwałego leczenia. 10,15 Zasada testu IMMULITE 2000 LBP to enzymatyczny, chemiluminescencyjny test immunometryczny w fazie stałej. Faza stała (perła) opłaszczona jest mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko LBP. Fazę ciekłą stanowi fosfataza alkaliczna (wyizolowana z jelita cielęcego) sprzężona z króliczym przeciwciałem poliklonalnym przeciwko LBP. Rozcieńczoną wstępnie próbkę pacjenta i odczynnik inkubuje się razem z opłaszczoną kulką przez 30 minut. W tym czasie białko wiążące lipopolisacharyd (LBP) znajdujące się w próbce tworzy kompleks przeciwciała typu kanapkowego z mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko LBP na perle i sprzężonym z enzymem króliczym przeciwciałem poliklonalnym przeciwko LBP znajdującym w reagencie. Niezwiązaną część próbki pacjenta i koniugat enzymu usuwa się następnie przez ultrawirowanie. Na koniec, do probówki reakcyjnej 16 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

17 zawierającej perłę dodaje się substrat chemiluminescencyjny i generowany jest sygnał odzwierciedlający proporcjonalnie ilość związanego enzymu. Czas inkubacji: 1 30 minut. Czas do pierwszego wyniku: 35 minut. Preparatyka próbek W próbkach lipemicznych i silnie zanieczyszczonych wyniki testu mogą być błędne. Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Stosowane przy pobieraniu krwi probówki pochodzące od różnych producentów mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotny jest materiał i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 LBP nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 5 µl surowicy lub osocza. Do oznaczenia użyte zostaje 5 µl rozcieńczonej uprzednio automatycznie próbki. Przechowywanie materiału: 3 dni w temp, 2 8 C lub 1 miesiąc w temp. 20 C (po rozporcjowaniu). 16 Współczynnik automatycznego rozcieńczenia: 100 Wymaganą objętość rozcieńczalnika (L2LBZ) należy przelać do odpowiedniej probówki z naklejonym kodem kreskowym. Ostrzeżenia i środki ostrożności Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H412 P273, P501 Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Unikać uwolnienia do środowiska. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: 2-metylo-2Hizotiazolino-3-on; LBP kalibratory zestawu Odczynniki: Przechowywać w temp. 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku kiły, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim działaniem światła słonecznego (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. LBP Pojemnik z perłami (L2LB12) Z kodem kreskowym. 200 pereł opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko LBP. Stabilne w temp. 2 8 C do upływu daty ważności. L2KLB2: 1 opakowanie. LBP klin z odczynnikiem (L2LBA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml fosfatazy alaklicznej (wyizolowanej z jelit cieląt) sprzęgniętej z króliczym przeciwciałem poliklonalnym przeciwko LBP w buforze. Stabilne w temp. 2 8 C do upływu daty ważności. L2KLB2: 1 klin. Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 17

18 kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. LBP kalibratory zestawu (LLBL, LLBH) 6 fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające liofilizowane LBP w buforowanej matrycy surowicy. Każdą rozpuścić w 1,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Wymieszać delikatnie przez toczenie lub odwracanie aż do całkowitego rozpuszczenia. Po rekonstytucji stabilne w 20 C przez 30 dni (rozpipetowane). Po rekonstytucji lub rozmrożeniu kalibratory należy zużyć w ciągu 4 godzin. Nie zamrażać ponownie. Dalsze rozcieńczanie nie jest konieczne. L2KLB2: 1 zestaw. Przed wykonaniem kalibracji na probówki nakleić odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (znajdujące się w zestawie), rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. LBP rozcieńczalnik próbek (L2LBZ) Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek. 50 ml skoncentrowanej, gotowej do użycia, pozbawionej LBP buforowanej matrycy białkowej. Po otwarciu stabilny 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2KLB2: 2 fiolki. Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce (16 x 100 mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2KLB2: 6 nalepki. Materiały nie znajdujące się w zestawie L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący igłę pipetora LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik LLBCM: LBP Zestaw kontroli (dwupoziomowy, białkowy) Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy Rekalibracjami: 2 tygodnie. Próbki kontrolne: Stosować kontrole firmy lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie LBP. Wartości spodziewane Badanie przeprowadzone z użyciem IMMULITE 2000 LBP na 151 wyraźnie zdrowych ochotnikach dało średnią wartość 5,4 µg/ml, 95. percentyl 8,0 µg/ml i zakres bezwzględny od 2,2 µg/ml do 11,4 µg/ml. Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady 18 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

19 interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi stanami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i rysunkach. Wyniki wyrażano w µg/ml. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Zakres kalibracji: 1,2 170 µg/ml Czułość analityczna: Limit proby ślepej (najwyższa spodziewana wartość dla próbki bez analitu; określona zgodnie z CLSI EP17-A 17 ): 0,8 µg/ml. Limit detekcji (najniższe oznaczalne stężenie; oznaczone zgodnie z CLSI EP17-A 17 ): 1,2 µg/ml. Czułość funkcjonalna (stężenie przy 20% współczynniku zmienności (ang. CV) oznaczonym zgodnie z CLSI EP5-A2 18 ): 1,5 µg/ml. Efekt wysokiej dawki Hook Effect: Nie występuje do stężenia µg/ml. Precyzja: Próbki oznaczano w duplikatach w 40 seriach, co dało łącznie 80 powtórzeń. (Patrz: tabela Precyzja ). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom. (Patrz: tabela Liniowość ). Odzysk: Oznaczano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami LBP o stężeniach kolejno: 265, i µg/ml (patrz: tabela Odzysk ). Swoistość: Przeciwciało jest wysoce swosite w stosunku do LBP. (Patrz: tabela Swoistość ). Bilirubina: Obecność bilirubiny wolnej i związanej w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 512 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do mg/dl może zakłócać oznaczenie powodując obniżenie wartości (patrz: tabela Lipemia ). Wpływ materiału na oznaczenie: Wpływ rodzaju próbki na oznaczenie określano w próbkach krwi pobieranych od 55 ochotników do probówek zwykłych, litowoheparynizowanych, z EDTA oraz do probówek z barierą żelową PST i do probówek próżniowych Becton Dickinson SST. Jednakowe objętości porównywanych próbek wzbogacano różnymi stężeniami LBP dobieranymi tak, aby ozyskać wartości zakresu kalibracji, a następnie oznaczano w teście IMMULITE 2000 LBP. (Li-Heparyna) = 0,99 (Surowica) + 0,22 µg/ml r = 0,998 (EDTA) = 0,99 (Surowica) 0,04 µg/ml r = 0,997 (SST) = 0,98 (Surowica) + 0,56 µg/ml r = 0,998 (PST) = 0,98 (Surowica) + 0,22 µg/ml r = 0,996 Średnie: 33,2 µg/ml (Li-Heparyna) 32,6 µg/ml (EDTA) 32,8 µg/ml (PST) 32,8 µg/ml (SST) 32,8 µg/ml (Surowica) Porównanie metod: Test porównywano z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu testu IMMULITE/IMMULITE 1000 LBP w grupie 137 próbek (od około 2,63 do 153 µg/ml). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 1,06 (IML) + 0,213 µg/ml r = 0,986 Średnie: 32,4 µg/ml (IMMULITE 2000) 30,4 µg/ml (IMMULITE) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 19

20 Made in: UK PIEL2KLB 6 {19} Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom Changes in this Edition: cc#eu22565: 1) Under Warnings and Precautions, added caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Changed Origin: UK to Made in: UK. 3) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 4) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy Symbol Definition En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) 20 IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, )

21 LOT Symbol Definition En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów BEAD PACK TEST UNIT REAG WEDGE REAG WEDGE A REAG WEDGE B REAG WEDGE D Symbol Definition En: Corrosion Cz: Koroze El: Διάβρωση Pl: Działanie żrące En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: Δοχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik ADJUSTOR ADJUSTOR L ADJUSTOR H ADJUSTOR AB En: Adjustor Cz: Kalibrátor El: Ρυθμιστής Pl: Kalibrator En: Adjustor, low Cz: Kalibrátor, nízký El: Ρυθμιστής, χαμηλό Pl: Kalibrator, niski En: Adjustor, high Cz: Kalibrátor, vysoký El: Ρυθμιστής, υψηλό Pl: Kalibrator, wysoki En: Adjustor Antibody Cz: Protilátka proti kalibrátoru El: Ρυθμιστής αντισώματος Pl: Przeciwciało Kalibratora IMMULITE 2000 LBP (PIEL2KLB-6 {19}, ) 21