Bakteriološka obrada brisa ždrijela

Bakteriološka obrada brisa ždrijela Prof.dr.sc. Darinka Vučković Medicinski fakultet Sveučilišta u Rijeci School of Medicine University of Rijeka Indikacije grlobolja faringitis tozilitis UVOD *Klinički simptomi koji mogu uputiti na dijagnozu streptokokne grlobolje (Centorovi kriteriji): temperatura > 38 o C eksudat na tonzilama povedani i bolni prednji cervikalni limfni čvorovi odsutnost kašlja i kataralnih simptoma 1

Faringitis streptokoki grupe A i do 0% djece su zdravi nositelji BHS-A, znatno manje odrasli (u njih izolacija ne podrazumijeva ulogu u infekciji) BHS-C, F i G (C i G uglavnom uzrokuju epidemije) S. dysgalactiae, S. anginosus, S. constellatus Difterija Corynebacterium diphtheriae C. ulcerans, C. pseudotuberculosis Kriteriji: - membranozni ili pseudomembranozni faringitis/tonzilitis - put u Rusiju, Afriku, J Ameriku i Jugoist Aziju posljednjih 10 dana - kontakt s osobom koja se nedavno vratila iz tih krajeva - konzumacija svježeg mlijeka i prerađevina (C. ulcerans) - nedavni kontakt s domadim životinjama (C. ulcerans) - rad u kliničkom mikrobiološkom laboratoriju

Epiglotitis Haemophilus influenzae tip b bez obzira na imunizaciju bris ždrijela kao dokaz kolonizacije gornjih dišnih puteva za epidemiološke studije kontraindicirano uzimanje brisa ždrijela (može ubrzati nastanak opstrukcije dišnog puta) kod sumnje na akutni epiglotitis Vincent-ova angina Borrelia vincentii i Fusobacterium spp. u odraslih s lošom higijenom usne šupljine ili ozbiljnom sustavnom bolesti Ostali uzročnici faringitisa Arcanobacterium haemolyticum (neuspjeh terapije, rekurentni tonzilitis) Candida spp. (imunokompromitirani) Fusobacterium necrophorum (akutni faringitis s temp., bakterijemija, metast. žarišta) Neisseria gonorrhoeae (faringealna kolonizacija može se nadi kod osoba s genitalnom gonorejom, a rijetko kao jedino inficirano mjesto) Neisseria meningitidis (može se izolirati u oko 50% slučajeva invazivne bolesti, isti tip i iz likvora i krvi, no sojevi od kontakata su često različiti od onih kod potvrđenih slučajeva) Staphylococcus aureus (preoperativno srčani bol., probir kliconoštva MRSA, peritonz. apsces) 3

Uzorkovanje, transport i čuvanje 1. Sigurnost koristiti aseptične tehnike rada koristiti odgovarajude posude za uzorkovanje i transport kliničkih uzoraka (Direktiva EU za in vitro dijagnostički medicinski pribor 98/79/EC Annex 1B.1) koristiti transportnu podlogu sa ili bez aktivnog ugljena (Amies, Stuart) bris ždrijela uzeti prije antibiotske terapije kad je mogude. Postizanje optimalnih uvjeta transportirati i obraditi čim prije uzorke za dokaz N. gonorrhoeae najbolje je izravno nasaditi na podlogu i inkubirati bez odgaďanja u slučaju odgoďene obrade čuvanje u hladnjaku je preporučljivije nego na sobnoj temperaturi ne preporuča se odgaďanje obrade >48 sati 4

3. Bris ždrijela (tonzila i/ili stražnje stijenke ždrijela) uzeti tako da se izbjegne kontakt s jezikom, uvulom i bukalnom sluznicom 4. Broj uzoraka i učestalost uzimanja ovise o kliničkom stanju pacijenta Obrada uzorka 1. Sigurnost uzorak se obraďuje u laboratoriju biozaštitnog stupnja sigurnosti razine kad se očekuje oslobaďanje aerosola te kod sumnje na C. diphtheriae, C. ulcerans i N. meningitidis potrebna je obrada u biozaštitnom kabinetu, a nekad i u laboratoriju biozaštitnog stupnja sigurnosti razine 3 opasnost od laboratorijske infekcije 5

. Mikroskopija preparat kod sumnje na Vincent-ovu anginu (Fusobacterium spp.) * Važeće ISKRA smjernice za grlobolju obuhvaćaju i» brzi test za dokaz streptokoknog antigena: pozitivan nalaz dobiven brzim testom je dovoljan za postavljanje dijagnoze streptokokne infekcije i početak terapije negativan nalaz je potrebno potvrditi kultivacijom nakon provedene antibiotske terapije nije potrebno ponavljati kulturu brisa ždrijela u asimptomatskih pacijenata jer BHS-A kliconoštvo nije indikacija za antibiotsku terapiju kliconoštvo treba eradicirati u pacijenata koji u anamnezi imaju reumatsku groznicu, u slučaju epidemijske pojave reumatske groznice ili streptokoknog glomerulonefritisa te u slučaju da se unutar obitelji izmjenjuju multiple rekurentne streptokokne infekcije 6

3. Kultivacija inokulirati agar brisnim štapićem 1 3 Klinički detalji/ uvjeti Standardni mediji Inkubacija Temp C Atmos Vrijeme Očitav. kulture Ciljni organizam Grlobolja Faringitis Krvni agar* 35-37 5-10% CO 40-48 h dnevno Streptokoki grupe A,C i G Tonzillitis Za navedene situacije, dodati sljedeće: Tvorbamembrane ili membranozni faringitis/tonzilitis Hoyle teluritni 35-37 aerobno 4-48 h dnevno agar Putnici iz rizičnih zemalja Toksigeni C. diphtheriae i C. ulcerans S. aureus kliconoštvo Klinika za spolne bolesti gonoreja, N. meningitidis slučaj ili kontakt Tonzillitis, neuspjeh terapije, faringitis, i osip Epiglotitis Krvni agar* 35-37 5-10% CO 16-4 h 16 h S. aureus GC selektivni agar 35-37 5-10% CO 40-48 h 40 h N. gonorrhoeae N. meningitidis Krvni agar 35-37 5-10% CO 40-48 h** 48 hr A. haemolyticum Čokoladni agar 35-37 5-10% CO 40-48 hr dnevno H. influenzae Dijabetes Imunosuprimirani oralna kandidoza Sabouraud agar 35-37 aerobno 40-48 h 40 h Kvasci *Mogu i Staphylococcus/Streptococcus selektivniagari **Može biti produljeno do 7 h. 7

Dodatni mediji Inkubacija Očitav. kulture Klinička slika Temp C Atmos Vrijeme Ciljni organizam Dugotrajna grlobolja ili angina Anaerobni agar s dodatkom nalidiksične kiseline i vankomicina 35-37 anaerobno 5-7 d 48 hr F. necrophorum Ostali organizmi koje treba uzeti u obzir - MRSA i C. diphtheriae koji ne producira toksin Minimalni stupanj identifikacije C. diphtheriae vrsta; hitni test toksičnosti/prijava referalnom laboratoriju C. ulcerans vrsta; hitni test toksičnosti/prijava referalnom laboratoriju H. influenzae vrsta; tip b ili nije β hemolitički streptokoki Lancefield grupa A. haemolyticum vrsta N. gonorrhoeae vrsta N. meningitidis vrsta S. aureus vrsta Kvasci Anaerobi "kvasac" vrsta 8

Ispitivanje antimikrobne osjetljivosti - primijeniti važedi EUCAST standard Izdavanje nalaza Mikroskopija Rok za javljanje mikroskopskog nalaza Fusobacterium je 16-4 h Kultivacija 1. Negativni nalaz kultivacije: "Beta hemolitički streptokoki grupe A, C i G nisu izolirani" "Corynebacterium diphtheriae nije izoliran" 9

3. Pozitivni nalazi kultivacije: javiti izolaciju klinički značajnih organizama Rok za javljanje nalaza kultivacije: Klinički hitne rezultate javiti telefonski ili elektronički Pisani nalaz, 16-7 sata, a ako je potrebno uz napomenu da slijedi dodatni nalaz Izvor: http://www.hpa.org.uk/smi/pdf http://iskra.bfm.hr/upload/smjernice/grlobolja/ grlobolja.pdf 10

Prilog: Obrada brisa ždrijela Pripremiti Prepare sve all uzorke specimens A l l Svi s p uzorci e c i m e kod n s f r o m S grlobolje, o r e t h r o a t, P fari h a ngitisa, r y i n g i t i s ton T o n zilitisa s i l i t i s Additional Dodatne podloge media Posebne Optional podloge media M Membranozni e m b r a n o u s fari P h ngitis/ton a r y i n g i t zilitis i s / t o n ili s i put l i t i u s zemlju o r f o r e i g n t rizika r a v e l Kliconoštvo S. a u r e u s S. c a aureus r r i a g e Klinika G za U spolne M c l i bol n i c,, G o Gonoreja n o r r h o e a N. meningitidis N. m e n i n g i slučaj t i d i s case ili kontakt or contact T Ton o n s zilitis, i l i t i s, P h Faringitis, a r y i n g i t i s, r a s h osip a n i neuspjeh d t r e a t m e n t liječenja f a i l u r e E Epiglotitis p i g l o t t i t i s D Dijabetes, i a b e t e s, i m m imunosuprimirani u n o s u p p r e s s e d p pacijent, a t i e n t s, oralna candidosis kandidoza P e Dugot r s i s t e rajna n t s o r e t h grlobolja r o a t a n i angina d Q u i n s y Krvni H o y l e s t e l l u r i t e Blood agar agar Hoyle teluritni Krvni Blood agar agar * GC GC selekt selective ivni agar Krvni Blood agar agar Čokoladni Chocolate agar agar Sabouraud agar agar a g a r F A Anaer.agar A c o n t a i n s i n g n a l i d dodatkom i x i c a c i d a n d nalidiksične kiseline i v a n c o m y c i n vankomicina Incubate Inkub irati at 35-37 - 37 o C C A 5-10% n a e r CO o b i c 40-48 h 4 0 4 8 h r Očitavati dnevno R e a d a t 4 8 h r Incubate Inkub irati at 35-37 - 37 o C C Aerobno A i r 4-48 h 4 4 8 h r Očita vati dnevno Read daily Incubate Inkubirati 35 at 35-37 - 37 o C C 5 5-10% 1 0 % CO C O 16-4 h 1 6 4 h r Očitati nakon 16h R e a d a t 1 6 h r Incubate Inkubirati 35 at 35-37 - 37 o C C 5 5-10% 1 0 % CO C O 40-48 h 4 0 4 8 h r Očitati nakon 40h R e a d a t 4 0 h r Incubate Inkubirati 35 at 35-37 - 37 o C C 5 5-10% 1 0 % CO C O 40-48 h 4 0 4 8 h r Očitati nakon 48h Read at 48 hr Incubate Inkubirati 35 at 35-37- 37 o C C 5 5-10% 1 0 % CO C O 40-48 h 4 0 4 8 h r Očitavati dnevno Read daily Incubate Inkubirati 35 at 35-37 - 37 o C C Aerobno A i r 40-48 h 4 0 4 8 h r Očitati nakon 40h R e a d a t 4 0 h r Incubate Inkubirati 35 at 35-37 - 37 o C C A Anaerobno n a e r o b i c 5-7 dana 5 7 d Očitati n akon 4 8h R e a d a t 4 8 h r L a n c e f i e l d g r o u p Streptokoki A, C a n d G grupe s t r e A, p t o c C o c i G c i R e f e r t o I D 4 T o x i g e n i c Toksigeni C. d i p h t h e r i a e C. diphtheriae C. u l c e r a n s C. R ulcerans e f e r t o I D S. S aureus. a u r e u s N. g o n o r r h o e a e A. h a e m o l y t i c u m H. i n f l u e n z a e Y Kvasci e a s t s R e f e r t o I D 7 N. m e n i n g i t i d i s R e f e r t o I D 6 R e f e r t o I D 3 R e f e r t o I D 1 F. n e c r o p h o r u m R e f e r t o I D 5 11