FARMEBS 2017. - Simpozij studenata farmacije i medicinske biokemije 27. svibnja 2017., Zagreb ANTIOKSICIJSKA SVOJSTVA I SASTAV EKSTRAKTA ZELENOG ČAJA U OVISNOSTI O NAČINU PRIPREME Elena Ćosić*1, Ivana Bota*1, Klara Dumanić1, Martina Stipišić1, Adriana Bolić1, Ivana Milardović1, Sara Grubišić-Ĉabo1 *elena.zd@hotmail.com, botaivana@gmail.com 1 Sveučilište u Splitu, Kemijsko-tehnološki i Medicinski fakultet, Split, Hrvatska UVOD Kineski čajevac (Camellia sinensis (L.) Kuntze, Theaceae) se kultivira već stoljećima s prvim početcima u Indiji i Kini od koje se različitim postupcima sakupljanja i obrade dobivaju zeleni, crni i bijeli čaj. Kada se usporedi s ostalim čajevima (crni čaj, čaj od paprene metvice, stolisnika) zeleni čaj ima veću koncentraciju polifenola te je najčešće konzumirani napitak nakon vode. Mnoge studije pokazuju kako ispijanje zelenog čaja ima brojne pozitivne učinke (antioksidacijski, antikancerogeni i dr.) [1]. Smatra se da različiti prooksidansi i slobodni radikali pridonose nastanku oksidacijskog stresa, a time i procesu starenja kao i razvoju brojnih zdravstvenih problema kao što su kardiovaskularne i neurodegenerativne bolesti, tumorska oboljenja i dr. [2]. Ekstrakt zelenog čaja sadrži različite polifenolne spojeve koji pokazuju antioksidacijska svojstva, a glavne sastavnice su su flavan-3-ol monomerini spojevi katehini, među kojima su epigalokatehin-3-galat i epikatehin-3-galat najaktivnije komponente [3]. Antioksidansi su tvari, prisutne u niskoj koncentraciji, koje mogu odgoditi ili spriječiti oksidaciju neke druge tvari. CILJ Cilj ovog rada bio je određivanje sastava i antioksidacijske aktivnosti osamnaest (18) ekstrakta zelenog čaja u ovisnosti o temperaturi vode korištene za pripremu (80, 85, i 90 C), vremenu ekstrakcije (3, 4, i 5 minuta) te načinu pripreme (poklopljena ili otklopljena čaša). METODE Određivanje sastava zelenog čaja [4]: 1. Folin-Ciocalteu metoda U reakciji dolazi do nastanka plavo obojenih spojeva s maksimalnom apsorbancijom pri valnoj duljini pri 745-750 nm. Rezultate smo izrazili u mg ekvivalenata galne kiseline (mg GAE/L). 2. Vanilin metoda Nastali narančasti produkt s maksimalnom apsorbancijom pri valnoj duljini pri 500 nm Određivanje antioksidacijske aktivnosti [4]: 1. DPPH metoda (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil radikal) metoda koja se temelji na "gašenju" radikala (λ=517nm). 2. FRAP metoda (engl. Ferric Reducing/Antioxidant Power) metoda koja se temelji na redukciji Fe(III) u Fe(II) (λ=593nm). Slika 1. Ovisnost sadržaja katehina i fenola o temperaturi, vremenu ekstrakcije te načinu pripreme (poklopljena ili otklopljena čaša). DPPH* (517nm) DPPHH Oker boja Plava boja (593 nm) REZULTATI Rezultati ukazuju na jasnu razliku u sadržaju katehina i fenola između ekstrakata zelenog čaja pri različitim parametrima. Uzorak zelenog čaja koji se ekstrahirao 3 minute pri 80 C u otklopljenoj čaši sadržavao je ukupno 213,8 mg/l fenola i 60 mg/l katehina dok je uzorak zelenog čaja koji se ekstrahirao 5 minuta pri 90 C u poklopljenoj čaši sadržavao ukupno 427,8 mg/l fenola i 113,6 mg/l katehina. Uzorci su pokazali značajnu antioksidacijsku aktivnost. Postotak inhibicije DPPH radikala za uzorak koji se ekstrahirao 5 minuta pri 90 C u poklopljenoj čaši iznosio je 93.78%. Slika 2. Sadržaj fenola i katehina pri u ovisnosti o temperaturi ekstrakcije i načinu pripreme (otkolpljeno/poklopljeno). Tablica 1. Postotak inhibicije DPPH radikala i FRAP vrijednost ispitivanih uzoraka Metode: 3min 80 C 4min 5min 3min 85 C 4min 5min 3min 90 C 4min 5min DPPH % 92,41 94,22 93,87 93,9 93,18 93,96 94,13 93,87 93,61 94,31 93,96 93,78 FRAP µm/l 1684,6 2163,8 2635,4 3085,4 6415,4 2913,8 2692,9 3292,9 2177,1 2843,8 3252,9 3545,0 5577,1 6308,8 6866,3 5972,9 6994,6 8071,3 ZAKLJUČAK Na ukupnu količinu fenola i katehina, vrijednih antioksidanata iz zelenog čaja, značajno utječu: temperatura vode u kojoj se vrši priprema, vrijeme ekstrakcije kao i način pripreme (otklopljena i poklopljena čaša). Tako je pri krajnjim vrijednostima eksperimenta uočena gotovo dvostruka razlika u sadržaju fenola i katehina (vidi REZULTATI). Metodama FRAP i DPPH potvrđena je vrlo dobra antioksidacijska aktivnost svih uzoraka. LITERATURA [1] S. Aafrin Thasleema, J. Pharm. Sci. & Res. 5 (2013) 171-173. [2] S. M. Chacko, P. T. Thambi, R. Kuttan, I. Nishigaki, Chin. Med. 5 (2010) 1-9. [3] S. P. J. Namal Senanayake, J. Funct. Food. 5 (2013) 1529-1541. [4] I. Generalid, Doktorska disertacija, 2011, Sveučilište u Zagrebu, Zagreb.. ZAHVALA: Zahvaljujemo mentoru doc. dr. sc. Franku Burčulu te potpori projekta IP2014-09-6897 Hrvatske zaklade za znanost.