Osteocalcin. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Osteocalcin For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Osteocalcin English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of osteocalcin in human serum or heparinized plasma, as an aid in monitoring mineral and bone metabolism. Catalog Numbers: L2KON2 (200 tests) Test Code: OCN Color: Dark Gray Summary and Explanation Osteocalcin is a vitamin K dependent protein with a molecular mass of approximately 5800 Dalton. The protein has been implicated as a bone GLA protein (BGP) due to the 3 gamma carboxyglutamic acid (GLA) residues in its primary structure involved in calcium and hydroxyapatite binding. 1 Osteocalcin is one of the most abundant non-collagenous proteins of the bone, constituting up to 3% of total bone protein. Bone tissue is perpetuated through a dynamic process of bone formation and elimination. Osteocalcin is thought to function in bone tissue formation as it is produced by osteoblasts, 2 cells necessary in this process. In addition, osteocalcin is directly influenced by calcium regulating hormones (calcitonin, 3 parathyroid hormone, vitamin D 4-6 ) required in normal bone mineralization. Osteocalcin has been extensively discussed as a prognostic indicator of bone disease progression. Elevated osteocalcin levels may occur in different diseases including osteomalacia, 7 Paget's disease of the bone, 8 hyperthyroidism, 9 primary hyperparathyroidism and renal osteodystrophy. 10 In addition, osteocalcin levels can also be elevated in postmenopausal osteoporosis due to increased or decreased bone turnover. Depressed levels of osteocalcin have been reported in hypoparathyroidism 11,12 and during long-term corticosteroid therapy. 13 The IMMULITE 2000 Osteocalcin assay measures only the intact osteocalcin molecule and does not detect fragmented forms. 16 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Osteocalcin is a solid-phase, two-site chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-osteocalcin antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-osteocalcin antibody in buffer. The patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, osteocalcin in the sample forms an antibody sandwich complex with monoclonal murine anti-osteocalcin antibody on the bead and enzyme conjugated polyclonal rabbit anti-osteocalcin antibody in the reagent. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes Time to First Result: 35 minutes Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Collect blood by venipuncture 14 (avoiding hemolysis) into iced plain or heparinized tubes, noting the time of collection. The tubes should be immersed in an ice bath following collection. Separate the serum or plasma from the cells by centrifugation in a refrigerated centrifuge, then aliquot and freeze immediately in plastic tubes. 2 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

3 Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Osteocalcin has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum or heparinized plasma. Storage: 2 hours at 2 8 C 19 or 30 days at 20 C. 20 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312 P302 + P312 P501 Danger! Toxic in contact with skin. Harmful if swallowed. Toxic to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/ protective clothing/eye protection/face protection. Avoid release to the environment. IF SWALLOWED: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. IF ON SKIN: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium azide; Osteocalcin Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight (see insert). Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Osteocalcin Bead Pack (L2ON12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-osteocalcin antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KON2: 1 pack Osteocalcin Reagent Wedge (L2ONA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-osteocalcin. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KON2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Osteocalcin Adjustors (LONL, LONH) Two vials (Low and High) of lyophilized osteocalcin in a protein/buffer matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 2.0 ml distilled or deionized water, placing Adjustors on ice immediately after making this addition. Use volumetric pipets and mix by gentle, intermittent swirling until the lyophilized material is fully dissolved. It is important to keep the Adjustors cold throughout this process. Stable at 2 8 C for 1 day after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KON2: 1 set Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 3

4 Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) LONCM: Bi-level control containing osteocalcin (protein-based) Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of osteocalcin. Expected Values A reference range study for IMMULITE 2000 Osteocalcin was performed on 186 apparently healthy adults yielding a central 95% reference range of: < ng/ml. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Samples may not maintain strict linearity under dilution in the presence of degradation products of osteocalcin. Heterophilic antibodies in human serum/plasma can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 2 to 100 ng/ml The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A 17 ): 0.19 ng/ml Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A 17 ): 0.45 ng/ml Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP17-A 17 and CLSI EP5-A2 18 ): 0.81 ng/ml High-dose Hook Effect: None up to 60,300 ng/ml Precision: Samples were processed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples may not maintain strict linearity under dilution in the presence of degradation products of osteocalcin. (See Linearity table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three osteocalcin solutions (101, 201, and 402 ng/ml) were assayed. (See Recovery table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for intact osteocalcin. 16 (See Specificity table.) 4 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

5 Bilirubin: Conjugated and unconjugated bilirubin when added in concentrations of 100 mg/l and higher may interfere with the assay causing depression of values. (See Bilirubin table for representative data.) Hemolysis: May interfere with the assay, causing a depression of values at levels above 150 mg/dl. (See Hemolysis table.) Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from volunteers into plain, lithium-heparin, sodium-heparin, PST and SST plastic vacutainer tubes. All tubes were from Becton Dickinson. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of osteocalcin, to obtain values throughout the reportable range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Osteocalcin procedure. By linear regression: (Li Heparin) = 1.07 (Serum) 1.60 ng/ml r = 0.979, n = 47 Means: 13.5 ng/ml (Li Heparin) 14.2 ng/ml (Serum) (Na Heparin) = 1.01 (Serum) 0.98 ng/ml r = 0.988, n = 44 Means: 12.9 ng/ml (Na Heparin) 13.7 ng/ml (Serum) (PST) = 1.13 (Serum) 2.14 ng/ml r = 0.984, n = 40 Means: 14.5 ng/ml (PST) 14.7 ng/ml (Serum) (SST) = 0.99 (Serum) 0.59 ng/ml r = 0.990, n = 47 Means: 13.5 ng/ml (SST) 14.2 ng/ml (Serum) Method Comparison: The assay was compared to a Nordic Bioscience Diagnostics N-MID assay on 71 patient samples. (Concentration range: approximately 2.4 to 86 ng/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.54 (Nordic N-MID ) 0.72 ng/ml r = Means: 15.7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30.3 ng/ml (Nordic N-MID) References 1) Poser JW, Esch FS, Ling NC, Price PA. Isolation and sequence of the vitamin K-dependent protein from human bone. J Biol Chem 1980;255: ) Price PA, Williamson MK, Lothringer JW. Origin of the vitamin K- dependent bone protein found in the plasma and its clearance by kidney and bone. J Biol Chem 1981;256: ) Civitelli R, Gonnelli S, Zacchei F, Bigazzi S, Vattimo A, Avioli LV, Gennari C. Bone turnover in postmenopausal osteoporosis: effect of calcitonin treatment. J Clin Invest 1988;82: ) Caniggia A, Nuti R, Galli M, Loré F, Turchetti V, Righi GA. Effect of long-term treatment with 1,25-dihydroxyvitamin D 3 on osteocalcin in postmenopausal osteoporosis. Calcified Tissue Int 1986;38: ) Zerwekh JE, Sakhaee K, Pak CYC. Short-term 1, 25-dihydroxyvitamin D 3 administration raises serum osteocalcin in patients with postmenopausal osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab 1985;60: ) Kerner SA, Scott RA, Pike JW. Sequence elements in the human osteocalcin gene confer basal activation and inducible response to hormonal vitamin D 3. Proc Nat Acad Sci USA 1989;86: ) Demiaux B, Arlot ME, Chapuy MC, Meunier PJ, Delmas PD. Serum osteocalcin is increased in patients with osteomalacia: correlations with biochemical and histomorphometric findings. J Clin Endocrinol Metab 1992;74: ) Merle B, Delmas PD. Normal carboxylation of circulating osteocalcin (bone Gla-protein) in Paget's disease of bone. Bone Miner 1990;11: ) Lukert BP, Higgins JC, Stoskopf MM. Serum osteocalcin is increased in patients with hyperthyroidism and decreased in patients receiving glucocorticoids. J Clin Endocrinol Metab 1986;62: ) Charhon SA, Delmas PD, Malaval L, Chavassieux PM, Arlot M, Chapuy MC, Meunier PJ. Serum bone Gla-protein in renal osteodystrophy: comparison with bone histomorphometry. J Clin Endocrinol Metab 1986;63: ) Duda RJ, O'Brien JF, Katzmann JA, Peterson JM, Mann KG, Riggs BL. Concurrent assays of circulating bone Gla-protein and bone alkaline phosphatase: effects of sex, age, and metabolic bone disease. J Clin Endocrinol Metab 1988;66: ) Kruse K, Kracht U, Wohlfart K, Kruse U. Biochemical markers of bone turnover, intact serum parathyroid hormone and renal calcium excretion in patients with pseudohypoparathyroidism and hypoparathyroidism before and during vitamin D treatment. Eur J Pediat 1989;148: ) Ekenstam EA, Ljunghall S, Hällgren R. Serum osteocalcin in rheumatoid arthritis and other inflammatory arthritides: relation between inflammatory activity and the effect of glucocorticoids and remission inducing drugs. IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 5

6 Ann Rheum Dis 1986;45: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2 nd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, ) Fassbender WJ, Steinhauer B, Stracke H, Schumm-Draeger P-M, Usadel K-H. Validation of a new automated immunoassay for measurement of intact osteocalcin. Clin Lab 2002;48: ) NCCLS. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. NCCLS document EP17-A [ISBN ] NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, ) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline Second Edition. CLSI document EP5-A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania , USA, ) Banfi G, Daverio R. In Vitro Stability of Osteocalcin; Technical Brief. Clin Chem 1994;40(5): ) Blumsohn A, Hannon R, Eastell R. Apparent Instability of Osteocalcin in Serum as Measured with Different Commercially Available Immunoassays; Technical Brief. Clin Chem 1995; 41(2): Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % 6 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. 6 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

7 Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Hemolysis (ng/ml) Hemoglobin 1 Unspiked mg/dl 300 mg/dl 600 mg/dl Česky. 1 Hemoglobinu, 2 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Αιμοσφαιρίνη, 2 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Hemoglobiny, 2 Wyjściowa. Bilirubin (ng/ml) Conjugated 1 Unconjugated 2 Unspiked mg/l 200 mg/l 100 mg/l 200 mg/l Česky. 1 Konjugovaný, 2 Nekonjugovaný, 3 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Δεσμευμένη (άμεση), 2 Αδέσμευτη (έμμεση), 3 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Związana, 2 Niezwiązana, 3 Wyjściowa. Specificity Compound 1 Amount Added 2 % Crossreactivity 3 Osteocalcin fragment ng/ml ND Fosamax 50 ng/ml ND IGF ng/ml ND Salicylic acid 500 µg/ml ND IGFBP-3 6 µg/ml ND Biotin 1000 pm ND Bone Alkaline 140 U/L ND Phosphatase Parathyroid Hormone 4000 pg/ml ND Pyrilinks D 15,000 ng/ml ND Rheumatoid Factor 2330 IU/mL ND ND: not detectable 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności Krzyżowej, 4 Nieoznaczlne. Method Comparison IMMULITE 2000 Osteocalcin Nordic Bioscience Diagnostics N-MID, ng/ml (IML 2000) = 0.54 (Nordic N-MID) 0.72 ng/ml r = IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 7

8 Česky IMMULITE 2000 Osteocalcin Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke kvantitativnímu stanovení koncentrace osteokalcinu v lidském séru nebo heparinizované plazmě jako pomůcky při monitorování kostního metabolizmu a metabolizmu minerálů. Katalogové číslo : L2KON2 (200 stanovení) Kód metody : OCN Barva : Tmavě Šedá Shrnutí a vysvětlení Osteokalcin je protein závislý na vitamínu K o molekulové hmotnosti přibližně 5800 daltonů. Tento protein je uváděn jako kostní GLA protein (BGP), protože obsahuje v primární struktuře zbytky 3-gama-karboxyglutamové kyseliny, které se podílejí na vázání vápníku a hydroxyapatitu. 1 Osteokalcin je jedním z nejhojnějších kostních proteinů nekolagenového typu, tvoří až 3 % celkového proteinu v kostech. Kostní tkáň je obnovována prostřednictvím dynamického procesu formování a eliminace. Předpokládá se, že osteokalcin se podílí na utváření kostní tkáně, protože sám je tvořen osteoblasty, 2 buňkami pro tento proces nezbytnými. Navíc osteokalcin je přímo ovlivňován hormony regulujícími vápník (kalcitoninem, 3 paratyroidním hormonem, vitaminem D 4-6 ) nutnými pro normální mineralizaci kostí. O osteokalcinu se často mluví jako o prognostickém indikátoru při vývoji kostního onemocnění. Zvýšené množství osteokalcinu se může objevit při různých onemocněních včetně osteomalacie, 7 Pagetově nemoci kostí, 8 hypertyreózy 9 primární hyperparatyreózy a renální osteodystrofie. 10 Hladina osteokalcinu může být rovněž zvýšená při osteoporóze po menopauze z důvodu zvýšené nebo snížené kostní přestavby. Snížená koncentrace osteokalcinu byla zjištěna při hypoparatyreóze 11,12 a během dlouhodobé léčby kortikosteroidy. 13 Metodou Osteocalcin na analyzátorech IMMULITE 2000 lze stanovit pouze molekuly intaktního osteokalcinu a nikoliv jeho fragmentované formy. 16 Princip Stanovení Stanovení IMMULITE 2000 Osteocalcin je oboustranná chemiluminiscenční imunometrická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší protilátkou proti osteokalcinu. Kapalná fáze obsahuje alkalickou fosfatázu (z telecího střeva) konjugovanou s polyklonální králičí protilátkou proti osteokalcinu v pufru. Vzorek pacienta a reagencie jsou inkubovány společně s potaženou kuličkou 30 minut. Během této doby tvoří osteokalcin ze vzorku sendvičový komplex s monoklonální myší protilátkou proti osteokalcinu na kuličce a s polyklonální králičí protilátkou proti osteokalcinu konjugovanou s enzymem v reagencii. Nenavázaný vzorek pacienta a enzymový konjugát jsou odstraněny centrifugačním mytím. Nakonec je přidán chemiluminiscenční substrát do reakční zkumavky, která obsahuje kuličku a generovaný signál je úměrný koncentraci navázaného enzymu. Inkubační cykly : 1 30 minut Čas do prvního výsledku : 35 minut Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře ; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Krev odeberte venepunkcí 14 (zamezte hemolýze) do chlazených heparinizovaných zkumavek a zapište čas odběru. Po odběru ponořte zkumavky do ledové lázně. Plazmu oddělte od buněk centrifugací v chlazené centrifuze, rozpipetujte na alikvotní části a v plastových zkumavkách okamžitě zamrazte. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Osteocalcin na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. 8 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

9 Potřebný objem vzorku : 10 µl séra nebo heparinizované plazmy. Skladování : 2 hodiny při teplotě 2 8 C 19 nebo 30 dní při 20 C. 20 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. UPOZORNĚNÍ : Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312 P302 + P312 P501 Nebezpečí! Toxický při styku s kůží. Zdraví škodlivý při požití. Toxický pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ ochranné brýle/obličejový štít. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. PŘI POŽITÍ : Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI STYKU S KŮŽÍ : Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje : azid sodný; Osteocalcin kalibrátory Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfylis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu (viz připojený letáček). Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Ke stanovení jsou nutné štítky s čárovými kódy. Osteocalcin zásobník s kuličkami (L2ON12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti osteokalcinu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KON2 : 1 balení Osteocalcin reagencie (L2ONA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s králičí polyklonální protilátkou proti osteokalcinu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KON2 : 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Osteocalcin kalibrátory (LONL, LONH) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací lyofilizovaného osteokalcinu v bílkovino pufrové matrici, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte každou ampulku přidáním 2,0 ml destilované nebo deionizované vody, po přidání vody dejte kalibrátory okamžitě na led. Použijte volumetrické pipety, promíchejte jemným, přerušovaným kroužením až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Je důležité kalibrátory během tohoto procesu chladit. Stabilní při teplotě 2 8 C jeden den po rozpuštění nebo při teplotě 20 C 6 měsíců (rozdělené na alikvotní části). L2KON2 : 1 sada Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 9

10 Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM : Chemiluminiscenční substrát L2PWSM : Promývací roztok L2KPM : Čistící roztok na jehly LRXT : Reakční zkumavky (na jedno použití) LONCM : Dvojúrovňová kontrola obsahující osteokalcin (na bázi bílkoviny) Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu ; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi : 4 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěma koncentracemi (vysokou a nízkou) osteokalcinu. Očekávané hodnoty Výsledkem zkoumání referenčního rozmezí metody IMMULITE 2000 Osteocalcin provedeného na vzorcích od 186 zjevně zdravých dospělých jedinců přinesla střední 95%. referenční rozmezí : < 2,0 22 ng/ml Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Vzorky nemusí být při ředění přesně lineární, pokud obsahují degradační produkty osteokalcinu. Heterofilní protilátky v lidském séru/ plazmy můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno ; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření : 2 až 100 ng/ml Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost : limit blanku (nejvyšší očekávaná hodnota vzorku bez analytu, stanoveno v souladu s CLSI EP17-A 17 ) : 0,19 ng/ml Limit detekce (nejnižší detekovatelná koncentrace, stanoveno v souladu s CLSI EP17-A 17 ) : 0,45 ng/ml Funkční citlivost: (koncentrace s variačním koeficientem 20%, stanoveno v souladu s CLSI EP17-A 17 a CLSI EP5-A2 18 ) : 0,81 ng/ml High-dose Hook Effect : Do ng/ml žádný Přesnost : Vzorky byly stanovovány ve dvou opakováních v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Linearita : Vzorky nemusí být při ředění přesně lineární, pokud jsou obsaženy degradační produkty osteokalcinu. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearity.) Zpětná výtěžnost : Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků osteokalcinu (101, 201 a 402 ng/ml) v poměru 1 : 19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Recovery.) 10 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

11 Specificita : Stanovení je silně specifické pro intaktní osteokalcin. 16 (Viz tabulka Specificity.) Bilirubin : Konjugovaný a nekonjugovaný bilirubin přidaný v koncentracích 100 mg/l a vyšších může interferovat se stanovením a způsobit snížení naměřených hodnot. (Viz tabulka Bilirubin.) Hemolýza : V koncentracích nad 150 mg/dl může interferovat se stanovením a způsobit snížení naměřených hodnot. (Viz tabulka Hemolysis.) Lipémie : Přítomnost triglyceridů in v koncentracích do 3000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku : k určení vlivu alternativního typu vzorku byla odebrána krev od dobrovolníků do obyčejných, lithium-heparin, sodík-heparin, PST a SST plastových zkumavek. Všechny zkumavky byly od firmy Becton Dickinson. Do stejných objemů odpovídajících vzorků byl přidán osteokalcin různé koncentrace tak, abychom získali hodnoty napříč celým kalibračním rozsahem tohoto stanovení. Vzorky byly stanoveny metodou IMMULITE 2000 Osteocalcin. Vyhodnoceny lineární regresí : (Li Heparin) = 1,07 (Sérum) 1,60 ng/ml r = 0,979, n = 47 Střední hodnoty 13,5 ng/ml (Li Heparin) 14,2 ng/ml (Sérum) (Na Heparin) = 1,01 (Sérum) 0,98 ng/ml r = 0,988, n = 44 Střední hodnoty 12,9 ng/ml (Na Heparin) 13,7 ng/ml (Sérum) (PST) = 1,13 (Sérum) 2,14 ng/ml r = 0,984, n = 40 Střední hodnoty 14,5 ng/ml (PST) 14,7 ng/ml (Sérum) (SST) = 0,99 (Sérum) 0,59 ng/ml r = 0,990, n = 47 Střední hodnoty 13,5 ng/ml (SST) 14,2 ng/ml (Sérum) Srovnání metody : Metoda byla porovnána s metodou Nordic Bioscience Diagnostics N-MID na 71 vzorcích pacientů. (Koncentrační rozsah : přibližně 2,4 až 86 ng/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 0,54 (Nordic N-MID) 0,72 ng/ml r = 0,907 Střední hodnoty 15,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30,3 ng/ml (Nordic N-MID) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Οστεοκαλσίνης Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της οστεοκαλσίνης σε ανθρώπινο ορό ή ηπαρινισμένο πλάσμα, ως βοήθημα στον έλεγχο του μεταβολισμού των μετάλλων και των οστών. Αριθμός Καταλόγου: L2KON2 (200 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: OCN Χρώμα: Σκούρο Γκρι Περίληψη και Επεξήγηση Η οστεοκαλσίνη είναι μια πρωτεΐνη εξαρτώμενη από τη βιταμίνη K με μοριακή μάζα περίπου 5800 Dalton. Η πρωτεΐνη έχει αναφερθεί σαν οστική GLA πρωτεΐνη (BGP) εξαιτίας των τριών ομάδων γάμα- καρβοξυγλουταμινικών οξέων (GLA) στην πρωτοταγή δομή που σχετίζονται με τη σύνδεση του ασβεστίου και του υδροξυαπατίτη. 1 Η οστεοκαλσίνη είναι μια από τις πιο άφθονες μηκολλαγονούχες πρωτεΐνες των οστών, αποτελώντας πάνω από το 3% της ολικής οστικής πρωτεΐνης. Ο οστικός ιστός υποβάλλεται σε μια δυναμική διεργασία οστικής σύνθεσης και αποσύνθεσης. Η οστεοκαλσίνη πιστεύεται ότι δρα στη μορφοποίηση του οστικού ιστού, καθώς παράγεται από τους οστεοβλάστες, 2 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 11

12 κύτταρα απαραίτητα γι αυτή τη διαδικασία. Επιπρόσθετα, η οστεοκαλσίνη επηρεάζεται άμεσα από τις ορμόνες που ρυθμίζουν το ασβέστιο (καλσιτονίνη, 3 παραθορμόνη, βιταμίνη D 4-6 ) που είναι απαραίτητες για τη φυσιολογική μεταλλοποίηση του οστού. Η οστεοκαλσίνη έχει θεωρηθεί σαν δείκτης πρόγνωσης της διαδικασίας οστικών ασθενειών. Αυξημένα επίπεδα οστεοκαλσίνης μπορεί να παρατηρηθούν σε διαφορετικές ασθένειες που περιλαμβάνουν την οστεομαλακία, 7 την ασθένεια των οστών Paget, 8 τον υπερθυρεοειδισμό, 9 τον πρωτογενή υπερπαραθυρεοειδισμό και τη νεφρική οστεοδυστροφία. 10 Επιπλέον, τα επίπεδα της οστεοκαλσίνης μπορεί να είναι ανεβασμένα στην οστεοπόρωση μετά την εμμηνόπαυση εξαιτίας του αυξημένου ή του μειωμένου μεταβολισμού των οστών. Χαμηλωμένα επίπεδα της οστεοκαλσίνης έχουν αναφερθεί στον υποπαραθυρεοειδισμό 11,12 και κατά τη διάρκεια μακρόχρονης θεραπείας με κορτικοστεροειδή. 13 Η μέθοδος IMMULITE 2000 Οστεοκαλσίνη μετράει μόνο το ακέραιο μόριο της οστεοκαλσίνης και δεν ανιχνεύει θραύσματα του μορίου. 16 Αρχή της Διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Οστεοκαλσίνη είναι μια ξηρής φάσης, δύο θέσεων, χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση.η ξηρά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικεκαλυμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-οστεοκαλσίνη ποντικού. Η υγρή φάση αποτελείται από αλκαλική φωσφατάση (βόειο έντερο) συνδεδεμένη με πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-οστεοκαλσίνης κουνελιού σε ρυθμιστικό διάλυμα. Το δείγμα του ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με το επικεκαλυμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Κατά τη διάρκεια αυτού του χρόνου, η οστεοκαλσίνη στο δείγμα σχηματίζει ένα σύμπλεγμα σάντουιτς με τα μονοκλωνικά αντισώματα αντι-οστεοκαλσίνης στο σφαιρίδιο και τα συνδεδεμένα με το ένζυμο πολυκλωνικά αντισώματα αντι-οστεοκαλσίνης κουνελιού στο αντιδραστήριο. Τα μη συνδεδεμένα δείγματα του ασθενούς και τα υπολείμματα του ενζύμου απομακρύνονται με φυγοκέντρηση. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα που παράγεται είναι σε συνάρτηση με το συνδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά Συλλογή Δείγματος Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Συλλέξτε αίμα με φλεβοκέντηση 14 (αποφεύγοντας την αιμόλυση) σε παγωμένους ηπαρινισμένους σωλήνες, σημειώνοντας την ώρα της συλλογής. Οι σωλήνες πρέπει να μπουν σε πάγο αμέσως μετά τη συλλογή. Διαχωρίστε το πλάσμα από τα κύτταρα με φυγοκέντρηση σε ψυχόμενη φυγόκεντρο, μετά διαμοιράστε και ψύξτε αμέσως σε πλαστικούς σωλήνες. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Οστεοκλασίνη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο «Εναλλακτικοί τύποι δειγμάτων» για λεπτομέρειες στους σωλήνες που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορού ή Ηπαρινισμένο Πλάσμα Αποθήκευση: 2 ώρες στους 2 8 C 19 ή 30 ημέρες στους 20 C. 20 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση. ΠΡΟΣΟΧH: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. 12 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

13 H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312 P302 + P312 P501 Κίνδυνος! Τοξικό σε επαφή με το δέρμα. Επιβλαβές σε περίπτωση κατάποσης. Τοξικό για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/ πρόσωπο. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: αζίδιο νατρίου, Ρυθμιστές Οστεοκαλσίνης Αντιδραστήρια: Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζιδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρησιμοποιείτε δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Οστεοκαλσίνης Συσκευασία σφαιριδίων (L2ON12) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια καλυμμένα με μονοκλωνικά αντισώματα αντί-οστεοκαλσίνης ποντικού. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KON2: 1 συσκευασία Δοχείο Αντιδραστηρίων Οστεοκαλσίνης (L2ONA2) Με γραμμογράφηση 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συνδεδεμένη με πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-οστεοκαλσίνης κουνελιού. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KON2: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Οστεοκλασίνης (LONL, LONH) 2 φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλιμένης οστεοκαλσίνης σε μήτρα πρωτεϊνης/ρυθμιστικού διαλύματος, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλίδιου με 2,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού, και μετά τοποθετείστε τους ρυθμιστές αμέσως στον πάγο. Χρησιμοποιήστε ογκομετρικές πιπέτες και αναδεύστε με ήπια περιστροφή, έως το λυοφιλιμένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Είναι σημαντικό να διατηρείτε τους ρυθμιστές κρύους κατά τη διάρκεια όλης της διαδικασίας. Σταθεροί στους 2 8 C για μια μέρα μετά την ανασύσταση ή 6 μήνες (διαμοιρασμένοι) στους 20 C. L2KON2: 1 σετ IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 13

14 Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Έμπλυμα του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης LONCM: Δύο επιπέδων ορός ελέγχου που περιέχει οστεοκαλσίνη (που βασίζεται σε πρωτεΐνη) Χρειάζονται επίσης Δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δείγματα ελέγχου ποιότητας, γυάλινα σωληνάρια Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Χρονικό διάστημα επαναρύθμισης της καμπύλης: 4 εβδομάδες Δείγματα Ελέγχου Ποιότητας: Δείγματα Ελέγχου Ποιότητας: Χρήση δειγμάτων ελέγχου ή ορών τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και ψηλό) οστεοκαλσίνης. Αναμενόμενες τιμές Μια μελέτη του εύρους αναφοράς για την IMMULITE 2000 οστεοκαλσίνη έγινε σε 186 φαινομενικά υγιείς εθελοντές που έδωσε ένα κεντρικό εύρος αναφοράς 95%: < 2,0 22 ng/ml Θεωρείστε τα όρια αυτά μόνο σαν οδηγούς. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Τα δείγματα μπορεί να μην εμφανίζουν αυστηρή γραμμικότητα μετά από αραίωση, αν υπάρχουν προϊόντα αποικοδόμησης της οστεοκαλσίνης. Τα ετεροφιλικά αντισώματα που περιέχονται στον ανθρώπινο ορό/ πλάσματος μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιλαμβάνονται στα συστατικά της εξέτασης έχοντας ως αποτέλεσμα την παρεμβολή τους στις ανοσομετρικές εξετάσεις in vitro. [Βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Δείγματα από ανθρώπους που εκτίθενται συχνά σε ζώα ή σε προϊόντα ορού ζώων μπορεί να έχουν τέτοια παρεμβολή και ως εκ τούτου λανθασμένο αποτέλεσμα. Τα αντιδραστήρια σχεδιάστηκαν έτσι ώστε να ελαχιστοποιείται αυτός ο κίνδυνος; παρόλα αυτά, ενδεχόμενες αλληλεπιδράσεις μεταξύ κάποιων σπάνιων ορών και των συστατικών της εξέτασης μπορεί να συμβούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης πρέπει πάντοτε να συνδυάζονται με την κλινική εξέταση, το ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Δείτε παρακάτω τους πίνακες και τα γραφικά που αναπαριστούν την απόδοση της εξέτασης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος Μέτρησης: 2 με 100 ng/ml Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική ευαισθησία: Όριο του τυφλού (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή για δείγμα χωρίς αναλύτη που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A 17 ): 0,19 ng/ml 14 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

15 Όρια της ανίχνευσης (χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A 17 ): 0,45 ng/ml Λειτουργική Ευαισθησία: (συγκέντρωση με 20% συντελεστή διασποράς (CV) που προσδιορίζεται σύμφωνα με τις CLSI EP17-A 17 και CLSI EP5-A2 18 ): 0,81 ng/ml Επίδραση Φαινομένου Hook: Δεν εμφανίζεται μέχρι τις ng/ml. Ακρίβεια: Τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν για 20 ημέρες, με δύο τρεξίματα την ημέρα για ένα σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (Βλ. Πίνακα Precision.) Γραμμικότητα: Τα δείγματα μπορεί να μην εμφανίζυον αυστηρή γραμμικότητα μετά από αραίωση, αν υπάρχουν αποικοδομημένα προϊόντα της οστεοκαλσίνης. (Βλ. Πίνακα Linearity.) Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα οστεοκαλσίνης (101, 201 και 402 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. Πίνακα Recovery για τα αντιπροσωπευτικά δείγματα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα εμφανίζει υψηλή ειδικότητα για την ακέραια οστεοκαλσίνη. 16 (Βλ. πίνακα Ειδικότητα.) Χολερυθρίνη: Δεσμευμένη και αδέσμευτη χολερυθρίνη, όταν προστίθεται σε συγκεντρώσεις από 100 mg/l και πάνω μπορεί να επηρεάσουν τη μέθοδο, προκαλώντας πτώση των τιμών. (Βλ. Πίνακα Bilirubin για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Αιμόλυση: Μπορεί να επηρεάσει τη μέθοδο, προκαλώντας πτώση των τιμών σε επίπεδα πάνω από 150 mg/dl. (Βλ. Πίνακα Hemolysis.) Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να αξιολογηθεί η επίδραση διαφορετικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από εθελοντές σε απλούς σωλήνες, σε σωλήνες με ηπαρίνη με λίθιο ή νάτριο, σε PST και SST πλαστικούς σωλήνες κενού. Όλοι οι σωλήνες ήταν από την Becton Dickinson. Ίσοι όγκοι από τα αντίστοιχα δείγματα προστέθηκαν σε διάφορες συγκεντρώσεις οστεοκαλσίνης, ώστε να επιτευχθούν τιμές μέσα στα αναφερόμενα εύρη της μεθόδου και αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 Οστεοκαλσίνης. Με γραμμική παλινδρόμηση: (Li Ηπαρίνη) = 1,07 (Ορός) 1,60 ng/ml r = 0,979, n = 47 Μέσοι όροι: 13,5 ng/ml (Li Ηπαρίνη) 14,2 ng/ml (Ορός) (Na Ηπαρίνη) = 1,01 (Ορός) 0,98 ng/ml r = 0,988, n = 44 Μέσοι όροι: 12,9 ng/ml (Na Ηπαρίνη) 13,7 ng/ml (Ορός) (PST) = 1,13 (Ορός) 2,14 ng/ml r = 0,984, n = 40 Μέσοι όροι: 14,5 ng/ml (PST) 14,7 ng/ml (Ορός) (SST) = 0,99 (Ορός) 0,59 ng/ml r = 0,990, n = 47 Μέσοι όροι: 13,5 ng/ml (SST) 14,2 ng/ml (Ορός) Σύγκριση της Μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με τη μέθοδο της Nordic Bioscience Diagnostics N-MID σε 71 δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 2,4 με 86 ng/ml. Δες γράφ.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,54 (Nordic N-MID) 0,72 ng/ml r = 0,907 Μέσοι όροι: 15,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30,3 ng/ml (Nordic N-MID) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 15

16 Polski IMMULITE 2000 Osteokalcyna Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia poziomu poziomu osteokalcyny w ludzkiej surowicy lub osoczu heparynowym, przydatny w monitorowaniu gospodarki mineralnej i metabolizmu i kości. Numery katalogowe: L2KON2 (200 testów) Kod Testu: OCN Kolor: Ciemno szary Wprowadzenie Osteokalcyna jest zależnym od witaminy K białkiem o masie 5800 D. Nazwa osteokalcyny: białko kostne GLA (BGP) związana była z obecnością w pierwotnej strukturze osteokalcyny reszt kwasu 3 gamma karboksy glutaminowego (GLA) odpowiedzialnych za wiązanie wapnia i hydroksyapatytów. 1 Osteokalcyna jest jednym z głównych białek niekolagenowych kości stanowiącym 3% całkowitego białka tej tkanki. Tkanka kości przechodzi dynamiczne procesy formowania i resorpcji. Osteokalcynie przypisywany jest udział w procesie tworzenia tkanki kostnej jako, że jest wytwarzana przez osteoblasty 2 będące komórkami podstawowymi dla procesu tworzenia kości. Osteokalcyna podlega, ponadto, bezpośredniemu wpływowi hormonów regulujących poziom wapnia (kalcytonina, 3 parathormon witamina D 4-6 ), które są niezbędne dla prawidłowej mineralizacji kości. Rola osteokalcyny jako czynnika prognostycznego w postępujących chorobach kości jest obecnie szeroko dyskutowana. Wzrost poziomu osteokalcyny może następować w szeregu różnych chorób, do których należą: rozmięknienie kości, 7 choroba Pageta 8, nadczynność tarczycy, 9 pierwotna nadczynność przytarczyc i osteodystrofia nerkowa. 10 Poziom osteokalcyny może nadto wzrastać w przypadku osteoporozy u kobiet po menopauzie, co wiąże się ze wzrostem lub obniżeniem nasilenia przebudowy kości. Obniżenie poziomu osteokalcyny notowano w przypadkach niedoczynności przytarczyc 11,12 i w trakcie długotrwałej terapii kortykosterydami. 13 W teście IMMULITE2000 Osteokalcyna oznaczana jest nienaruszona cząsteczka osteokalcyny, fragmenty rozpadu cząsteczki nie są rozpoznawane. 16 Zasada testu IMMULITE 2000 Osteocalcyna jest dwupunktowym, immunometrycznym testem chemiluminescencyjnym fazy stałej. Faza stała (kulka) opłaszczona jest mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-osteokalcyna. Faza ciekła składa się z fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) koniugowanych z króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-osteteokalcyna w buforze. Próbka badana i odczynnik inkubowane są razem z kulką przez 30 minut. W czasie tym osteokalcyna z próbki tworzy kompleks w postaci kanapki z mysim przeciwciałem monoklinalnym antyosteokalcyna na kulce i enzymem sprzęgniętym z poliklonalnym przeciwciałem króliczym antyosteokalcyna z odczynnika. Niezwiązana próbka badana i odczynnik usuwane są w trakcie płukania połączonego z wirowaniem. Na końcu do probówki reakcyjnej zawierającej kulkę dodawany jest substrat chemiluminescencyjny, a generowany sygnał proporcjonalny jest do ilości związanego enzymu. Czas inkubacji: 1 30 minut Czas do pierwszego wyniku: 35 minut Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Krew żylną 14 pobierać (unikając hemolizy) do schłodzonych w lodzie probówek zwykłych lub z heparyną, notować czas pobrania. Wypełnione probówki przechowywać w łaźni lodowej. Elementy morfotyczne oddzielać od surowicy lub osocza przez wirowanie w wirówce z chłodzeniem. Niezwłocznie rozlewać do plastykowych probówek i natychmiast zamrażać. 16 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

17 W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Osteokalcyna nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ rodzaju materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 10 µl surowicy lub osoczu heparynowym. Przechowywanie materiału: 2 godziny w 2 8 C 19 lub 30 dni w 20 C. 20 Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H311, H302, H411 P280, P273, P301 + P312 P302 + P312 P501 Niebezpieczeństwo! Działa toksycznie w kontakcie ze skórą. Działa szkodliwie po połknięciu. Działa toksycznie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ ochronę oczu/ochronę twarzy. Unikać uwolnienia do środowiska. W PRZYPADKU POŁKNIĘCIA: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. Pojemnik I zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: azydek sodu; Osteokalcyna kalibratory zestawu Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać jako konserwant azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat Chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Osteokalcyna Pojemnik z Kulkami (L2ON12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-osteokalcyna. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KON2: 1 opakowanie Osteokalcyna Klin odczynnikowy (L2ONA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z poliklonalnym króliczym przeciwciałem anty-osteokalcyna. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KON2: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Osteokalcyna Kalibratory zestawu (LONL, LONH) Dwie fiolki (Niski i Wysoki) zawierające liofilizowaną osteokalcynę w matrycy buforowanego białka z konserwantem. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować 2,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej i natychmiast po dodaniu wody kalibratory umieszczać w łaźni lodowej. Stosować pipety miarowe. Mieszać delikatnie przez sporadyczne toczenie lub odwracanie aż do pełnego rozpuszczenia materiału. Istotne jest by kalibratory w trakcie rekonstytucji IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 17

18 pozostawały zimne. Po rekonstytucji stabilne 1 dzień w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C. L2KON2: 1 zestaw Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały dostarczane oddzielnie L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący igłę pipetora LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) LONCM: Dwupoziomowa kontrola zawierająca osteokalcynę w matrycy białkowej Ponadto niezbędne woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy Rekalibracjami: 4 tygodnie Próbki Kontrolne: stosować próbki kontrolne lub pule surowic o co najmniej niskim i wysokim poziomie osteokalcyny. Oczekiwane wartości W badania referencyjnych przeprowadzonych testem IMMULITE 2000 w grupie 186 ewidentnie zdrowych osób ustalono zakres środkowych 95% na: < 2,0 22 ng/ml Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Rozcieńczanie próbek może powodować utratę pełnej liniowości z powodu obecności produktów degradacji osteokalcyny. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy/osoczu ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki podano w ng/ml. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Zakres raportowania: ng/ml Test wykazuje zgodność pomiarową z wewnętrznymi standardami wytwarzania dzięki zastosowaniu kwalifikowanych materiałów i metod pomiaru. Czułość analityczna: Zakres Ślepej próby (najwyższa oczekiwana wartość dla próbki bez analitu; określona zgodnie z CLSI EP17-A 17 ): 0,19 ng/ml Granica wykrywalności: (najniższe oznaczalne stężenie; określona zgodnie z CLSI EP17-A 17 ): 0,45 ng/ml 18 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

19 Czułość funkcjonalna: (stężenie z 20% współczynnikiem zmienności (CV) określona zgodnie z CLSI EP17-A 17 i CLSI EP5-A2 18 ): 0,81 ng/ml Efekt wysokiej dawki Hook Effect: Nie występuje do stężenia ng/ml Precyzja: Próbki oznaczano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń (patrz: Tabela Precyzja). Liniowość: Rozcieńczanie próbek może powodować utratę pełnej liniowości z powodu obecności produktów degradacji osteokalcyny (patrz: tabela Liniowość). Odzysk: Oznaczano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami osteokalcyny o stężeniach kolejno: 101, 201 i 402 ng/ml (patrz: Tabela Odzysk). Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne w stosunku do nienaruszonej osteokalcyny 16 (patrz: tabela Specyficzność). Bilirubina: Bilirubina związana i niezwiązana dodana w stężeniach 100 mg/l i wyższych może zakłócać oznaczenie powodując obniżenie wartości (patrz: tabela Bilirubina). Hemoliza: Może zakłócać oznaczenie powodując obniżenie wartości w stężeniach powyżej 150 mg/dl hemoglobiny. (patrz: tabela Hemoliza). Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do 3000 mg/dl nie ma znaczącego wpływu na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Wpływ materiału na oznaczenie: Wpływ rodzaju próbki na oznaczenie określano w próbkach krwi pobieranych od ochotników do plastikowych probówek próżniowych: zwykłych, z heparyną litową, heparyną sodową, PST i SST, wszystkie firmy Becton Dickinson. Jednakowe objętości porównywanych próbek wzbogacano różnymi stężeniami osteokalcyny dobieranymi tak, by pokryć zakres raportowania testu i oznaczano w teście IMMULITE 2000 Osteokalcyna. Uzyskano następujące równania regresji liniowej: (Heparyna Li) = 1,07 (Surowica) 1,60 ng/ml r = 0,979, n = 47 Średnie 13,5 ng/ml (Heparyna Li) 14,2 ng/ml (Surowica) (Heparyna Na) = 1,01 (Surowica) 0,98 ng/ml r = 0,988, n = 44 Średnie 12,9 ng/ml (Heparyna Na) 13,7 ng/ml (Surowica) (PST) = 1,13 (Surowica) 2,14 ng/ml r = 0,984, n = 40 Średnie 14,5 ng/ml (PST) 14,7 ng/ml (Surowica) (SST) = 0,99 (Surowica) 0,59 ng/ml r = 0,990, n = 47 Średnie 13,5 ng/ml (SST) 14,2 ng/ml (Surowica) Porównanie metod: Test porównywano z testem Nordic Bioscience Diagnostics N-MID w grupie 71 próbek badanych. (Zakres stężęń: od około 2,4 do 86 ng/ml. Porównaj wykres.) Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,54 (Nordic N-MID) 0,72 ng/ml r = 0,907 Średnie 15,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30,3 ng/ml (Nordic N-MID) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KON 7 {19} IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 19

20 Changes in this Edition: cc#eu22526: 1) Under Warnings and Precautions, added caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Changed Origin: UK to Made in: UK. 3) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 4) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej Symbol Definition En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE 20 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, )

21 Symbol Definition En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym BEAD PACK Symbol Definition En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami LOT En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii TEST UNIT En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów REAG WEDGE REAG WEDGE A REAG WEDGE B REAG WEDGE D En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: Δοχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik En: Corrosion Cz: Koroze El: Διάβρωση Pl: Działanie żrące En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko ADJUSTOR ADJUSTOR L ADJUSTOR H ADJUSTOR AB DIL CONTROL CONTROL 1 CONTROL 2 CONTROL 3 En: Adjustor Cz: Kalibrátor El: Ρυθμιστής Pl: Kalibrator En: Adjustor, low Cz: Kalibrátor, nízký El: Ρυθμιστής, χαμηλό Pl: Kalibrator, niski En: Adjustor, high Cz: Kalibrátor, vysoký El: Ρυθμιστής, υψηλό Pl: Kalibrator, wysoki En: Adjustor Antibody Cz: Protilátka proti kalibrátoru El: Ρυθμιστής αντισώματος Pl: Przeciwciało Kalibratora En: Sample Diluent Cz: Diluent Vzorků El: Αραιωτικό δείγματος Pl: Rozcieńczalnik próbek En: Control Cz: Kontrola El: Έλεγχος Pl: Kontrola IMMULITE 2000 Osteocalcin (PIEL2KON-7 {19}, ) 21