Effect of HCV Core Protein on Expression of α-sma in Human Stellate Cell, LX-2 Cell Line

Transcript

1 Downloaded from mjms.modares.ac.ir at 0:24 IRST on Saturday October 6th 2018 Original Article Effect of HCV Core Protein on Expression of α-sma in Human Stellate Cell, LX-2 Cell Line Ali Maleki1, Mehrdad Ravanshad2*, Seyed Younes Hosseini3, Mohammad Gholami4 1- M.Sc. Student, Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 2- Associated Professor, Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 3- Assistant Professor, Gastroenterohepatology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran 4- M.Sc., Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran *Corresponding Address: Postal Code: , Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Received: 17/Jun/2015, Accepted: 05/Jan/2016 Abstract Objective: Hepatitis C virus (HCV) is considered to be a worldwide health problem. In most cases, HCV infection becomes chronic and may proceed to fibrosis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma. Many pathological effects in cells may occur by viral proteins. The purpose of this study is to evaluate the effect of the HCV core protein on cells to induction of the fibrogenesis process. Methods: We use the LX-2 cell line that originated from hepatic stellate cells. Plasmid which expressed HCV core protein was transfected to the cells. After 72 h, RNA was extracted and treated with DNase, followed by synthesis of cdna. Positive control cells were treated with the leptin fibrotic hormone. We used real-time PCR to measure and statistically analyze α-sma gene expression. Results: The HCV core protein significantly increased α-sma gene expression (p<0.05). There was more α-sma gene expression in cells treated with leptin compared to cells treated with the HCV core protein. Conclusion: HCV infection is an impressive factor in the development of chronic hepatitis to hepatic fibrogenesis. The HCV core protein can induce a fibrogenesis process in HCV infection. Keywords: Hepatitis C virus, Hepatic fibrosis, Core protein, α-sma, Real-time PCR Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), No. 4, Pages: Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), No. 4 17

2 مقبله اصیل تأثیر پروتئین مرکزی ویروس هپبتیت C بر بیبن اکتینهبی آلفبی عضله صبف در رده سلولی ستبرهای انسبنی LX-2 4 علی ملکی 1 مهرداد روانشاد *2 سید یونس حسینی 3 محمد غالمی - 1 دانشجوی کبرشنبسی ارشد گزوه ویزوس شنبسی دانشکده علوم پششکی دانشگبه تزبیت مدرس تهزان ایزان - 2 دانشیبر گزوه ویزوس شنبسی دانشکده علوم پششکی دانشگبه تزبیت مدرس تهزان ایزان - 3 استبدیبر مزکش تحقیقبت گوارش وکبد دانشگبه علوم پششکی شیزاس شیزاس ایزان - 4 کبرشنبسی ارشد گزوه ویزوس شنبسی دانشکده علوم پششکی دانشگبه تزبیت مدرس تهزان ایزان *آدرس نویسنده مسئول 4 ا یزان تهزان کدپستی دانشگبه تزبیت مدرس دانشکده علوم پششکی گزوه و یزوس شنبسی ravanshad@modares.ac.ir پذیزش مقبله 34/13/11 4 دریبفت مقبله 34 /33/22 4 چكيذ ذف : اهز س یز ط ذبسیز C ث ػ اى یک هؾکل عالهز در سوبم د یب هغزح اعز. ػف تز یتز ط ذبسیتز C در اکثتز ه ارد هشهي هیؽ د در اداه ث عوز فیجز س عیز س کبرعی هبی عل ل تبی کجت ی دتیؼ هتیر د. ثغتیبری اس سغییتزار در عل ل ث اعغ دز سئیي بی یز عی ف رر هیگیتزد. ت ف اس ایتي دتض ؼ ارسیتبثی ستث یز دتز سئیي هزکتشی یتز ط ذبسیز C ثز القبی ر فیجزسایی در عل ل اعز. م اد ي ريش ا : در ایي دض ؼ اس رد عل لی LX-2 ک اس ه ؾث عل ل بی عشبر ای کجت اعتز اعتشفبد ؽت. دالعتوی ثیتبى ک دز سئیي هزکشی یز ط ذبسیز C ث عل ل ب سزا غفکز ؽ. دتظ اس 72 عتبػز اعتشازا RNA دتظ اس سی وتبر ثتب cdna DNase س لی ؽ. عل ل بی ک شزل هثجتز یتش ثتب رهت ى فیجز سیتک لذشتیي سی وتبر ؽت. در خرتز ثتب اعتشفبد اس ر ػ Real-Time PCR هیشاى ثیبى صى اکشیي خلفبی ػضل فبف ا اس گیزی ؽ ه رد سجشی سحلی ل خهبری قزار گزفز. وتایج : یبفش ب ؾبى داد ک دز سئیي هزکشی یز ط ذبسیز C ثبػث افشایؼ ثیتبى هؼ تی دار در ثیتبى صى اکشتیي خلفتبی ػضتل فبف هیؽ د (.)P> 0 /05 ثیبى صى اکشیي خلفبی ػضل فبف در عل ل بی سی وبرؽ ثتب لذشتیي ثیؾتشز اس عتل ل تبی سی وبرؽت ثب core یز ط ذبسیز C ث د اعز. وتيج گيری : ثب س ج ث یبفش بی ث دعز خه ػف ز یز ط ذبسیز C ػبهتل هتر ز در دیؾتجزد ذبسیتز هتشهي ثت عتوز فیجز س ؽ ى ثبفز کج اعز در ایي هیبى دز سئیي Core یز ط ذبسیز C هیس ا هغتیز فیجزسایتی در ذبسیتز یز عتی را القب ک. کليذياشگان : یز ط ذبسیز C فیجز س کج ی دز سئیي هزکشی اکشیي بی خلفب ػضل فبف Real-Time PCR پژوهش هبی آسیب شنبسی زیستی دوره 18 شمبره 4 زمستبن 1314 صفحبت : مقذم ػبرض ایجبد ؽ ث د جبل سزهین ف هبر هکزر در ثبفز ػ اهل حبد هشهي هب هقزف الکل ػف ز بی یز عی کج را فیجز س هی به. ػلل ایجبد فیجز س ؽبهل عیف عیؼی اس ػف ز بی ا گلی دار ب عو م چزثی ر ى ثیوبری بی ش هبی آسیب شنبسی زیستی دوره 18 شمبره 4 زمستبن 1314 پژوه 72

3 تأثیر پروتئیه مرکسی HCV بر رده سلولی LX-2 اسح دز سئیي بی هبسزیکظ ربر عتل لی ( Extra Cellular عل ل ب سکثیز سیبدی دار ثب افتشایؼ عت شش ECM س عتظ ) Matrix: ECM در ثبفز کجت ی اعتز. دیؾتزفز فیجتز س در خى ب فیجز س دیؾزفز هیک [.]6 5 بیز ث عیز س ( ) Cirrhosis عزعبى کج حشی هزگ ه جز ث شزیي هثبل رد بی عل لی فیجز سی اس لحبػ س هب ى هیؽ د. ؽکل گیزی دیؾزفز فیجز س کج ی یبسه ت ا جبؽتش هشبث لیغن رسی ی ( ) Retinoid فیجز ص ی س ا بیی ثیبى صى بی ؽ ى رؽش بی کالصى در ECM اعز [.]2 1 دارلی ربرجی سز غفکز دذیزی دبعخ ث عیش کبیي بی در ایجبد فیجز س افشایؼ عبرز ECM کتب ؼ سجشیت هشفب ر رد عل لی LX2 LX1 اعز [.]7 هبسزیکظ ضز ری اعز. در حبلز عجیؼی هبسزیکظ ث ع ر ه ا م در ایي دض ؼ اس رد عل لی LX2 ک در اقغ هؾشق ؽ اس س عظ گز ی اس خ شین بی اثغش ث ػ بفز فلشی کلغین ر ی HSC بی ا غب ی غش اعشفبد ؽ. حق اعشفبد اس ایي عل ل ب ث بم هبسزیکظ هشبل دز سئی ب س ( ) Matrix metalloproteinase یب در ا حقبر عبس خى ب یؼ ی دکشز اعکبر فزی هي ( Scott L هبسزیکغیي ( ) Matrixin سجشی هیؽ د [.]1 ) Friedman اعز. اس ایي ر ثب اجبس کشجی ایؾبى خریتز ایتي در هزاحل دیؾزفش فیجز س کج حب ی ؽؼ ثزاثز عجیؼی اس ECM ب ؽبهل کالصى (سیخ ) فیجز کشیي ( ) fibronectin عل ل ب س عظ دکشز ی ظ حغی ی (دا ؾگب ػل م دشؽکی ؽیزاس) اس هزکش سحقیقبر CIMA کؾ ر اعذب یب س ی ؽ اعز. اکشیي بی خلفبی ػضتل فتبف ( α-smooth muscle actin: ثب س ج ث فزا ا ی ؽی ع ثبالی ذبسیز Hepatitis ( C B ) α-sma ا لیي ( ) Endothelin االعشیي ( ) Elastin الهی یي ( ) B & C ث سزسیت ثب هیلی ى فز در د یب) هتیست اى ( ) Laminin یبل ر بى ( ) Hyaluronan دز سئ گلیکتبى تب گفز ک ایي د یز ط اس ه نسزیي ػ اهتل فیجتز س غتش. ( ) Proteoglycans اعز. ه جغ افلی س لی ECM عل ل بی یز ط ذبسیز B یک یز ط DNA دار اعز ک ث اعتغ عشبر ای کجت ( ) Hepatic Stellate Cell: HSC اعتز [.]3 اس س لی هی ی کز ه س م در چزر سکثیز ر د س ا بیی ادغبم ؽ ى هیبى ایي ػ اهل α-sma ب هؾاـ هتیؽت د. ثت اعتشث بی ( ) Integration در ص م هیشثبى را دارد. ایي اهز ث ث رت د عل ل بی ػضالر فبف احبع ک ػتز ثتشرگ فقتظ ث بدبی اری ص م هیشثبى سغییزار ػو در ثیبى صى بی عل ل س عظ عل ل بی عشبر ای کج س لی هیؽ س عظ هتبثقی ه جز هیؽ د. اهب اس ع ی دیگز یز ط ذبسیز C یک RNA عل ل بی کج ی چ در حبلز عجیؼی چ در حبلتز خعتیت یز ط اعز قبدر ث ادغبم ؽ ى در ص م هیشثبى ا ا ث د. دی گی ثیبى ویؽ [.]4 اس ایي ر ر اؿ عزعبى سایی خى را ث ا ت اع دتز سئیي تبیؼ جبیگب افلی ایي عل ل ب ک دیؾشز ثب بم بی عل ل تبی ایشت ( ) Ito Cells لیذ عیش عتل ل تبی خریتز ک ت چزثتی هب دز سئیي بی هزکشی ( ) Core د ؽؾی غیز عتبرشبری غجز داد ا [.]9 8 ؽ برش هی ؽ در کج عجیؼی در حبلز خراهؼ در فضبی احی غجشب حفبظز ؽ یز ط ذبسیز C هب core دیظ ( ) Space of Disse یؼ تی فضتبی ثتیي ذبس عتیز تب NS5 E1 ثغتتیبر هغبلؼتت ثزرعتتی ؽ ت ا ت ثتتز اعتتبط ( ) Hepatocytes عتتل ل تتبی ا تت سلیبل عتتی س ی ال ج ی سزیي عجق ث ی ج ای بی ایي یز ط در فز ص سیخ ( ) Sinusoidal اعز. در دی خعیت ب سحزیکبر کج ی ایي هؾاـ [ ]7 1 ثیؼ اس ؽقز فز سیزسبیخ ( ) Subtype عل ل ب اس ایي فضب ربر ؽ خربیز یشبهیي A رت د را اس دعش ث ی هیؽ [.]10 دعز داد ؽز ع ث ع شش α-sma هیک ثب ف سیذی ؽجی ذبس عیز بی خل د ث یز ط ذبسیز C ػال ثز خىک ف سیخ هی فیجز ثالعز تب ( ) Myofibroblast ارد دبرا ؾتین ثب سزؽح ا اع ه اد اعغ ثبػث فزار ا ی عل ل بی الش بثی Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N هشبث لیکی اعز. ث ػجبرر دیگز فیجز س کج ی ث هؼ ی سجوغ ثیؼ هیؽ. ایي حبلز را فؼتبل ؽت ى HSC تب هتی به ت. ایتي

4 عل ی ملک ی و همکبران گغشزػ فیجز س هیؽ ث اعغ دز سئیي بی یز عی یش ث ( ) Transformation اعشفبد ؽ. اثش ا ثبکشزی ث ر ػ ؽت ر فیجز سایی ( ) Fibrogenesis در ثبفز کج کوک هیک. حزارسی هحل ل CaCl2 هغشؼ ( ) Competent ؽ عتذظ فؼبل ؽ ى ثیؾشز HSC ب ه شج هیؽ د. دز سئیي هزکشی ( HCV ثبکشزی DH5α سزا غتف رم در ى هحتیظ LB هتبیغ حتب ی ) Core یک دز سئیي هشقل ث ( RNA کلئ دز سئیي) اعز ک خهذیعیلیي ( ) Ampicillin در ا ک ثبس ر ا ک ث ؽ. در سؾکیل کئ کذغی قؼ دارد ثغش ث ع عل ل فؼ هیس ا خ بر هاشلفی ثز رؽ عل لی هزگ عل لی ثز به ریشی ؽ ( ) Apoptosis اعشزط اکغی اسی ( ) Oxidative Stress عزعبى سایی ایجبد الش بة... ثگذارد [.]11 ف اس ا جبم دض ؼ ارسیتبثی ا تز فیجز سیتک دتز سئیي هزکشی یز ط HCV ثز HSC بی ا غب ی اعز. ثزای سحقق ایي اهتز اس دالعتوی ثیتب ی دتز سئیي هزکتشی یتز ط HCV اعشفبد ؽ. ایي دالعوی دظ اس ر د ث رد عل لی LX2 ک اس ث شزیي رد بی عل لی فیجز سی ا غب ی ثت ؽتوبر هتی ر د ؽز ع ث س لی دز سئیي هزکشی HCV هیک. ث د جتبل س لیت ایي دز سئیي الگ ی ثیبى صى عل ل ب سغییتز کتزد ثت عتوز فیجز سی ؽ ى دیؼ ر ا رفز. ا اس گیزی ثزرعتی ایتي سغییزار ثب ر ػ ( Real-time PCR ثت ه ظت ر جتز سغییتزار ثیبى صى ) α-sma ف رر گزفز. استخراج پالسميذ دالعوی بی هت رد اعتشفبد در ایتي دتض ؼ ؽتبهل د دالعوی ( PIRES2 ث ع ل سقزیجی 5 کیل ثبس هحق ل سجبری Clontech خهزیکب ) دالعوی ثیب ی ( paav/full core ثت ع ل سقزیجی 9 کیل ثبس عزاحی ؽ س عظ دکشز ی ظ حغی ی اس هزکش CIMA اعذب یب) اعز. ثتزای اعتشازا دالعتوی ب اس کیتز Bioneer( AccuPrep Plasmid Extraction کتز ) اعشفبد ؽ. آماد سازی ي کشت سل ل عل ل بی رد LX-2 در ؽزایظ 37 درج عب شیگزاد 5 درف CO2 در هحیظ کؾز Dulbecco's Modified ( DMEM رهتتت ى لذشتتتتیي ( ) Leptin عتتتتبیش کبیي TGF-β1 ) Eagle Medium ؽتبهل 10 FBS درفت ( Fetal Bovine ( ) Transforming growth factor beta 1 ثتتت ػ تتت اى ) Serum د یعیلیي / اعشزدش هبیغیي ( ) Penicillin/Streptomycin فؼبلک بی عل ل بی LX2 ؽ برش هتیؽت [.]12 7 در ث هیشاى 100 اح در هیلیلیشز ا ک ث ؽ. عل ل ب ز د ر س ایي دض ؼ ره ى لذشیي ثت ػ ت اى ک شتزل هثجتز خسهتبیؼ یک ثبر سؼ یض هحیظ ؽ. عل ل بی سیوبر دت جن س عتظ اعشفبد ؽ. سزیذغیي )Ethylenediaminetetraacetic acid ( EDTA- ث هیشاى 500 هیلیگزم اس کف دلیز ج ا سؼ اد 300 شار عل ل ث ز یک م اد ي ريش ا اس رب بی دلیز ؽؼ رب ه شقل حجن بیی س عظ هحیظ کشت باکتری ي تراوسف رماسي ن دارای 8 درف عزم ث 2/5 هیلیلیشز رعب ؽ. اثش ا یک کل ی اس عت ی DH5α ثتبکشزی اؽزیؾتیب کلتی ( ) Escherichia coli در ى ل ل خسهبیؼ حتب ی 5 هیلتیلیشتز تراوسفكشه ( )Transfection هحیظ ) Lysogeny broth ( LB هبیغ ث ى خ شیثی سیک سلقیح اثش ا عل ل ب س عظ الم ئ ثبر ر گ حیبسی سزیذتبى ثلت ؽ دظ اس یک ؽت ( عبػز) در ا ک ثبس ر 37 درج ( ( ) Trypan blue غتجز ) 1:1 ؽتوبرػ دتظ اس هحبعتتج عتب شی گتزاد اس ثتبکشزی رؽت کتزد ثتزای سزا غف رهبعتتی ى ضزیت رقز سؼ اد 400 شار عل ل ث ز چب ک اس دلیتز 6 پژوهش هبی آسیب شنبسی زیستی دوره 18 شمبره 4 زمستبن سزؽح ه اد اعغ بی الش بثی هحق ال ر یز عتی ثت دالعوی ثیبى ک دتز سئیي هزکتشی یتز ط ذبسیتز C ثت

5 تأثیر پروتئیه مرکسی HCV بر رده سلولی LX-2 2/5 هیلی لیشز رعب ؽ. ثؼ اس رعی ى عل ل ب ث سزاکن - 70 در 37 درج عب شی گزاد ا ک ث دظ اس اضبف کزدى ه برک 80 درف هحیظ عل لی ثب یک هحیظ DMEM ث ى عتزم خ شین ث ه ر 10 دقیق در 65 درج عب شیگزاد قزار داد ؽ. خ شیثی سیک د یعیلیي / اعشزدش هبیغیي سؼ یض ثزای ه ر د ت ليذ cdna تام عبػز در 37 درج عب شی گزاد ا ک ث ؽ. عذظ هحیظ ر یی عل ل ب ربر ؽ ع عذب غی ى حب ی هیشاى 2500 ب گزم در ایتي دتتض ؼ اس کیتتز RevertAid First Strand اس دالعتتوی تتب 6 هتتبیکز لیشز هتتبد لیذ فکشتتتبهیي 2000 Thermo Scientific( cdna Synthesis خهزیکتب )اعتشفبد ( Invitrogen ( ) Lipofectamine 2000 کب تبدا ) ثتب یک ت یگز ؽتت ثتتب اعتتشفبد اس خغبسگز تتبی ( Hexamer ) Primers هغشقیوب Oligo dt اس و ب cdna سبم س لی ؽت. ثتزای افتشایؼ ث ر ی عل ل ب اضبف ؽ. ثؼ اس هت ر 4 عتبػز هحلت ل دقز کتبر در هزحلت Real-Time PCR سوتبهی و ت تبی ر یی عل ل ب ثب هحیظ DMEM ث ى عتزم خ شتیثی سیتک RNA یکغبىعبسی ؽ ث هیتشاى 300 تب گزم در اکت ؼ د یعیلیي / اعشزدش هبیغیي ث حجن 2/5 هیلیلیشز رعب ؽ. اضبف ؽ. سی ة اکت ؼ ثت هت ر 60 دقیقت در 42 درجت هال ط دظ اس 30 دقیق ا ک ثبعی ى در دهبی اسب عب شیگزاد 5 دقیق در 70 درج عب شیگزاد ا ک ث ؽ. استخراج RNA سل لی ي تيمار DNaseI طراحی آغازگر ي Real-Time PCR عل ل ب عجق دعش رالؼول کیز CinaClone( CinnaPure ایزاى ) اعشازا RNA ر ی خى ب ا جبم گزفز ثب اعشفبد اس اثش ا س الی صى بی α-sma ثشب اکشیي ( ) β-actin اس دبیگب ب دراح ( ) Nanodrop کویز کیفیز RNA اعشازا ؽ داد بی ص ی ) ( NCBI س ی ثزرعی ؽ. ثب س ج ث ایيک گتبم اعتشازا RNA اهکتبى ؽ ت. عتتذظ خغبسگز تتب ثتتب اعتتشفبد اس تتزمافتتشار oligo7 خل دگی ثب DNA ج د دارد ثتزای رفتغ ایتي هؾتکل RNA Oligoanalyzer عزاحتتی ارسیتتبثی ؽتت. اس صى ثشتتب اکشتتیي اعشازا ؽ ثتب خ تشین DNaseӀ کیتز RQ1 RNase-Free ث ػ اى ک شزل در ى ساد ( ) Endogenous control اعشفبد ؽ. Promega( Dnase خهزیک تب ) سیوتتبر ؽتت. و تت تتب عجتتق اعالػبر خغبسگز ب در ى ج ل 1 خه اعز. جذيل 1 هؾاقبر خغبسگز ب بم س الی درف GC دهب (درج عب شی گزاد) α-sma F GACAAT GGCT CT GGGCT CT G 60 60/75 α-sma R CT GT GCT T CGT CACCCACG 63/16 61/31 β-actin F T CCCT GGAGAAGAGCT ACG Β-Actin R GT AGT T T CGT GGAT GCCACA 57/ /8 58/2 عیغشن Real-Time PCR ثز اعبط ثزرعی کوی هیشاى هبد ا اس هحق ل (جفز ثبس) سوبهی اک ؼ ب ث ف رر د ثبر ( )Duplicate ا جبم ؽ. در ز فل رعب ظ ػول هیک. ثب جز هیشاى سبثؼ در ز چزر هیس اى اکتتت ؼ هیتتتشاى 4 هیکز لیشتتتز اس 5x اک ؼ را در ع ل هزحل سقبػ ی جز کزد. در ایي دض ؼ اس Solis Biodyne( EvaGreen qpcr Supermix اعش ی ) دعشگب ABI StepOneTM Applied Biosystems اعشفبد ؽ. 0/8 هیکز لیشز خغبسگز 2 هیکز لیشز الگ (ث غجز 1:20 رقیق Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N0. 4 HOT FIREPol 75 رب ه شقل ؽ ثب هحیظ کبهل (عزم 8 درف ) حجن بیی ث دعش رالؼول کیز در هجب رر خ شین DNaseӀ ث ه ر 30 دقیق

6 عل ی ملک ی و همکبران ؽ ) ریاش ؽ سب حجن 20 هیکز لیشز خة اضبف ؽ. ثز به سهب ی Real-Time PCR ث ف رر سیز س ظین ؽت : P<0/05 ث ػ اى هؼ یدار ث دى اس لحبػ خهبری در ظز گزفش ؽ. (ؽبرـ سغییز ثزاثز یب ر ػ -ΔΔCT 2 هشت ا لستزیي ر ػ 15 دقیق اعزؽشگی ب ی 95 درج عب شیگزاد 20 ب ی هزحل ثزای هحبعج کویز غجی ( ) Relative quantification اعز. اسقبل 60 درج عب شیگزاد 30 ب ی هزحل ع یل ؽت ى 72 ح هحبعج خى ن وبى فزه ل ؽش ؽ در دزا شش اعز ). درج عب شیگزاد 30 ب ی وتایج تجسی ي تحليل آماری ثزای هحبعج سفب ر هیشاى ثیبى ثیي ع گتز عتل لی اس ؽبرـ سغییز ثزاثز ( ) Fold Change اعشفبد ؽ. ثزای هحبعج ایي ؽبرـ اس فزه ل ( ) 2-ΔΔCT اعشفبد هیؽ د. سجشی سحلیل یافت ای حاصل از Real-Time PCR در ایي خسهبیؼ اس صى ثشب اکشیي ثت ػ ت اى ک شتزل در ى ساد ثزای ارسیبثی هیتشاى ثیتبى صى α-sma اعتشفبد ؽت. سوتبهی خهبری دض ؼ س عظ زمافشار GraphPad Prism 5 خسه ى خسهبیؼ ب د ثبر ز ثبر ث فت رر هضتبػف ( ) Duplicate خ بلیش اریب ظ یک عزف ( One-way Analysis of variance: ا جبم ؽ شبیج سکزاردذیز ث د. شكل 1 سق یز ثیبى صى α-sma شكل 2 سق یز ثیبى ص ى ک شزل در ىساد ثشب اکشیي پژوهش هبی آسیب شنبسی زیستی دوره 18 شمبره 4 زمستبن اعزؽشگی ( )Denaturation ا لی 95 درج عب شیگزاد ث ه ر ) ANOVA ثزای ارسیبثی ارشالف ثیي گز تب اعتشفبد ؽت.

7 تأثیر پروتئیه مرکسی HCV بر رده سلولی LX-2 هی س ا ثبػث القبی HSC ب ؽ د. در ایي دض ؼ ؾتبى داد دز سئیي بی یز ط هی س ا هغتشقیوب ثتب فیجتز س کجت ی در ؽ ک دز سئیي هزکشی دارای س ا بیی القبی هغیز فیجزسایتی در ارسجبط ثبؽ. ایي هغبلؼ ث ا ویز دز سئیي هزکشی در فیجزسایی عل ل بی کج ی خل د ث HCV اعز. ثب س ج ثت ای کت رد عل ل بی عشبر ای ثیبى خى در فیجز س هیدزداسد. ایي داد ب ثب عل لی LX-2 اس ه ؾث HSC اعز ک عل ل بی افلی س لیت شبیجی ک خقبی ک ي ( ) Coenen وکبرا ؼ در سحقیق ر د ک ( ECM اس جول ) α-sma در ر فیجزسایی ثبفز کج ی ث دعز خ رد اعز هغبثقز دارد [.]15 ثزای سثیی ایي شبیج در اعز هی س اى دیؼثی ی کزد ک شبیج ث دعز خه ثب ضتؼیز ؽتتزایظ در ى ثتت ی هتتیستت اى اس هتت ل حیتت ا ی سزاریاشتت ایجبد ؽ در ؽزایظ در ى ث ی ( ) In vivo ثغیبر شدیک اعز. ( ) Transgenic اعشفبد و د. خقتبی ک سئت ( ) Chouteau وکبرا ؼ یش قؼ دز سئیي بی یز ط ذبسیز C در ه ػ سزاریاش ؾبى داد [.]16 در هغبلؼ دیگزی یش ک ا ز دز سئیي بحث فیجز س ؽ ى کج ی اس ؽبیغسزیي ثیوبری بی ایتي ػضت ه ن ث ى اعز. ثب س ج ث خل دگی ثیؼ اس 170 هیلی ى فز ثت یز ط ذبسیز C هی س اى ایي یز ط را افلیستزیي ػلتز فیجز س کج ی هؼزفی کزد. اگز چ هیشاى اثشال ث ػف ز یز ط ذبسیز B یش سیبد اعز حشی ؽی ع خى شدیتک ثت 2 ثزاثتز (ح د 350 شار فز ) ه ارد خل دگی ثت یتز ط ذبسیتز C ساویي سد هی ؽ د لی ثبی س ج کزد ک ػف تز یتز ط ذبسیز B در اکثزیز ه ارد ث ج دی هییبث لتی در ػف تز یز ط ذبسیز C در ثیؼ اس د عت م هت ارد ػف تز هتشهي هی ؽ د [.]13 ا ویز سکثیز یز ط در عتل ل تبی عتشبر ای هزکشی در عل ل بی HSC رر ثزرعی کزد ا ت قتؼ ایتي دز سئیي ث اعغ TGF-β1 در القبی فیجزسایی ؾتبى داد ؽت اعز [.]17 در ک بر دز سئیي هزکشی اعشفبد اس دتز سئیي تبی NS3/4a NS2 یتتز ط ذبسیتتز C یتتش در القتتبی ر تت فیجزسایی در عل ل بی کج ی ا ویز دارد. ثزرعی بی ثیؾشز در سهی ػ اهل یز عی هیشثب ی هر ز در فیجز س ه رد یبس اعز. تشكر ي قذرداوی اس خقبی دکشز احغبى ػبرفیبى ثزای وکبری در ایي عزح ق ردا ی هیؽ د. مىابع Invest 2005; 115(2): [1] Hemmann S, Graf J, Roderfeld M, Roeb E. [4] Atzori L, Poli G, Perra A. Hepatic stellate cell: a Expression of MMPs and TIMPs in liver star cell in the liver. Int J Biochem Cell Biol fibrosis - a systematic review with special 2009; 41(8-9): emphasis on anti-fibrotic strategies. J Hepatol [5] Lee UE, Friedman SL. Mechanisms of hepatic fibrogenesis. Best Pract Res Clin Gastroenterol 2011; 25(2): [6] Schuppan D, Ruehl M, Somasundaram R, Hahn 2007; 46(5): [2] Mormone E, George J, Nieto N. Molecular pathogenesis of hepatic fibrosis and current therapeutic approaches. Chem Biol Interact EG. Matrix as a modulator of hepatic fibrogenesis. Semin Liver Dis 2001; 21(3): ; 193(3): [3] Bataller R, Brenner DA. Liver fibrosis. J Clin Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N شبیج ؾبى هی د ک دز سئیي هزکشی یز ط ذبسیز C بثز ؽ اعز [.]14 ن سکثیتز RNA یتز ط تن ثیتبى

8 عل ی ملک ی و همکبران Downloaded from mjms.modares.ac.ir at 0:24 IRST on Saturday October 6th 2018 [7] Xu L, Hui AY, Albanis E, Arthur MJ, O'Byrne B. Fields virology. 6th ed., SM, Blaner WS, Mukherjee P, Friedman SL, Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins Eng FJ. Human hepatic stellate cell lines, LX-1 One, 2013, p: and LX-2: new tools for analysis of hepatic fibrosis. Gut 2005; 54(1): [14] Busca A, Kumar A. Innate immune responses in hepatitis B virus (HBV) infection. [8] Franco E, Bagnato B, Marino MG, Meleleo C, Serino L, Zaratti L. Hepatitis B: Epidemiology Virol J 2014; 11: 22. [15] Coenen M, Nischalke HD, Krämer B, and prevention in developing countries. World J Langhans B, Glässner A, Schulte D, Körner C, Hepatol 2012; 4(3): Sauerbruch T, Nattermann J, Spengler U. [9] Messina JP, Humphreys I, Flaxman A, Brown Hepatitis C virus core protein induces A, Cooke GS, Pybus OG, Barnes E. Global fibrogenic actions of hepatic stellate cells via distribution and prevalence of hepatitis C virus toll-like receptor 2. Lab Invest 2011; 91(9): genotypes. Hepatology 2015; 61(1): [10] Smith DB, Bukh J, Kuiken C, Muerhoff AS, [16] Chouteau P, Defer N, Florimond A, Rice CM, Stapleton JT, Simmonds P. Expanded Caldéraro J, Higgs M, Gaudin A, Mérour E, classification of hepatitis C virus into 7 Dhumeaux D, Lerat H, Pawlotsky JM. Hepatitis genotypes and 67 subtypes: updated criteria and C virus (HCV) protein expression enhances genotype assignment web resource. Hepatology hepatic 2014; 59(1): exposed to a fibrogenic agent. J Hepatol 2012; [11] Moradpour D, Penin F, Rice CM. Replication of hepatitis C virus. Nat Rev Microbiol 2007; 5(6): [12] [13] fibrosis in HCV transgenic mice 57(3): [17] Shin JY, Hur W, Wang JS, Jang JW, Kim CW, Bae SH, Jang SK, Yang SH, Sung YC, Marra F. Leptin and liver fibrosis: a matter of fat. Gastroenterology 2002; 122(5): Knipe DM, Howley PM, Cohen JI, Griffin DE, Lamb RE, Martin MA, Racaniello VR, 78 Roizman Kwon OJ, Yoon SK. HCV core protein promotes liver fibrogenesis via up-regulation of CTGF with TGF-beta1. Exp Mol Med 2005; 37(2): زمستبن 4 شمبره 18 دوره پژوهش هبی آسیب شنبسی زیستی 27