Γηαγώληζκα Βηνινγίαο Γ Λπθείνπ Θεηηθή θαηεύζπλζε (Κεθ. 1, 2,4) ΕΖΤΖΜΑ 1 ν Α. Δπηιέμηε κία απάληεζε ζηηο παξαθάηω εξωηήζεηο:

Transcript

1 Γηαγώληζκα Βηνινγίαο Γ Λπθείνπ Θεηηθή θαηεύζπλζε (Κεθ. 1, 2,4) ΕΖΤΖΜΑ 1 ν Α. Δπηιέμηε κία απάληεζε ζηηο παξαθάηω εξωηήζεηο: 1. Τν κηηνρνλδξηαθό DNA ελόο θπηηάξνπ: α. είλαη παηξηθήο πξνέιεπζεο β. πεξηέρεη γνλίδηα αλζεθηηθόηεηαο ζε αληηβηνηηθά γ. θιεξνδνηείηαη από ηελ κεηέξα δ. είλαη κνλόθισλν 2. Ο θωζθνδηεζηεξηθόο δεζκόο ζρεκαηίδεηαη: α. κεηαμύ ησλ αδσηνύρσλ βάζεσλ ησλ λνπθιενηηδίσλ. β. κεηαμύ ησλ ζαθράξσλ ησλ λνπθιενηηδίσλ. γ. κεηαμύ ηνπ ζαθράξνπ ηνπ πξώηνπ λνπθιενηηδίνπ θαη ηεο θσζθνξηθήο νκάδαο ηνπ επόκελνπ. δ. αλάκεζα ζηηο ζπκπιεξσκαηηθέο βάζεηο. 3.H ηξηάδα ηωλ βάζεωλ 3 -ΤGA-5 ηεο κεηαγξαθόκελεο αιπζίδαο ηνπ DNA θαζνξίδεη ηελ έληαμε ηνπ ακηλνμένο ζξενλίλε ζηελ πνιππεπηηδηθή αιπζίδα.ο ζπλδηαζκόο πνπ δίλεη ηηο ζωζηέο ηξηάδεο βάζεωλ γηα ην ακηλνμύ ζξενλίλε ζην mrna θαη ην trna αληίζηνηρα είλαη: α. 5 -ACT-3, UGA β. 5 - ACU-3, UGA γ. 3 -ΑCU-5, UGA δ. 3 -ΑCU-3, UGA

2 4. Τα κηθξά ξηβνλνπθιεπξωηεΐληθά ζωκαηίδηα ηα ζπλαληνύκε: α. ζηα εκηαπηόλνκα νξγαλίδηα. β. ζην θπηηαξόπιαζκα. γ. ζην πξνθαξπσηηθό θύηηαξν. δ. ζην ππξήλα. 5. Αλ κηα αιπζίδα ηνπ DNA έρεη ιόγν A+T/C+G=2/3, ν ίδηνο ιόγνο ζηε ζπκπιεξωκαηηθή αιπζίδα είλαη: α. 2/3 β. 3/2 γ. 2 δ. 3 ΕΖΤΖΜΑ 2 ν Α. Γώζηε ηνπο νξηζκνύο ησλ παξαθάησ όξσλ: Απνηθία, Ηκηζπληεξεηηθόο κεραληζκόο αληηγξαθήο, Αδειθέο ρξσκαηίδεο, Μεηαζρεκαηηζκόο, cdna βηβιηνζήθε Mνλάδεο 10 Β. Να πεξηγξάςεηε ηελ αξρηθή δηαηύπσζε ηνπ θεληξηθνύ δόγκαηνο ηεο Βηνινγίαο. Πνηα ζηάδηα ηνπ θεληξηθνύ δόγκαηνο γίλνληαη ζηα κηηνρόλδξηα; Mνλάδεο 10 Γ. Πνηα είλαη ε ζεκαζία ηεο 5 ακεηάθξαζηεο πεξηνρήο ηνπ mrna ζηελ δηαδηθαζία ηεο κεηάθξαζεο; ΕΖΤΖΜΑ 3 ν A. Πνηνο είλαη ν ξόινο ηεο RNA πνιπκεξάζεο; Mνλάδεο 6

3 Β. Πνηνύο ηξόπνπο έρεη ην θύηηαξν ώζηε λα παξάγεη ζε κηθξό ρξόλν κεγάιεο πνζόηεηεο κηαο πξσηείλεο; Mνλάδεο 6 Γ. Με ηελ ηερλνινγία ηνπ αλαζπλδηαζκέλνπ DNA είλαη δπλαηή ε παξαγσγή β- αιπζίδσλ ηεο αλζξώπηλεο αηκνζθαηξίλεο ζε βαθηεξηαθά θύηηαξα. i. Πνηνο είδνο βηβιηνζήθεο (cdna ή γνληδησκαηηθή) ζα ρξεζηκνπνηεζεί γηα ην παξαπάλσ εγρείξεκα; Δμεγήζηε. ii. Πνην ηκήκα ηνπ γνληδίνπ ηεο β-αιπζίδαο ηεο αηκνζθαηηξίλεο ζα έρεη θισλνπνηεζεί κέζα ζηα βαθηήξηα ηνπ θιώλνπ; Mνλάδεο 3 iii. Πώο κπνξνύκε λα εληνπίζνπκε ην ζπγθεθξηκέλν θνκκάηη θισλνπνηεκέλνπ DNA, πνπ αληηζηνηρεί ζηε β-αιπζίδα ηεο αηκνζθαηξίλεο, κέζα από ηνπο θιώλνπο ηεο βηβιηνζήθεο ΕΖΤΖΜΑ 4 ν Γίλεηαη ην παξαθάησ ηκήκα DNA πνπ θέξεη αζπλερέο γνλίδην κε δπν εμώληα θαη έλα εζώλην πνπ θσδηθνπνηεί κηα πεπηηδηθή αιπζίδα πέληε ακηλνμέσλ: GGGGATCCCTTAAGCΤAΑTATGGGATCCCTTAAGATGTTATACTAGGTTGTGGCATTGATT CCCCTAGGGAATTCGATTATACCCTAGGGAATTCTACAATATGATCCAACACCGTAACTAA Καηά ηε κεηαγξαθή ηνπ παξαπάλσ γνληδίνπ, ην έλδπκν RNA πνιπκεξάζε κεηαγξάθεη ηε κεηαγξαθόκελε αιπζίδα ηνπ DNA ζπλερώο θαη ζηακαηά κόιηο ζπλαληήζεη ηελ αιιεινπρία ιήμεο ηεο κεηαγξαθήο 3 ΤΑΑΤΑΤ5 απειπζεξώλνληαο ην κόξην mrna. Αλ ζεσξήζνπκε όηη ην πξώην λνπθιενηίδην πνπ κεηαγξάθεηαη αληηζηνηρεί ζην πξώην λνπθιενηίδην ηνπ θσδηθνλίνπ έλαξμεο: α.να νξίζεηο ηη νλνκάδνπκε θσδηθή θαη κε θσδηθή αιπζίδα Μνλάδεο: 4

4 β. Να πξνζδηνξίζεηο ζην παξαπάλσ ηκήκα DNA πνηα είλαη ε θσδηθή θαη κε θσδηθή αιπζίδα ηνπ γνληδίνπ θαη λα ζεκεηώζεηο ηνλ πξνζαλαηνιηζκό ησλ αιπζίδσλ Μνλάδεο: 3 γ. Να νξίζεηο ηη είλαη ν ππνθηλεηήο θαη λα ζεκεηώζεηο κε έλα βέινο ηε ζέζε ηνπ πάλσ ζην ηκήκα ηνπ DNA Μνλάδεο: 5 δ. Να ζεκεηώζεηο ηελ θαηεύζπλζε κεηαγξαθήο ηνπ γνληδίνπ Μνλάδεο: 2 ε. Αλ ην εμώλην ζην νπνίν ηειεηώλεη ε πιεξνθνξία γηα ηε ζύλζεζε ηεο πεπηηδηθήο αιπζίδαο έρεη 2 θσδηθόληα ελώ ηα ππόινηπα θσδηθόληα βξίζθνληαη ζην άιιν εμώλην, λα βξείο ηελ αιιεινπρία ζε αδσηνύρεο βάζεηο ηνπ ώξηκνπ mrna πνπ παξάγεηαη ζεκεηώλνληαο ηνλ πξνζαλαηνιηζκό ηνπ. Μνλάδεο: 6 ζη. Αλ έρεηε ζηε δηάζεζε ζαο ηηο πεξηνξηζηηθέο ελδνλνπθιεάζεο EcoRI θαη BamHΙ, πνηα πεξηνξηζηηθή ελδνλνπθιεάζε ζα ρξεζηκνπνηήζνπκε γηα λα δεκηνπξγήζνπκε αλαζπλδπαζκέλν πιαζκίδην, πνπ λα πεξηέρεη ηελ αιιεινπρία ιήμεο ηεο κεηαγξαθήο; Αθνύ επηιέμεηε ηελ θαηάιιειε πεξηνξηζηηθή ελδνλενπθιεάζε λα ζεκεηώζεηε ηηο αιιεινπρίεο DNA πνπ ζα πξνθύςνπλ κεηά ηε δξάζε ηεο ζην κόξην DNA. Η πεξηνξηζηηθή ελδνελνπθιεάζε BamHI αλαγλσξίδεη ηελ αιιεινπρία: GGATCC CCTAGG θόβνληαο κεηαμύ G-G λνπθιενηηδίσλ Μνλάδεο: 5 Καιή Δπηηπρία! (Γηάξθεηα 3 ώξεο)

5 ΕΖΤΖΜΑ 1 Ο Απαληήζεηο 1 γ, 2 γ, 3 β, 4 δ, 5 α ΕΖΤΖΜΑ 2 Ο Α. Απνηθία ζει. 13 Ηκηζπληεξεηηθόο κεραληζκόο αληηγξαθήο ζει. 27 Αδειθέο ρξσκαηίδεο (ιεμηιόγην) Μεηαζρεκαηηζκόο cdna βηβιηνζήθε Β. «To DNA ελόο νξγαληζκνύ είλαη ν κνξηαθόο «ζθιεξόο... απνηεινύλ ηε γνληδηαθή έθθξαζε.» ζει. 31 Σπλνςίδνληαο, ινηπόλ, δηαπηζηώλνπκε όηη ε αληηγξαθή ηνπ DNA δηαησλίδεη ηε γελεηηθή πιεξνθνξία, ελώ ε κεηάθξαζε ρξεζηκνπνηεί απηή ηελ πιεξνθνξία, γηα λα θαηαζθεπάζεη έλα πνιππεπηίδην. Η κεηαγξαθή θαζνξίδεη πνηα γνλίδηα ζα εθθξαζηνύλ, ζε πνηνπο ηζηνύο (ζηνπο πνιπθύηηαξνπο επθαξπσηηθνύο νξγαληζκνύο), θαη ζε πνηα ζηάδηα ηεο αλάπηπμεο. Σει. 31 Γ. «Καηά ηελ έλαξμε..κεζεηνλίλε» ζει.36 ΕΖΤΖΜΑ 3 Ο Α. «Καηά ηελ έλαξμε ηεο κεηαγξαθήο... κε 3'-5'θσζθνδηεζηεξηθό δεζκό».ζει. 33

6 Β. Σηελ γξήγνξε παξαγσγή πνιιώλ µνξίσλ µηαο πξσηεΐλεο ζπµβάιινπλ: α. ε δπλαηόηεηα λα µεηαγξάθνληαη πνιιά µόξηα mrna από ην ίδην γνλίδην β. ε δπλαηόηεηα λα ζπλδένληαη δηαδνρηθά πνιιά ξηβνζώµαηα ζην ίδην mrna. Όηαλ έλα ξηβόζσµα έρεη ήδε µεηαθξάζεη ηα πξώηα θσδηθόληα, ε ζέζε έλαξμεο ηνπ mrna είλαη ειεύζεξε λα ζπλδεζεί µε άιιν ξηβόζσµα, ζύµπιεγµα ην νπνίν νλνµάδεηαη πνιύζσµα. γ. Γηα θάζε κνξην mrna ππάξρνπλ ζρεδνλ πάληα δπν γνλίδηα πνπ κπνξνύλ λα κεηαγξάθνληαη ηαπηόρξνλα. (Έλαο δηπινεηδήο νξγαληζµόο έρεη θαηά θαλόλα 2 αληίγξαθα θάζε γνληδίνπ ζην γνληδίσµα ηνπ). δ. Σην πξνθαξπσηηθό θύηηαξν ε µεηάθξαζε µπνξεί λα αξρίζεη πξηλ ηειεηώζεη ε µεηαγξαθή. ε. Η ξύζκηζε γνληδηαθήο έθθξαζεο: ζην επίπεδν κεηά ηε κεηαγξαθή: κεραληζκνη πνπ θαζνξίδνπλ ηελ ηαρύηεηα κε ηελ νπνία ην ώξηκν mrna αθήλεη ηνλ ππξήλα θαη εηζέξρεηαη ζην θπηηαξόπιαζκα. ζην επίπεδν ηεο κεηάθξαζεο. Ο ρξόλνο πνπ «δνπλ» ηα κόξηα mrna ζην θπηηαξόπιαζκα δελ είλαη ν ίδηνο γηα όια ηα είδε RNA, επεηδή κεηά από θάπνην ρξνληθό δηάζηεκα απνηθνδνκνύληαη. Δπίζεο, πνηθίιιεη θαη ε ηθαλόηεηα πξόζδεζεο ηνπ mrna ζηα ξηβνζώκαηα. Γ. i. H γνλδησκαηηθή βηβιηνζήθε είλαη ην ζύλνιν βαθηεξηαθώλ θιώλσλ πνπ αληηπξνζσπεύνπλ νιόθιεξν ην γνληδίσκα ελόο νξγαληζκνύ-δόηε. Η cdna βηβιηνζήθε είλαη ην ζύλνιν βαθηεξηαθώλ θιώλσλ πνπ πεξηέρνπλ αληίγξαθα DNA πνπ αληηζηνηρνύλ ζην ώξηκν mrna πνπ απνκνλώλεηαη από έλα θύηηαξν ή έλα ηζηό. Σηνπο αλώηεξνπο επθαξπσηηθνύο νξγαληζκνύο πνιιά γνλίδηα κεηαγξάθνληαη ζε νξηζκέλνπο κόλν θπηηαξηθνύο ηύπνπο. Έηζη αλ ζέινπκε λα θισλνπνηήζνπκε κόλν ηα γνλίδηα πνπ εθθξάδνληαη ζε ζπγθεθξηκέλα θύηηαξα, κε ζθνπν ηελ παξαγσγή πξνηόληνο ηόηε απηό δελ είλαη εθηθηό.

7 Αθόκα θαη αλ εθθξάδνληαη ηα επθαξπσηηθά γνλίδηα κέζα ζηα πξνθαξπσηηθά ππάξρεη θαη ην πξόβιεκα:σξίκαλζεο Καηά ηελ θισλνπνίεζε επθαξπσηηθώλ γνληδίσλ εηζάγεηαη νινθιεξν ην αζπλερέο γνλίδην (εμώλην-εζώλην) ζην πξνθαξπσηηθό θύηηαξν. Η αιιεινπρία κόλν ηνπ επθαξπσηηθνύ mrna ζην πξνθαξπσηηθό θύηηαξν πεξηιακβάλεη εζώληα θαη εμώληα θαη ζπλεπώο είλαη δηαθνξεηηθή από ηελ αληίζηνηρε αιιεινπρία ηνπ mrna ζην επθαξπσηηθό. Άξα ζα είλαη δηαθνξεηηθή θαη ε πξσηείλε. Με βάζε ηα παξαπάλσ ζα ρξεζηκνπνηήζεη ε CDNA βηβιηνζήθε. ii. Οη cdna βηβιηνζήθεο πεξηέρνπλ αληίγξαθα ησλ mrna όισλ ησλ γνληδίσλ πνπ εθθξάδνληαη ζηα θπηηαξηθό ηύπν από όπνπ απνκνλώζεθε ην mrna θαη έρνπλ ην πιενλέθηεκα απνκόλσζεο κόλν ησλ αιιεινπρηώλ ησλ γνληδίσλ πνπ κεηαθξάδνληαη ζε ακηλνμέα, δειαδή ησλ εμσλίσλ. Με απηό ηνλ ηξόπν δίλνπλ ηε δπλαηόηεηα ζύλζεζεο ηεο πξσηείλεο ελόο ζπγθεθξηκέλνπ γνληδίνπ ζην θύηηαξν-μεληζηή. iii) Αλ επηδξάζνπκε ζην DNA πνπ απνκνλώζεθε κε θαηάιιειεο ρεκηθέο νπζίεο ή απμήζνπκε ηε ζεξκνθξαζία ηόηε ζπάδνπλ νη δεζκνί πδξνγόλνπ κεηαμύ ησλ δύν ζπκπιεξσκαηηθώλ αιπζίδσλ θαη νη δύν αιπζίδεο απνρσξίδνληαη ε κία από ηελ άιιε. Η δηαδηθαζία απηή ιέγεηαη απνδηάηαμε. Οη δύν κνλόθισλεο ζπκπιεξσκαηηθέο αιπζίδεο ζε θαηάιιειεο ζπλζήθεο κπνξνύλ λα επαλαζπλδεζνύλ. Σηελ ηδηόηεηα απηή ζηεξίδεηαη ε δηαδηθαζία ηεο πβξηδνπνίεζεο πνπ είλαη ε ζύλδεζε κνλόθισλσλ ζπκπιεξσκαηηθώλ αιπζίδσλ DNA ή ζπκπιεξσκαηηθώλ DNA-RNA. Η πβξηδνπνίεζε είλαη κηα πνιύ ζεκαληηθή ηδηόηεηα ηνπ DNA πνπ καο δίλεη ηε δπλαηόηεηα αλ έρνπκε έλα γλσζηό κόξην DNA, λα ην ρξεζηκνπνηήζνπκε σο αληρλεπηή γηα ηνλ εληνπηζκό ηνπ ζπκπιεξσκαηηθνύ ηνπ όηαλ ην ηειεπηαίν βξίζθεηαη καδί κε ρηιηάδεο άιια θνκκάηηα. Η ηερληθή πνπ ρξεζηκνπνηείηαη ζπλήζσο πεξηιακβάλεη ηε ρξήζε πνπ έρνπλ αιιεινπρίεο ζπκπιεξσκαηηθέο πξνο ην θισλνπνηεκέλν DNA (ζηελ ζπγθεθξηκέλε πεξίπησζε αιιιεινπρίεο ζπκπιεξσκαηηθέο πξνο ηελ αιιεινπρία ησλ εμσλίσλ ηνπ γνληδίνπ ηεο β-αιπζίδαο ηεο αηκνζθαηξίλεο). Οη αληρλεπηέο αλακεηγλύνληαη κε ην DNA ηεο βηβιηνζήθεο (ην νπνίν έρεη απνδηαηαρζεί) θαη πβξηδνπνηνύλ κόλν ην ζπκπιεξσκαηηθό ηνπο DNA. Η δηαδηθαζία ηεο πβξηδνπνίεζεο αθνινπζείηαη θαη γηα ηελ απνκόλσζε ελόο ζπγθεθξηκέλνπ γνληδίνπ από κηα cdna βηβιηνζήθε.

8 ΕΖΤΖΜΑ 4 Ο α. Τν κόξην RNA πνπ ζπληίζεηαη είλαη ζπκπιεξσκαηηθό θαη αληηπαξάιιειν πξνο ηε κία αιπζίδα ηεο δηπιήο έιηθαο ηνπ DNA ηνπ γνληδίνπ. Η αιπζίδα απηή είλαη ε κεηαγξαθόκελε θαη νλνκάδεηαη κε θσδηθή. Η ζπκπιεξσκαηηθή αιπζίδα ηνπ DNA ηνπ γνληδίνπ πνπ δελ κεηαγξάθεηαη νλνκάδεηαη θσδηθή θαη έρεη ηνλ ίδην πξνζαλαηνιηζκό θαη αιιεινπρία (αληί γηα Τ ππάξρεη U) κε ην RNA β. Καηά ηε κεηαγξαθή: ε ζύλζεζε RNA έρεη πξνζαλαηνιηζκό 5' 3' (ζηελ RNA πνιπλνπθιενηηδηθή αιπζίδα, ην πξώην ηεο λνπθιενηίδην έρεη πάληα κία ειεύζεξε θσζθνξηθή νκάδα ζπλδεδεκέλε ζηνλ 5' άλζξαθα ηεο πεληόδεο ηνπ θαη ην ηειεπηαίν λνπθιενηίδην ηεο έρεη ειεύζεξν ην πδξνμύιην ηνπ 3' άλζξαθα ηεο πεληόδεο). ε ζύλζεζε ηνπ RNA ζηακαηά από αιιεινπρίεο ιεμεο ηεο κεηαγξαθήο ην κόξην RNA πνπ ζπληίζεηαη είλαη ζπκπιεξσκαηηθό θαη αληηπαξάιιειν πξνο ηελ κε θσδηθή αιπζίδα. Άξα ε θαηεύζπλζε αλάγλσζεο ηεο κε θσδθήο αιπζίδαο είλαη 3-5 Σπκπεξαζκαηηθά: Η κνλαδηθή αιιεινπρία ιήμεο ΤΑΤΑΑΤ πνπ έρεη πξνζαλαηνιηζκό 3-5 θαη βξίζθεηαη ζηελ πάλσ αιπζίδα. Άξα ε πάλσ αιπζίδα είλαη ε κεηαγξαθόκελε (κε θσδηθή) κε αιιεινπρία θαη πξνζαλαηνιηζκό: 5 GGGGATCCCTTAAGCΤAΑTATGGGATCCCTTAAGATGTTATACTAGGTTGTGGCATTGATT 3 Οη δύν αιπζίδεο ηνπ DNA είλαη αληηπαξάιιειεο, δειαδή ην 3' άθξν ηεο κίαο είλαη απέλαληη από ην 5' άθξν ηεο άιιεο. Άξα ε θάησ αιπζίδα ηνπ DNA είλαη ε κε κεηαγξαθόκελε (θσδηθή) κε αιιεινπρία θαη πξνζαλαηνιηζκό: 3 CCCCTAGGGAATTCGATTATACCCTAGGGAATTCTACAATATGATCCAACACCGTAACTAA 5 γ,δ. Υπνθηλεηήο= Πεξηνρή ηνπ DNA πνπ βξίζθεηαη αθξηβώο κπξνζηά από ην γνλίδην. Σηνλ ππνθηλεηή πξνζδέλεηαη ε RNA πνιπκεξάζε κε ηε βνήζεηα κεηαγξαθηθώλ παξαγόλησλ. Καηεύζπλζε Μεηαγξαθήο Υπνθηλεηήο

9 5 GGGGATCCCTTAAGCΤAΑTATGGGATCCCTTAAGATGTTATACTAGGTTGTGGCATTGATT 3 3 CCCCTAGGGAATTCGATTATACCCTAGGGAATTCTACAATATGATCCAACACCGTAACTAA 5 ε. Σύκθσλα κε ηα δεδνκέλα ηεο άζθεζεο θαη ηνλ θαλόλα ηεο ζπκπιεξσκαηηθόηεηαο ησλ βάζεσλ ην παξαγόκελν πξόδξνκν mrna ζα πξνθύπηεη κε κεηαγξαθή ηνπ ππνγξακκηζκέλνπ ηήκαηνο ηεο κε θσδηθήο αιπζίδαο. 5 GGGGATCCCTTAAGCΤAΑTATGGGATCCCTTAAGATGTTATACTAGGTTGTGGCATTGATT 3 Γειαδή ην πξόδξνκν mrna ζα έρεη αιιεινπρία 3 CCCUAGGGAAUUCUACAAUAUGAUCCAACACCGUA 5 Η πιεξνθνξία γηα ηε ζύλζεζε πεπηηδηθήο αιπζίδαο πνπ πεξηέρεηαη ζην παξαγόκελν mrna πξέπεη λα πιεξεί ηα παξαθάησ θξηηήξηα: λα αξρίδεη κε ην θσδηθόλην έλαξμεο λα δηαβάδεηαη θαηά ηε κεηάθξαζε: ζπλερώο, ηξηαδηθά, κε επηθαιππηόκελα κε θαηεύζπλζε 5-3 θαη λα ηειεηώλεη κε ην θσδηθόλην ιήμεο Σηελ πεξίπησζε πνπ ην mrna είλαη πξόδξνκν: Αξρίδεη λα δηαβάδεηαη κε ηα θξηηήξηα πνπ αλαθέξζεθαλ παξαπάλσ, ζε θάπνην ζεκείν ζηακάηα θαη αθνινύζσο ε πιεξνθνξία ζπλερίδεη ην δηάβαζκα κε ηνλ ίδην ηξόπν (ζπλερώο, ηξηαδηθά, κε επηθαιππηόκελα) κέρξη λα εκθαληζηεί θσδηθόλην ιήμεο. Άξα ε πιεξνθνξία είλαη ππνγξακκηζκέλε ζην πξόδξνκν mrna. Τα 5 ακηλνμέα αληηζηνηρνύλ ζε 6 θσδηθόληα θαη κε δεδνκέλν όηη κπνξεί λα ππάξρνπλ ακεηάθξαζηεο πεξηνρέο ζην 5 θαη 3 άθξν ην ώξηκν mrna ζα έρεη αιιεινπρία: 3 CCCUAGGGAAUUCUUCCAACACCGUA 5 ζη. Οη πεξηνξηζηηθέο ελδνλνπθιεάζεο είλαη έλδπκα πνπ θόβνπλ ην δίθισλν DNA ζε ζέζεηο όπνπ ππάξρεη αιιεινπρία λνπθιενηηδίσλ κήθνπο 4-8 λνπθιενηηδίσλ.

10 H πεξηνξηζηηθή ελδνπλνπθιεάζε BamHI αλαγλσξίδεη ηελ αιιεινπρία 5 GGATCC 3 CCTAGG θόβνληαο κεηαμύ G-G Μόλν εαλ ν πξνζαλαηνιηζκόο ηεο αιιεινπρίαο αλαγλώξηζεο είλαη: 5 GGATCC 3 3 CCTAGG 5 ηόηε κπνξεί λα ρξεζηκνπνηεζεί γηα ηελ θαηαζθεπή αλαζπλδηαζκέλνπ πιαζκηδίνπ πνπ λα πεξηέρεη ηελ αιιεινπρία ιήμεο ηεο κεηαγξαθήο θαη ην ηκήκα πνπ πξνθύπηεη είλαη: 5 GGG3 5 GATCCCTTAAGCΤAΑTATGG 3 5 GATCCCTTAAGATGTTATACTAGGTTGTGGCATTGATT 3 3 CCCCTAG 5 3 GGAATTCGATTATACCCTAG 5 3 GGAATTCTACAATATGATCCAAC ACC GTAACTAA 5