ΑΣΔΗ Αζελώλ Δξγαζηήξην Αλάιπζεο Bηνινγηθώλ Τγξώλ & Δθθξηκάησλ

Transcript

1 ΑΣΔΗ Αζελώλ Δξγαζηήξην Αλάιπζεο Bηνινγηθώλ Τγξώλ & Δθθξηκάησλ Ζ εθηέιεζε ηεο βαζηθήο εμέηαζεο ζπέξκαηνο Πέηξνπ Καξθαινύζνπ 1

2 Φπζηθνί ραξαθηήξεο ζπέξκαηνο Ζ δηαδηθαζία πξέπεη λα νινθιεξσζεί κέζα ζηελ 1 ε ώξα 2

3 Αληίδξαζε ph Σηκή αλαθνξάο: ph > 7,2 Μεηξηέηαη κε περακεηξηθό ραξηί θαηάιιεινπ εύξνπο ή κε περάκεηξν Σν ph εμαξηάηαη από ηηο εθθξίζεηο ησλ επηθνπξηθώλ αδέλσλ ηνπ αλδξηθνύ αλαπαξαγσγηθνύ ζπζηήκαηνο. Όηαλ ην ph είλαη πνιύ κηθξό (ph < 7,2) ππάξρεη απόθξαμε δηαθόξσλ ηκεκάησλ ηνπ αλαπαξαγσγηθνύ ζπζηήκαηνο. Αληίζεηα όηαλ ph > 8 ππάξρεη ε ππνςία ινίκσμεο. ην εξγαζηήξην ην ph απμάλεη ιόγσ απσιεηώλ CO 2. Αξγόηεξα ειαηηώλεηαη ιόγσ ζπζζώξεπζεο γαιαθηηθνύ νμένο. ε όμηλν ph αθηλεηνπνηνύληαη ηα ζπεξκαηνδσάξηα. Γη απηό ην ιόγν ην ph κεηξηέηαη ακέζσο κεηά ηελ ιήςε ηνπ δείγκαηνο. Όγθνο εθζπεξκάηηζεο Σηκή αλαθνξάο: 2 5 ml Ο όγθνο κεηξηέηαη κε βαζκνλνκεκέλε πιαζηηθή πηπέηηα ησλ 5 ή 10 ml αλάινγα κε ηνλ όγθν ηνπ. Ο όγθνο αλαγξάθεηαη κε αθξίβεηα ελόο εθαηνζηνύ π.ρ. 4,4 ml. Απνθεύγνληαη ηα πιαζηηθά ζθεύε γηαηί θνιινύλ πάλσ ηνπο ηα θηλνύκελα ζπεξκαηνδσάξηα. Όγθνο < 1 ml δπζρεξαίλεη ηελ είζνδν ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ κέζσ ηνπ ηξαρήινπ ηεο κήηξαο. πλήζσο νθείιεηαη ζε αλεπαξθή ζπιινγή ηνπ δείγκαηνο. Όγθνο > 5 ml νδεγεί ζε κεγάιε αξαίσζε ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ θαη κεησκέλε θηλεηηθόηεηα. 3

4 Γινηόηεηα (ημώδεο) Σηκή αλαθνξάο: κεδέλ Ζ ύπαξμε πςεινύ ημώδνπο επεξεάδεη ηνλ πξνζδηνξηζκό πνιιώλ παξακέηξσλ ηνπ ζπεξκνδηαγξάκκαηνο (π.ρ. θηλεηηθόηεηα). Σερληθή Σν ζπέξκα αλαξξνθάηαη καιαθά κέζα ζηελ πηπέηα θαη ύζηεξα αθήλεηαη λα πέζεη κε ηελ βαξύηεηα. Αλ νη ζηαγόλεο πέθηνπλ πιήξεηο, ρσξίο λα αθήλνπλ ίλεο, ε γινηόηεηα ραξαθηεξίδεηαη σο κεδέλ. Αλ εκθαλίδεηαη πίζσ από ηελ ζηαγόλα ίλα > 2 εθαηνζηώλ ζεκεηώλεηαη απμεκέλε γινηόηεηα ζηελ απάληεζε ηνπ αζζελνύο. Ρεπζηνπνίεζε Σηκή αλαθνξάο: < 60 ιεπηά Αηειήο ξεπζηνπνίεζε είλαη ελδεηθηηθή ινίκσμεο ησλ επηθνπξηθώλ αδέλσλ, ησλ ζπεξκαηηθώλ ζσιελαξίσλ ή ηνπ πξνζηάηε. Ζ ξεπζηνπνίεζε θαίλεηαη ζην κηθξνζθόπην ζε λσπό παξαζθεύαζκα. πγθεθξηκέλα παξαηεξνύκε αλ θαίλνληαη κέζα ζε απηό «πεγαδάθηα» ή «λεξά». Ζ ξεπζηνπνίεζε πξνζδηνξίδεηαη γηα πξώηε θνξά 30 ιεπηά κεηά ηελ ιήςε ηνπ ζπέξκαηνο. Αλ κεηά 30 ιεπηά ε ξεπζηνπνίεζε δελ έρεη νινθιεξσζεί ν έιεγρνο επαλαιακβάλεηαη θάζε ιεπηά. 4

5 Υξνηά Σηκή αλαθνξάο: Σεθξόρξνε ή θαίνλ ηξηδίδνλ Παξαηεξείηαη καθξνζθνπηθά ζεθώλνληαο ην δνρείν ζην θσο. ε παζνινγηθέο θαηαζηάζεηο παξαηεξνύληαη: Αξαηό γαιαθηώδεο ρξώκα αλ ε ζπγθέληξσζε ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ είλαη κηθξή, Κνθθηλσπό-θαθέ αλ ππάξρεη πξόζκεημε εξπζξνθπηηάξσλ. Κηηξηλσπό αλ ππάξρεη ίθηεξνο, ιήςε ζθεπαζκάησλ βηηακηλώλ ή αθόκα παξαηεηακέλε απνρή. Οζκή Σηκή αλαθνξάο: Ηδηάδνπζα Πξόθεηηαη γηα ηελ ραξαθηεξηζηηθή νζκή πνπ ζπκίδεη κνύρια ή βξαζκέλα θάζηαλα. εκεηώλεηαη αλ είλαη παζνινγηθή. Όςε Σηκή αλαθνξάο: Ζκηδηαθαλήο Παξαηεξείηαη καθξνζθνπηθά ζεθώλνληαο ην δνρείν ζην θσο. εκεηώλεηαη ε παξνπζία θνιινεηδώλ ζσκαηίσλ ή βιέλλαο. 5

6 Δπσαζηηθόο θιίβαλνο Οξηδόληηνο αλαθηλεηήξαο Θέζε ηνπνζέηεζεο δεηγκάησλ ζπέξκαηνο Θεξκαηλόκελεο αληηθεηκελνθόξεο πιάθεο θαη θαιππηξίδεο Δθηίκεζε ηεο θηλεηηθόηεηαο ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ Ζ δηαδηθαζία πξέπεη λα νινθιεξσζεί κέζα ζηελ 1 ε ώξα ή κόιηο νινθιεξσζεί ε ξεπζηνπνίεζε Μεηά ηηο 2 ώξεο ρσξίο ξεπζηνπνίεζε ην δείγκα απνξξίπηεηαη 6

7 Απάληεζε ηεο θηλεηηθόηεηαο ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ Δίδνο θηλεηηθόηεηαο Εσεξή πξνσζεηηθή % Σηκή αλαθνξάο ηελ 1 ε ώξα > 25% Νσζξή πξνσζεηηθή % Με πξνσζεηηθή % Αθίλεηε % ύλνιν πξνσζεηηθήο % Σηκή αλαθνξάο ηελ 1 ε ώξα > 50% ύλνιν θηλνύκελεο % ύλνιν πξνσζεηηθήο%: Άζξνηζκα Εσεξήο% θαη Νσζξήο πξνσζεηηθήο% θίλεζεο. ύλνιν θηλνύκελεο%: Άζξνηζκα Εσεξήο πξνσζεηηθήο%, Νσζξήο πξνσζεηηθήο% θαη Με πξνσζεηηθήο% θίλεζεο. Σερληθή πξνζδηνξηζκνύ θηλεηηθόηεηαο ζπεξκαηνδσαξίσλ 1. Αθήλνπκε ην δείγκα ζηνπο 37 ν C, ηνπιάρηζηνλ 20 ιεπηά κε αλάδεπζε. 2. Σνπνζεηνύκε 10 κl ζπέξκαηνο πάλσ ζε πξνζεξκαζκέλε πιάθα ζηνπο 37 ν C. 3. Tνπνζεηνύκε πάλσ από ηελ ζηαγόλα κία θαιππηξίδα 22 x 22 mm ε νπνία θαιύπηεη πιήξσο ηελ ζηαγόλα. 4. Μηθξνζθνπνύκε ζε κεγέζπλζε 40Υ. 5. Δθηηκνύκε ηελ θηλεηηθόηεηα 200 ζπεξκαηνδσαξίσλ ζε ηνπιάρηζηνλ 4 νπηηθά πεδία. 6. Δπαλαιακβάλνπκε ηελ πξνεγνύκελε δηαδηθαζία γηα άιια 200 ζπεξκαηνδσάξηα. 7. Ζ ηειηθή θαηεγνξηνπνίεζε ηεο θηλεηηθόηεηαο ζα είλαη ε κέζε ηηκή ησλ δύν κεηξήζεσλ. 7

8 σζηή ηνπνζέηεζε θαιππηξίδαο Λαλζαζκέλε ηνπνζέηεζε θαιππηξίδαο 8

9 Γύν ηερληθέο εθηίκεζεο ηεο θηλεηηθόηεηαο Οπηηθό πεδίν κε κηθξνπιέγκα Μεραληθόο κεηξεηήο θπηηάξσλ Υξεζηκεύεη γηα ηνλ πξνζδηνξηζκό ηεο θηλεηηθόηεηαο, δσηηθόηεηαο, κνξθνινγίαο θαη ζπγθέληξσζεο ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ. Δπηπιένλ ρξεζηκεύεη γηα ηελ κέηξεζε ζηξνγγπιώλ θπηηάξσλ θαη αληηζπεξκαηηθώλ αληηζσκάησλ. 9

10 Δθηίκεζε ηεο δσηηθόηεηαο ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ Ζ ρξώζε πξέπεη λα νινθιεξσζεί κέζα ζηελ 1 ε ώξα ή κόιηο νινθιεξσζεί ε ξεπζηνπνίεζε Σα βακκέλα παξαζθεπάζκαηα δηαηεξνύληαη επί καθξόλ Πξνζδηνξηζκόο δσηηθόηεηαο ζπεξκαηνδσαξίσλ Ζ εθηίκεζε ηνπ πνζνζηνύ ησλ δσληαλώλ ζπεξκαηνδσαξίσλ γίλεηαη κε ηελ ρξώζε εωζίλεο ληγθξνζίλεο. Ζ εσζίλε δηεηζδύεη κέζα ζηα λεθξά ζπεξκαηνδσάξηα θαη βάθεη ηηο θεθαιέο ηνπο ξνδ. Σα δσληαλά ζπεξκαηνδσάξηα κέλνπλ ιεπθά. Ζ ληγθξνζίλε δεκηνπξγεί εξπζξό ππόζηξσκα γηα λα είλαη δπλαηή ε παξαηήξεζε ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ. 10

11 Σερληθή πξνζδηνξηζκνύ δσηηθόηεηαο ζπεξκαηνδσαξίσλ ε κία αληηθεηκελνθόξν πιάθα πξνζζέηνπκε 50 κl ρξσζηηθήο θαη 50 κl ζπέξκαηνο. Μεηαθέξνπκε 10 κl ζπέξκαηνο ζε κία άιιε πιάθα θαη ηελ επηζηξώλνπκε. Αθήλνπκε ηελ πιάθα λα ζηεγλώζεη θαη κηθξνζθνπνύκε κε 40X ή 100Υ κεγέζπλζε. Μεηξάκε ηνλ αξηζκό ησλ δσληαλώλ (ιεπθώλ) ζπεξκαηνδσαξίσλ ζε 200 ζπεξκαηνδσάξηα. Μέηξεζε ζηξνγγπιώλ θπηηάξσλ Γηάθξηζε ππνζθαηξίσλ από ηα ππόινηπα ζηξνγγπιά θύηηαξα Ζ δηαδηθαζία πξέπεη λα νινθιεξσζεί κέζα ζηελ 1 ε ώξα ή κόιηο νινθιεξσζεί ε ξεπζηνπνίεζε Μεηά ηηο 2 ώξεο ρσξίο ξεπζηνπνίεζε ην δείγκα απνξξίπηεηαη 11

12 Γηάθξηζε ζηξνγγπιώλ θαη ππνζθαηξίσλ ε έλα θπζηνινγηθό ζπέξκα κπνξεί λα ππάξρνπλ κέρξη: 5 x 10 6 ζηξνγγπιά θύηηαξα / ml 1 x 10 6 ππνζθαίξηα / ml. Aλ ν αξηζκόο ησλ ζηξνγγπιώλ θπηηάξσλ ππεξβεί ηα 5 x 10 6 / ml ηόηε ζα πξέπεη λα δηαθξηζνύλ από ηα ππνζθαίξηα. Ζ κέηξεζε ηεο ζπγθέληξσζεο ησλ ζηξνγγπιώλ θπηηάξσλ κπνξεί λα γίλεη είηε κε ηνλ παξαθάησ ηύπν πνπ ζπζρεηίδεη ηνλ αξηζκό ηνπο κε ηα ππνζθαίξηα είηε ζηε πιάθα Neubauer. Μέηξεζε ζηξνγγπιώλ θπηηάξσλ 12

13 Δπηζειηαθά θύηηαξα Ππνζθαίξηα Φπζαιίδεο ηξνγγπιά θύηηαξα Πξνζδηνξηζκόο ζπγθέληξσζεο θαη αξηζκνύ ζπεξκαηνδσαξίσλ Σα αξαησκέλα δείγκαηα δηαηεξνύληαη επί καθξόλ ζε ςύμε. 13

14 Πξνζδηνξηζκόο αξηζκνύ ζπεξκαηνδσαξίσλ 1. Μεηξάκε ζε κηθξνζθόπην αληίζεηεο θάζεο ηνλ αξηζκό ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ηεζζάξσλ νπηηθώλ πεδίσλ. 2. Από ηνλ κέζν όξν ησλ νπηηθώλ πεδίσλ πξνζδηνξίδνπκε ηη αξαίσζε ζα θάλνπκε ζην λσπό ξεπζηνπνηεκέλν δείγκα. Αξηζκόο ζπεξκαηνδωάξηωλ από 4 νπηηθά πεδία Αξαίωζε Δείγκα (κl) Δηάιπκα θνξκαιδεύδεο όμηλνπ αλζξαθηθνύ λαηξίνπ Μέζνδνο Swim-up 1 : 1 (1 + 1) < 15 1 : 5 (1 + 4) : 10 (1 + 9) : 20 (1 + 19) > : 50 (1 + 49) Κάλνπκε ηελ πξνεγνύκελε αξαίσζε κε ζηθώλην ζεηηθήο αλαξξόθεζεο. 14

15 5. Σνπνζεηνύκε πάλσ ζε πιάθα Neubauer κία εηδηθή θαιππηξίδα γηα πιάθα Neubauer. Βξέρνπκε ειαθξά ηα δύν πιατλά απιάθηα ηεο πιάθαο Neubauer θαη ηξίβνπκε ηελ θαιππηξίδα πάλσ ζε απηά κέρξη λα θνιιήζεη ζηαζεξά. Ζ ζπγθόιιεζε ηεο θαιππηξίδαο επηβεβαηώλεηαη από ηνπο δαθηπιίνπο Newton πνπ εκθαλίδνληαη ζην πιάη. 5. To αξαησκέλν δείγκα αλαδεύεηαη θαιά ζε vortex γηα 15 δεπηεξόιεπηα. Ζ ηνπνζέηεζε ηνπ αξαησκέλνπ δείγκαηνο πάλσ ζηελ πιάθα Neubauer γίλεηαη κε πηπέηα ησλ 10 κl. Σν γέκηζκα γίλεηαη πξνζεθηηθά γηα λα κελ μερεηιίζεη ν ρώξνο ηεο πιάθαο. 6. ηε ζπλέρεηα ην δείγκα ηνπνζεηείηαη ζε πγξό ζάιακν γηα 15 ιεπηά (ηξπβιίν κε βξεγκέλν ραξηί) πξνθεηκέλνπ ηα ζπεξκαηνδσάξηα λα θαζηδήζνπλ ζηνλ ππζκέλα ηεο πιάθαο Neubauer. 15

16 7. Πξώηα κεηξάκε ηνλ αξηζκό ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ζην άλσ αξηζηεξό ηεηξάγσλν. 8. Αλάινγα κε ηνλ αξηζκό ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ζην επάλσ αξηζηεξό ηεηξάγσλν απνθαζίδνπκε πόζα ηεηξάγσλα ηεο πιάθαο Neubauer ζα ρξεζηκνπνηήζνπκε γηα ηελ κέηξεζε ζύκθσλα κε ηνλ παξαθάησ πίλαθα. Σπεξκ/ξηα ζην επάλω αξηζηεξό ηεηξάγωλν Τεηξάγωλα < > 40 5 (4 αθξηαλά θαη θεληξηθό) 9. Μεηξώληαη νη θεθαιέο ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ησλ νπνίσλ νη θεθαιέο πεξηιακβάλνληαη ζηηο ηξηπιέο γξακκέο πνπ βξίζθνληαη αξηζηεξά ή πάλσ. Αληίζεηα απνθιείνληαη ηα ζπεξκαηνδσάξηα πνπ βξίζθνληαη ζηηο δεμηέο θαη θάησ ηξηπιέο γξακκέο. Μεηξώληαη κόλν ηα ζπεξκαηνδσάξηα πνπ έρνπλ θεθαιή θαη νπξά ή κόλν θεθαιή. Απνκνλσκέλεο νπξέο θεθαιέο δελ κεηξώληαη. 16

17 9. Μεηξώληαη ζπεξκαηνδσάξηα θαη ζηηο δύν ζέζεηο ηεο πιάθαο Neubauer. Πξνζζέηνπκε ηνλ αξηζκό ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ζηα ηεηξάγσλα θαη ησλ δύν ζέζεσλ ηεο Neubauer. O αξηζκόο απηόο δηαηξείηαη κε έλα ζπληειεζηή ν νπνίνο θαζνξίδεηαη από ηελ αξαίσζε θαη ηνλ αξηζκό ησλ ηεηξαγώλσλ πνπ επηιέρζεθαλ. Αξαίωζε Π.ρ. έζησ όηη θάλακε αξαίσζε 1/10. Αξηζκόο ηεηξαγώλωλ πνπ κεηξήζεθαλ / / / / / ,6 0,8 κεηξήζακε 10 ηεηξάγσλα ζε θάζε ζέζε ηεο πιάθαο Neubauer ηα ζπεξκαηνδσάξηα ήηαλ 56 θαη 65 αληίζηνηρα ζε θάζε ζέζε. Σν άζξνηζκα είλαη = 121 Ο ζπληειεζηήο αξαίσζεο είλαη 121 / 8 = 15 Πνιιαπιαζηάδνπκε επί θαη βξίζθνπκε ζπγθέληξσζε: Αλ ν όγθνο είλαη 2,5 ml ηόηε ν ζπλνιηθόο αξηζκόο είλαη: 2,5 x = / εθζπεξκάηηζε ζπεξκαηνδσάξηα / ml 17

18 Πξνζδηνξηζκόο κνξθνινγίαο ζπεξκαηνδσαξίσλ Ζ επίζηξσζε πξέπεη λα νινθιεξσζεί κέζα ζηελ 1 ε ώξα ή κόιηο νινθιεξσζεί ε ξεπζηνπνίεζε Ζ κνληκνπνίεζε ζα πξέπεη λα νινθιεξσζεί όζν ην επίζηξσκα είλαη λσπό. Σα βακκέλα παξαζθεπάζκαηα δηαηεξνύληαη επί καθξόλ. Ζ κνξθνινγία ησλ πγηή ζπεξκαηνδσαξίσλ Κεθαιή: σνεηδέο ζρήκα θεθαιήο κε κπξνζηηλό ηκήκα (αθξόζσκα) αλνηρηόρξσκν, 4 5 κm κήθνο θαη 2,5 3,5 κm πιάηνο. Ζ αλαινγία κήθνπο πξνο πιάηνο θεθαιήο πξέπεη λα είλαη 1,50 1,75 κm. Αθξόζωκα: Καηαιακβάλεη ην 40-70% ηεο θεθαιήο θαη κπνξεί λα έρεη έλα ππξελίζθν. Απρέλαο: To πξώην ηκήκα ηεο νπξάο κεηά ηελ θεθαιή. Δίλαη παρύηεξνο κεηά ηελ νπξά (κέγηζην πάρνο 1 κm θαη 7,0 8,0 κm κήθνο ή κέρξη ην δηπιάζην ηεο θεθαιήο). Οπξά: πκκεηξηθά ηνπνζεηεκέλε ζηε βάζε ηεο θεθαιήο. Μόλν κηα νπξά πξέπεη λα είλαη πξνζθνιιεκέλε (πεξίπνπ 45 κm κήθνο), ρσξίο λα είλαη πεξηειηγκέλε, ζπαζκέλε ή δηπισκέλε γύξσ από ηνλ εαπηό ηεο. 18

19 Ο πξνζδηνξηζκόο ηεο κνξθνινγίαο γίλεηαη κε ηελ ρξώζε Παπαληθνιάνπ 1. Οηλόπλεπκα 50% - 10 εκβαπηίζεηο ή 10 sec 2. Απνζηαγκέλν λεξό - 10 εκβαπηίζεηο 3. Υξσζηηθή Αηκαηνμπιίλε Harris 3 ιεπηά 4. Νεξό βξύζεο 5 ιεπηά 5. Όμηλε αηζαλόιε - 2 βπζίζκαηα 6. Νεξό βξύζεο 5 ιεπηά 7. Απνζηαγκέλν λεξό - 1 εκβάπηηζε 8. Οηλόπλεπκα 50% - 10 εκβαπηίζεηο 9. Οηλόπλεπκα 70% - 10 εκβαπηίζεηο 10. Οηλόπλεπκα 80% - 10 εκβαπηίζεηο 11. Οηλόπλεπκα 95% - 10 εκβαπηίζεηο 12. Υξσζηηθή Orange 2 ιεπηά 13. Οηλόπλεπκα 95% - 8 εκβαπηίζεηο 14. Οηλόπλεπκα 95% - 8 εκβαπηίζεηο 15. Υξσζηηθή ΔΑ 50 5 ιεπηά 16. Οηλόπλεπκα 95% - 8 εκβαπηίζεηο 17. Οηλόπλεπκα 95% - 8 εκβαπηίζεηο Μνληκνπνηεηηθό ζπξέπ γηα ηελ γξήγνξε κνληκνπνίεζε λσπνύ παξαζθεπάζκαηνο Ζ παξαηήξεζε γίλεηαη ζε θνηλό νπηηθό κηθξνζθόπην κε θαθό πνπ δηαζέηεη κηθξνθιίκαθα. 19

20 Σν θπζηνινγηθό ζπεξκαηνδσάξην Φπζηνινγηθά ζπεξκαηνδσάξηα 20

21 Αλώκαιεο θεθαιέο Αλώκαιεο θεθαιέο θαη απρέλαο 21

22 Κεθαιή κε πνιιά θελνηόπηα παζκέλνο απρέλαο Μεγάινο απρέλαο 22

23 Κπηηαξνπιαζκαηηθό ππόινηπν Απάληεζε ηεο κνξθνινγίαο ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ Φπζηνινγηθέο κνξθέο Σηκή αλαθνξάο > 14% Αλσκαιίεο θεθαιήο % Αλσκαιίεο απρέλα % Αλσκαιίεο νπξάο % Κπηηαξνπιαζκαηηθό ππόινηπν% Γείθηεο ηεξαηνζπεξκίαο (ΣΕΗ) Σηκή αλαθνξάο < 1,60 Ο δείθηεο ηεξαηνζπεξκίαο είλαη ην πνζνζηό αλσκαιηώλ αλά ζπεξκαηνδσάξην. TZI = Άζξνηζκα όισλ ησλ αλσκαιηώλ (θεθαιήο, απρέλα, νπξάο, ππόινηπν) 100 θπζηνινγηθέο κνξθέο 23

24 Μπαλάθηα θαη ζηαηώ ρξώζεο Παπαληθνιάνπ κέζα ζε ζάιακν βηνινγηθήο αζθάιεηαο. πγθνιιήζεηο - πζζσξεύζεηο Ο ηξόπνο δηαρσξηζκνύ ηνπο 24

25 πγθνιιήζεηο ζπεξκαηνδσαξίσλ Ζ ζπγθόιιεζε είλαη ε έλσζε πνιπάξηζκσλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ιόγσ ηεο ύπαξμεο κέζα ζην ζπεξκαηηθό πγξό αληηζπεξκαηηθώλ αληηζωκάηωλ. ηηο ελώζεηο απηέο ζπκκεηέρνπλ κόλν ζπεξκαηνδσάξηα ηα νπνία είλαη ζπλήζσο ελωκέλα ζην θεθάιη ή ζηνλ απρέλα. Όια ηα ζπεξκαηνδσάξηα είλαη θηλνύκελα. ηηο ελώζεηο απηέο ζπκκεηέρνπλ ιίγα ζπλήζωο ζπεξκαηνδωάξηα είλαη όκσο πνιπάξηζκεο θαη θαιύπηνπλ κεγάιν κέξνο ηνπ νπηηθνύ πεδίνπ. πζζσξεύζεηο ζπεξκαηνδσαξίσλ Πξόθεηηαη γηα ηελ έλσζε πνιπάξηζκωλ ζπεξκαηνδωαξίωλ κε ηελ ζπκκεηνρή όκσο θαη άιισλ θπηηάξσλ (π.ρ. ζηξνγγπιώλ θπηηάξσλ ή θπηηαξηθώλ ππνιεηκκάησλ. Οη ζπζζσξεύζεηο θαηαιακβάλνπλ κεγάιν ηκήκα ηνπ νπηηθνύ πεδίνπ θαη είλαη ζπλήζσο ιίγεο ζε αξηζκό. Ζ ύπαξμή ηνπο απνδίδεηαη ζε κεραληθά αίηηα (π.ρ. αηειή ξεπζηνπνίεζε ιόγσ βιέλεο πνιύ κεγάιε ζπγθέληξσζε ζπεξκαηνδσαξίσλ πηζαλόηαηα ιόγσ παξαηεηακέλεο απνρήο). Ζ παξνπζία ζπζζσξεύζεσλ κεηώλεη ηνλ αξηζκό ηωλ δωληαλώλ ζπεξκαηνδωαξίωλ (δσηηθόηεηα). 25

26 Σα αληηζπεξκαηηθά αληηζώκαηα Tα αληηζπεξκαηηθά αληηζώκαηα παξάγνληαη ζηνλ άλδξα ή ζηελ γπλαίθα θαη δξνπλ ελαληίνλ ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ηα νπνία αλαγλσξίδνπλ σο μέλεο νπζίεο (αληηγόλα). Πξόθεηηαη γηα αληηζώκαηα ηεο ηάμεσο ησλ ΙgA θαη IgG. Tα αληηζώκαηα απηά είλαη ελσκέλα ζηελ θεθαιή ή ζηνλ απρέλα ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ θαη πξνθαινύλ ηελ ζπγθόιιεζε ησλ ζπεξκαηνδσαξίσλ κεηαμύ ηνπο. Ζ ζπγθόιιεζε απηή είλαη νξαηή ζην κηθξνζθόπην θαη κεηώλεη ηελ γνληκόηεηα ηνπ άλδξα. Ο πξνζδηνξηζκόο ηνπο κπνξεί λα γίλεη κε άκεζε ή έκκεζε κέηξεζε. Ζ άκεζε κέηξεζε γίλεηαη ζην ζπέξκα θαη ε έκκεζε ζηνλ νξό ηνπ άλδξα ή ηεο ζπληξόθνπ. Ζ κέζνδνο πξνζδηνξηζκνύ ησλ αληηζπεξκαηηθώλ αληηζσκάησλ Διέγρεηαη ρσξηζηά ε παξνπζία ησλ IgG θαη IgA αληηζπεξκαηηθώλ αληηζσκάησλ. Διέγρνπκε ην πνζνζηό ησλ δσεξώο θηλνύκελσλ ζπεξκαηνδσαξίσλ πνπ είλαη θνιιεκέλα πάλσ ζε κπίιηεο ζην θεθάιη ή ζηνλ απρέλα. Μεηξάκε 200 ζπεξκαηνδσάξηα θαη ππνινγίδνπκε ην πνζνζηό ηνπο. εκεηώλνπκε πνπ βξίζθνληαη νη ζπγθνιιήζεηο (απρέλα ή νπξά). Αλάινγα κε ηνλ αξηζκό ησλ ζπγθνιιεκέλσλ ζπεξκαηνδσαξίσλ ε απάληεζε ησλ αληηζπεξκαηηθώλ αληηζσκάησλ εξκελεύεηαη σο εμήο: < 10%: Αξλεηηθό 10 39%: Τπάξρεη πηζαλόηεηα ππνγνληκόηεηαο αλνζνινγηθήο αηηίαο > 40%: Μεγάιε πηζαλόηεηα ππνγνληκόηεηαο αλνζνινγηθήο αηηηνινγίαο. 26

27 Πξνζδηνξηζκόο αληηζπεξκαηηθώλ αληηζσκάησλ Άκεζνο πξνζδηνξηζκόο κε ηελ κέζνδν SpermMAR γηα αλαδήηεζε IgG Πξνζζέηνπκε 10 κl ζπέξκαηνο ζε κία αληηθεηκελνθόξν πιάθα Πξνζζέηνπκε 10 κl αλνζνζθαηξηδίσλ Πξνζζέηνπκε 10 κl αληηνξνύ (αληη-igg) Διέγρνπκε ζην κηθξνζθόπην αληίζεηεο θάζεο αλ ζπγθνιιήζεθαλ ηα θηλνύκελα ζπεξκαηνδσάξηα κεηά 10 min 27