Cortisol. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Cortisol For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Cortisol English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of cortisol (hydrocortisone, Compound F) in serum, as an aid in the clinical assessment of adrenal status. Catalog Number: L2KCO2 (200 tests), L2KCO6 (600 tests) Test Code: COR Color: Dark Pink Summary and Explanation Cortisol (hydrocortisone, Compound F) is the most abundant circulating steroid and the major glucocorticoid secreted by the adrenal cortex. Physiologically effective in anti-inflammatory activity and blood pressure maintenance, cortisol is also involved in gluconeogenesis, calcium absorption and the secretion of gastric acid and pepsin. As an indicator of adrenocortical function, measurement of blood cortisol levels is useful in the differential diagnosis of Addison's and Cushing's disease, hypopituitarism, and adrenal hyperplasia and carcinoma. 4 A variety of stimulation and suppression tests ACTH Stimulation, ACTH Reserve, Dexamethasone Suppression can supply supportive information on adrenocorticol function. 4,5,6 Anomalous cortisol concentrations have been shown to exist in patients with acute infections, severe pain, diabetes mellitus or heart failure, and in women either pregnant or on estrogen therapy. In addition, certain virilizing syndromes and iatrogenic conditions raise other naturally occurring steroid levels to high (nonphysiologic) concentrations that may interfere with assaying cortisol directly, unless a highly specific antiserum is used. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Cortisol is a solid-phase, competitive chemiluminescent enzyme immunoassay. Incubation Cycles: 1 30 minutes Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Cortisol has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 10 µl serum Storage: 7 days at 2 8 C, or 3 months at 20 C. 8 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. 2 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

3 Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Cortisol Bead Pack (L2CO12) With barcode. 200 beads, coated with polyclonal rabbit anti-cortisol. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KCO2: 1 pack L2KCO6: 3 packs Cortisol Reagent Wedge (L2COA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to cortisol in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KCO2: 1 wedge L2KCO6: 3 wedges Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Cortisol Adjustors (LCOL, LCOH) Two vials (Low and High), 3 ml each, of cortisol in processed human serum, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KCO2: 1 set L2KCO6: 2 sets Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M1Z: 3 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks Quality Control Samples: Follow government regulations or accreditation requirements for quality control frequency. Use controls or serum pools with at least two levels (low and high) of cortisol. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Multi-Diluent 1 (L2M1Z) For the on-board dilution of high samples. One vial of concentrated (ready-to-use) processed, normal human serum, containing undetectable to low levels of cortisol, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M1Z: 25 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 3

4 Expected Values The following reference ranges have been reported in the literature for circulating cortisol levels and for the results of stimulation and suppression tests. Diurnal Variation ACTH Stimulation ACTH Reserve Dexamethasone Suppression a.m.: 5 25 µg/dl ( nmol/l) 1,8,9 p.m.: Approximately half of a.m. values Over twice (usually 3 to 5 times) basal values 4,5 Below basal (control) values 5,6 Below basal (control) values for the screening, low-dose and high-dose tests 4,5 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Circulating cortisol results may be falsely elevated in samples obtained from patients being treated with prednisolone or prednisone (converted to prednisolone in vivo). Caution must therefore be exercised with cortisol determinations for patients undergoing therapy with these and structurally related synthetic corticosteroids. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in µg/dl. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: µg/dl nmol/l Calibration Range: 1 to 50 µg/dl (28 to 1380 nmol/l) The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.20 µg/dl (5.5 nmol/l) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three cortisol solutions (100, 185, and 380 µg/dl) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for cortisol. (See "Specificity" table.) Although some steroids exhibit slight crossreactivity, their normal physiological concentrations are low compared to cortisol, hence they will not significantly interfere with the assay. There is, however, an observed crossreactivity of approximately 62% with prednisolone which must be considered for patients undergoing this therapy. Since prednisone is converted to prednisolone in vivo, caution must be exercised with cortisol determinations for patients undergoing either therapy. Bilirubin: Samples spiked with 100 and 200 mg/l of conjugated and unconjugated bilirubin were analyzed. Bilirubin may interfere with the assay, causing elevation of values. (See Bilirubin table.) Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 384 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. 4 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

5 Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison 1: The assay was compared to IMMULITE Cortisol on 97 samples. (Concentration range: approximately 2 to 50 µg/dl. See Method Comparison 1 graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.92 (IML) µg/dl r = Means: 17.3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18.8 µg/dl (IMMULITE) Method Comparison 2: The assay was compared to Coat-A-Count (RIA) Cortisol on 97 samples. (Concentration range: approximately 2 to 50 µg/dl. See Method Comparison 2 graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.98 (CAC) 0.83 µg/dl r = Means: 17.3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18.5 µg/dl (Coat-A-Count) References 1) Foster L, Dunn R. Single-antibody technique for radioimmunoassay of cortisol in unextracted serum or plasma. Clin Chem 1974;20:365. 2) Farmer R, Pierce C. Plasma cortisol determinations: radioimmunoassay and competitive protein binding compared. Clin Chem 1974; 20:411. 3) Ruder H, et al. A radioimmunoassay for cortisol in plasma and urine. J Clin Endo Metab 1972;35:219. 4) Rothfeld B, ed. Plasma Cortisol. In: Nuclear medicine in vitro. 1974:120. 5) Murphy B, et al. Clinical studies utilizing a new method for the serial determination of plasma corticoids. J Canad Med Assoc 1964;90:775. 6) Sparks R. Measurement of serum 11-deoxycortisol and cortisol after metyrapone. Ann Intern Med 1971;75:717. 7) Kowalski A, Paul W. A simple extraction procedure for the determination of free (unconjugated) cortisol in urine by radioimmunoassay. Clin Chem 1976;25: ) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, ) Wilson JD, Foster DW, editors. Williams textbook of endocrinology. 7th ed. Philadelphia: W.B. Saunders, Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (µg/dl) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całóść, 3 Średnia, 4 SD, 5 CV. Linearity (µg/dl) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in 8 >50 4 in in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 5

6 Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 iw 8. Specificity Compound 1 µg/dl Added 2 % Cross reactivity 3 Aldosterone % Androstenedione 10,000 ND Betamethasone 1000 ND Corticosterone % Cortisone % 11-Deoxycorticosterone 400 ND 11-Deoxycortisol % 21-Deoxycortisone % Dexamethasone 500 ND DHEA-SO 4 10,000 ND Estriol 100 ND Estrone 500 0% Fluticasone 22 ND 17 -Hydroxyprogesterone % Methotrexate 100 ND Methylprednisolone % % Prednisolone 8 62% Prednisone % Pregnanediol % Progesterone 400 ND Spironolactone 1000 ND Tetrahydrocortisone 400 0% Triamcinolone % 501 ND ND: Not detectable. 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności krzyżowej, 4 ND: nieoznaczalne. Bilirubin (µg/dl) Unspiked mg/l Conjugated 1 Unconjugated mg/l 100 mg/l 200 mg/l Česky. 1 Konjugovaný, 2 Nekonjugovaný, 3 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Δεσμευμένη (άμεση), 2 Αδέσμευτη (έμμεση), 3 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Związana, 2 Niezwiązana, 3 Wyjściowe. Recovery (µg/dl) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzony (Z), 3 Oczekiwany (O), 4 % Z/O. 6 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

7 Method Comparison 1: IMMULITE 2000 Cortisol IMMULITE/IMMULITE 1000 Cortisol, µg/dl (IML 2000) = 0.92 (IML) µg/dl r = Method Comparison 2: IMMULITE 2000 Cortisol Coat-A-Count Cortisol, µg/dl (IML 2000) = 0.98 (CAC) 0.83 µg/dl r = English. Cortisol Česky. Kortisol. Ελληνικά. Κορτιζόλη. Polski. Kortyzol. Česky IMMULITE 2000 Kortisol Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace kortisolu (hydrokortison, Compound F) v séru, jakožto pomůcky při klinickém hodnocení stavu nadledvinek. Katalogové číslo : L2KCO2 (200 stanovení), L2KCO6 (600 stanovení) Kód metody : COR Barva : Tmavě růžová Shrnutí a vysvětlení Kortisol (hydrokortison, Sloučenina F) je nejběžnější cirkulující steroidní hormon a hlavní glukokortikoid vylučovaný kůrou nadledvinek. Kortisol je fyziologicky účinný při protizánětlivých aktivitách, reguluje krevní tlak, účastní se glukoneogenézy, absorpce vápníku a vylučování žaludeční kyseliny a pepsinu. Měření hladiny kortisolu v krvi je vhodné při diferenciální diagnostice Addisonovy a Cushingovy nemoci, hypopituitarizmu, nadledvinkové hyperplazie a karcinomu, protože kortisol je indikátorem funkce kůry nadledvinek. 4 Podpůrné informace o funkci kůry nadledvinek mohou poskytnout různé stimulační a supresní testy ACTH stimulace, ACTH rezerva, Dexametasonová suprese. 4,5,6 Anomální koncentrace kortisolu byly objeveny u pacientů s akutní infekcí, prudkými bolestmi, diabetes mellitus nebo selháním srdce, a u žen buď těhotných nebo podstupujících léčbu estrogenem. Některé virilizující a iatrogenní syndromy můžou způsobit nárůst koncentrace ostatních přirozeně se vyskytujících steroidů mimo fyziologické hodnoty a při těchto koncentracích můžou interferovat se stanovovaným kortisolem přímo, ledaže by bylo použité vysoce specifické antisérum. Princip stanovení Stanovení IMMULITE 2000 Kortisol je konkurenční chemiluminiscenční enzymová imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly : 1 30 minut Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře ; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Žloutenkové nebo značně kontaminované vzorky můžou dávat chybné výsledky. IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 7

8 Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Kortisol na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku : 10 μl séra Skladování : 7 dní při teplotě 2 8 C nebo 3 měsíce při 20 C. 8 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminescenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky na vnitřní krabici. Kortisol zásobník s kuličkami (L2CO12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených polyklonální králičí protilátkou proti kortisolu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KCO2 : 1 balení L2KCO6 : 3 balení Kortisol reagencie (L2COA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s kortisolem, v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KCO2 : 1 nádobka L2KCO6 : 3 nádobky Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Kortisol kalibrátory (LCOL, LCOH) Dvě ampulky po 3 ml s vysokou a nízkou koncentrací kortisolu ve zpracovaném lidském séru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KCO2 : 1 sada L2KCO6 : 2 sady Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multidiluent 1 (L2M1Z) Pro automatické ředění vzorků od pacientů. Jedna ampulka koncentrovaného (připraveného k použití), zpracovaného normálního lidského séra, obsahujícího nezjistitelné až nízké množství kortisolu, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M1Z : 25 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M1Z : 3 štítky 8 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

9 L2SUBM : Chemiluminescenční substrát L2PWSM : Promývací roztok L2KPM : Čistící roztok na jehly LRXT : Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT : 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC : 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu ; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi : 4 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Pokud jde o četnost kontroly kvality, je třeba řídit se platnými předpisy a akreditačními požadavky. Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) kortisolu. Společnost Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje používat obchodně dostupné materiály kontroly kvality o přinejmenším dvou koncentracích vysoké a nízké. Vyhovující funkčnosti se dosahuje, pokud zjištěné hodnoty analytu leží uvnitř přijatelného kontrolního rozmezí analyzátoru nebo uvnitř rozmezí stanoveného příslušným interním systémem kontroly kvality dané laboratoře. Očekávané hodnoty Pro hladinu cirkulujícího kortisolu a pro výsledky stimulačních a supresních testů byly zjištěny následující referenční rozmezí. Odchylky během dne ACTH stimulace ACTH rezerva Dexametasonová suprese dopoledne: 5 25 µg/dl ( nmol/l) 1,8,9 odpoledne : Přibližně polovina dopoledních hodnot Více než dvojnásobek (obvykle 3x 5x) bazálních hodnot 4,5 Nižší než bazální (kontrolní) hodnoty 5,6 Nižší než bazální (kontrolní) hodnoty pro screening a testy nízkých a vysokých dávek. 4,5 Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Zjištěná množství cirkulujícího kortisolu mohou být falešně zvýšená ve vzorcích pacientů léčených prednisolonem nebo prednisonem (konvertuje na prednisolon in vivo). Proto je u pacientů podstupujících léčbu těmito steroidními hormony a strukturálně příbuznými syntetickými kortikosteroidy třeba dbát opatrnosti při stanovování koncentrace kortisolu. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all imunologickým stanovením. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 9

10 Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v µg/dl. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor : µg/dl 27,59 nmol/l Kalibrační rozsah : 1 až 50 µg/dl (28 až 1380 nmol/l) Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost : 0,20 µg/dl (5,5 nmol/l) Přesnost : Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Precision".) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearity".) Zpětná výtěžnost : Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků kortisolu (100, 185 a 380 µg/dl) v poměru 1 :19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Recovery".) Specificita : Protilátka je vysoce specifická vůči kortisolu. (Viz tabulka "Specificity".) I když některé steroidy vykazují mírnou zkříženou reaktivitu, jejich běžná fyziologická koncentrace je ve srovnání s kortisolem nízká a proto se stanovením nebudou výrazněji interferovat. Zkřížená reaktivita (přibližně 62%) byla ale naměřená u prednisolonu, což je nutné u pacientů podstupujících léčbu tímto hormonem zvážit. Protože prednison konvertuje na prednisolon in vivo, při stanovení kortisolu u pacientů podstupujících léčbu některým z uvedených hormonů je třeba dbát opatrnosti. Bilirubin : Byly analyzovány vzorky s přídavkem 100 a 200 mg/l konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu. Bilirubin může interferovat s tímto stanovením a způsobit zvýšení naměřených hodnot. (Viz tabulka "Bilirubin".) Hemolýza : Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 384 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie : Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání metody 1 : Stanovení bylo porovnáno s testem Kortisol na analyzátoru IMMULITE na 97 vzorcích. (Koncentrační rozsah : přibližně 2 až 50 µg/dl. Viz graf "Method Comparison 1".) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 0,92 (IML) + 0,07 µg/dl r = 0,990 Střední hodnoty : 17,3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18,8 µg/dl (IMMULITE) Srovnání metody 2 : Stanovení bylo porovnáno s testem Coat-A-Count (RIA) Kortisol na 97 vzorcích. (Koncentrační rozsah: přibližně 2 až 50 µg/dl. Viz graf "Method Comparison 2".) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 0,98 (CAC) 0,83 µg/dl r = 0,983 Střední hodnoty : 17,3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18,5 µg/dl (Coat-A-Count) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Κορτιζόλη Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση της κορτιζόλης (υδροκορτιζόνη, Συστατικό F) στον ορό, ως βοήθημα για τον κλινικό έλεγχο της κατάστασης των επινεφριδίων. 10 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

11 Αριθμός Καταλόγου: L2KCO2 (200 αναλύσεις), L2KCO6 (600 αναλύσεις) Κωδικός Ανάλυσης: COR Χρώμα: Σκούρο Ροζ Περίληψη και επεξήγηση Η Κορτιζόλη (υδροκορτιζόνη, Συστατικό F) είναι το αφθονότερο στεροειδές στην κυκλοφορία και το κύριο γλυκοκορτικοειδές που εκκρίνεται από το φλοιό των επινεφριδίων. Φυσιολογικά αποτελεσματική με αντιφλεγμονώδη δραστηριότητα, η κορτιζόλη, εκτός από τη διατήρηση της πίεσης του αίματος, εμπλέκεται επίσης στην γλυκονεογένεση, την απορρόφηση του ασβεστίου και την έκκριση του γαστρικού οξέος και της πεψίνης. Σαν δείκτης της λειτουργίας του φλοιού των επινεφριδίων, η μέτρηση των επιπέδων της κορτιζόλης στο αίμα είναι χρήσιμη στη διαφορική διάγνωση της ασθένειας των Addison και Cushing, της υπολειτουργίας της υπόφυσης και της υπερπλασίας και του καρκινώματος των επινεφριδίων. 4 Μια ποικιλία διεγερτικών και κατασταλτικών αναλύσεων διέγερση της ACTH, ανάστροφη ACTH, καταστολή της δεξαμεθαζόνης μπορούν να παρέχουν βασικές πληροφορίες για τη λειτουργία του επινεφριδικού φλοιού. 4,5,6 Ανώμαλες συγκεντρώσεις κορτιζόλης φαίνεται να υπάρχουν σε ασθενείς με οξείες μολύνσεις, σοβαρό πόνο, σακχαρώδη διαβήτη ή καρδιακή ανεπάρκεια και σε γυναίκες που, είτε είναι έγκυες, είτε δέχονται θεραπεία οιστρογόνων. Επιπρόσθετα, ορισμένα ιογενή σύνδρομα και ιατρογενείς καταστάσεις αυξάνουν άλλα φυσιολογικά επίπεδα στεροειδών σε υψηλές (μη φυσιολογικές) συγκεντρώσεις που μπορεί να επηρεάσουν τη μέθοδο της κορτιζόλης άμεσα, εκτός αν χρησιμοποιηθεί αντιορός με υψηλή ειδικότητα. Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Κορτιζόλη είναι μία ξηρής φάσης, χημειοφωταυγής, ανταγωνιστική ενζυμική ανοσοεξέταση Κύκλοι Επώασης: 1 30 λεπτά Συλλογή δείγματος Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Λιπιδαιμικά, αιμολυμένα, έχοντα ίκτερο και μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λάθος αποτελέσματα. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Κορτιζόλη δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορού Φύλαξη: 7 ημέρες στους 2 8 C ή 3 μήνες στους 20 C. 8 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για εργαστηριακή διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Υπόκεινται στην ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 11

12 Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl, έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά βούληση, ξεπλύντε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανόν εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Δεν πρέπει να μολυνθεί και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων Κορτιζόλης (L2CO12) Με barcode. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με πολυκλωνικά αντισώματα αντίκορτιζόλης από κουνέλι. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KCO2: 1 συσκευασία L2KCO6: 3 συσκευασίες Δοχείο Αντιδραστηρίου Κορτιζόλης (L2COA2) Με barcode. 11,5 ml αλκαλική φωσφατάση (έντερο μόσχου) συνδεδεμένη με Κορτιζόλη, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερή στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. L2KCO2: 1 δοχείο L2KCO6: 3 δοχεία Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές της Κορτιζόλης (LCOL, LCOH) Δύο φιαλίδια (Χαμηλό και Υψηλό), 3 ml το καθένα, κορτιζόλης σε επεξεργασμένο ανθρώπινο ορό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαλυμένα) στους 20 C. L2KCO2: 1 σετ L2KCO6: 2 σετ Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα b arcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Πολυ-αραιωτικό 1 (L2M1Z) Για την αραίωση πολλαπλών δειγμάτων. Ένα φιαλίδιο συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) επεξεργασμένου φυσιολογικού ανθρώπινου ορού, που περιέχει από μη ανιχνεύσιμα έως χαμηλά επίπεδα κορτιζόλης. Σταθερό στους 2 8 C για 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2M1Z: 25 ml Ετικέτες με barcode παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. L2M1Z: 3 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για διάλυση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες διάλυσης δείγματος Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Εφαρμόστε τους κρατικούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης για τη συχνότητα του ποιοτικού ελέγχου. 12 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

13 Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) κορτιζόλης. Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ελέγχου ποιότητας με τουλάχιστον 2 επίπεδα (χαμηλό και υψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο απόδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των υλικών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Αναμενόμενες Τιμές Τα ακόλουθα εύρη αναφοράς έχουν αναφερθεί για τα επίπεδα της κορτιζόλης στο αίμα και για τα αποτελέσματα των αναλύσεως διέγερσης και καταστολής. Μεταβολή διούρησης Διέγερση ACTH Ανάστροφη ACTH Καταστολή της Δεξαμεθαζόνης π.μ.: 5 25 µg/dl ( nmol/l) 1,8,9 μ.μ.: Περίπου οι μισές τιμές π.μ. Πάνω από διπλάσιες (συνήθως 3 με 5 φορές) βασικές τιμές 4,5 Κάτω από τις βασικές τιμές (ελέγχου) 5,6 Κάτω από τις βασικές τιμές (ελέγχου) για τον έλεγχο, αναλύσεις χαμηλής και υψηλής δοσολογίας 4,5 Θεωρείστε αυτά τα όρια μόνο σαν οδηγούς. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Τα αποτελέσματα της κορτιζόλης στην κυκλοφορία μπορεί να είναι εσφαλμένα ανεβασμένα σε δείγματα που πάρθηκαν από ασθενείς που υφίστανται αγωγή με πρεδνιζολόνη ή προδνιζόνη (που μετατρέπεται σε πρεδνιζολόνη στον οργανισμό). Πρέπει, επομένως, να προσεχθούν οι υπολογισμοί της κορτιζόλης στους ασθενείς που υφίστανται θεραπεία με τα προαναφερθέντα, αλλά και άλλα φάρμακα με συγγενική δομή με τα συνθετικά κορτικοστεροειδή. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε εργαστηριακές μεθόδους ανοσοανίχνευσης. [Bλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] Δείγματα ασθενών που, σαν ρουτίνα, εκτίθενται σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε µg/dl. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας Μετατροπής: µg/dl 27,59 nmol/l Εύρος Καμπύλης: 1 με 50 µg/dl (28 με 1380 nmol/l) Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική Ευαισθησία: 0,20 µg/dl (5,5 nmol/l) Ακρίβεια: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις εις διπλούν σε διάστημα 20 ημερών, δύο τρεξίματα την ημέρα, σε σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (Bλ. Πίνακα "Precision".) IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 13

14 Γραμμικότητα: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις σε διαφορετικά διαλύματα. (Bλ.Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Κάποια δείγματα εμπλουτίστηκαν (1 με 19) με τρία διαλύματα κορτιζόλης (100, 185 και 380 µg/dl). (Bλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή ειδικότητα για την κορτιζόλη. (Βλ.Πίνακα "Specificity".) Παρόλο που κάποια στεροειδή εμφανίζουν μικρή διασταυρούμενη αντίδραση, οι κανονικές φυσιολογικές συγκεντρώσεις τους είναι χαμηλές συγκρινόμενες με την κορτιζόλη, έτσι δεν θα επηρεάσουν σημαντικά την ανάλυση. Υπάρχει, παρόλα αυτά, μια παρατηρούμενη διασταυρούμενη αντίδραση της τάξης του 62% με την πρεδνιζολόνη, η οποία πρέπει να ληφθεί υπόψη για τους ασθενείς που υφίστανται αυτή τη θεραπεία. Απ τη στιγμή που η πρεδνιζόνη μετατρέπεται σε πρεδνιζολόνη στον οργανισμό, πρέπει να δοθεί προσοχή στον καθορισμό της κορτιζόλης για τους ασθενείς που υφίστανται μια από τις δυο θεραπείες. Χολερυθρίνη: Αναλύθηκαν δείγματα αναμεμειγμένα με 100 και 200 mg/l Δεσμευμένης (άμεσης) και Αδέσμευτης (έμμεσης) χολερυθρίνης. Η χολερυθρίνη μπορεί να επηρεάσει τη μέθοδο, προκαλώντας αύξηση των τιμών. (Bλ. Πίνακα "Bilirubin".) Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 384 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την μέθοδο IMMULITE Κορτιζόλης σε 97 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 2 με 50 µg/dl. Βλ. Γράφημα "Method Comparison 1".) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,92 (IML) + 0,07 µg/dl r = 0,990 Μέσοι Όροι: 17,3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18,8 µg/dl (IMMULITE) Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την μέθοδο Coat-A-Count (RIA) Κορτιζόλης σε 97 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 2 με 50 µg/dl. Βλ. Γράφημα "Method Comparison 2".) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,98 (CAC) 0,83 µg/dl r = 0,983 Μέσοι Όροι: 17,3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18,5 µg/dl (Coat-A-Count) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Kortyzol Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia poziomu kortyzolu (hydrocortizon, Składnik F) w surowicy pomocny w klinicznej ocenie stanu nadnerczy. Numery katalogowe: L2KCO2 (200 testów), L2KCO6 (600 testów) Kod testów : COR Kolor: Ciemno różowy Wprowadzenie Kortyzol (hydrokortyzon, Składnik F) jest najobficiej krążącym hormonem steroidowym oraz głównym glukokortykoidem wydzielanym przez korę nadnerczy. Jego fizjologiczna aktywność przejawia się działaniem przeciwzapalnym oraz utrzymaniem ciśnienia krwi, lecz zaangażowany jest również w glukoneogenezę, absorpcję wapnia oraz wydzielanie kwasu żołądkowego i pepsyny. 14 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

15 Oznaczenie kortyzolu we krwi jako wskaźnika funkcji kory nadnerczy jest przydatne w różnicowaniu diagnostycznym choroby Addison a i Cushing a, niedoczynności przysadki oraz hiperplazji i raka nadnerczy. 4 Różnorodne testy stymulujące i hamujące ACTH: Stymulacja ACTH, Ocena rezerwy ACTH, Supresja dexametasonem mogą dostarczyć istotnych informacji o funkcjonowaniu kory nadnerczy. 4,5,6 Nieprawidłowe stężenia kortyzolu występują u chorych z ostrymi infekcjami, silnymi bólami, cukrzycą, niewydolnością serca oraz u kobiet ciężarnych lub poddanych terapii estrogenowej. Ponadto pewne zespoły wirylizacyjne i sytuacje jatrogenne podnoszą poziom innych prawidłowych steroidów do wysokiej, (nie fizjologicznej) wartości, tak, że mogą one wpływać bezpośrednio na oznaczenie kortyzolu, o ile nie użyje się wysoko specyficznych przeciwciał. Zasada testu IMMULITE 2000 Kortyzol jest kompetycyjnym chemiluminescencyjnym testem immunoenzymatycznym fazy stałej. Czas inkubacji: 1 30 minut Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. W próbkach żółtaczkowych i silnie zanieczyszczonych wyniki testu mogą być błędne. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Kortyzol nie został określony. Wymagana objętość próbki: 10 µl surowicy Przechowywanie materiału: 7 dni w 2 8 C lub 3 miesiące w 20 C. 8 Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać jako konserwant azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Kortyzol Pojemnik z Kulkami (L2CO12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych poliklonalnym króliczym przeciwciałem anty-kortyzol. Stabilne w 2 8 C do daty ważności L2KCO2: 1 pojemnik L2KCO6: 3 pojemniki IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 15

16 Kortyzol Klin Odczynnikowy (L2COA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z kortyzolem w buforze z konserwantem. Zamknięte przechowywać w chłodzie: stabilne w 2 8 C do daty ważności L2KCO2: 1 klin L2KCO6: 3 kliny Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Kortyzol Kalibratory (LCOL, LCOH) Dzie fiolki (wysoki i niski), każda z 3 ml kortyzolu w preparowanej surwoicy ludzkiej z konserwantem. Po otwarciu stabilne 30 dni w 2 8 C lub lub 6 miesięcy (rozpipetować) w 20 C. L2KCO2: 1 zestaw L2KCO6: 2 zestawy Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały dostarczane oddzielnie Multi-Diluent 1 (L2M1Z) Do automatycznego rozcieńczania w analizatorze próbek badanych. Fiolka zawierająca koncentrowaną (gotową do użytku), preparowaną prawidłową surowicę ludzką, zawierającą nieoznaczalny lub niski poziom kortyzolu z konserwantem. Po otwarciu przechowywać 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy (rozpipetowany) w 20 C. L2M1Z: 25 ml Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce ( mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2M1Z: 3 nalepki L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący igłę pipetora LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik Ponadto niezbędne woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany Odstęp Pomiędzy Rekalibracjami: 4 tygodnie Próbki Kontrolne: Przestrzegać przepisów państwowych i wymogów kontrolnych w zakresie częstotliwości kontroli jakości. Stosować kontrole lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie Kortyzol. Siemens Healthcare Diagnostics zaleca stosowanie dostępnych w handlu próbek kontroli jakości o co najmniej 2 poziomach (niskim i wysokim). Uznaje się, że test przebiega prawidłowo, gdy uzyskane wartości analitu plasują się w przyjętym dla Kontroli zakresie dla danego analizatora lub w zakresie opracowanym w ramach wewnątrzlaboratoryjnego systemu zapewnienia jakości. Oczekiwane wartości Piśmiennictwo podaje poniższe wartości referencyjne kortyzolu w krążeniu i poziomy dla testów stymulacji i supresji. 16 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

17 Wahania dobowe Stymulacja ACTH Rezerwa ACTH Supresja dexamethasonem Przed południem: 5 25 µg/dl ( nmol/l) 1,8,9 Po południu: Około połowy wartości przedpołudniowej. Ponad dwie (zwykle 3 do 5 krotności) wartości podstawowej. 4,5 Poniżej wartości podstawowych (kontrolnych) 5,6 Poniżej skriningowej wartości podstawowej (kontrolnej), w testach z małą i wysoką dawką 4,5 Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Wyniki oznaczenia kortyzolu we krwi mogą być fałszywie zawyżone u chorych leczonych prednisolonem lub prednisonem (przechodzącym in vivo w prednisolon). W związku z tym należy zwrócić uwagę na wyniki u chorych zażywających powyższe specyfiki oraz inne strukturalnie pokrewne syntetyczne kortykosteroidy. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki podano w µg/dl. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Faktor przelicznia: µg/dl 27,59 nmol/l Zakres kalibracji: 1 50 µg/dl ( nmol/l) Test wykazuje zgodność pomiarową z wewnętrznymi standardami wytwarzania dzięki zastosowaniu kwalifikowanych materiałów i metod pomiaru. Czułość analityczna: 0,20 µg/dl (5,5 nmol/l) Precyzja: Próbki oznaczano w duplikatach w ciągu 20 dni, dwa razy dziennie uzyskując 40 serii i 80 powtórzeń (patrz: tabela Precyzja). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (patrz: tabela Liniowość). Odzysk: Badano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami kortyzolu o stężeniach, kolejno: 100, 185 i 380 μg/dl (patrz: tabela Odzysk). Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne w stosunku do kortyzolu (patrz: tabela Specyficzność). Chociaż niektóre steroidy wykazują reaktywność krzyżową, to ich prawidłowe stężenia są na tyle niskie w porównaniu do kortyzolu, że nie wpływają na test IMMULITE Kortyzol. Stwierdzono jednakże 62% reaktywność krzyżową z prednisolonem, którą należy brać pod uwagę w przypadku osób przyjmujących prednisolon. Ponieważ prednizon ulega in vivo konwersji do prednisolonu należy również zachować ostrożność w interpretacji oznaczeń kortyzolu u osób przyjmujących prednison. Bilirubina: Analizowano próbki wzbogacane 100 i 200 mg/l związanej i niezwiązanej bilirubiny. Bilirubina może zakłócać oznaczenie, powodując IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 17

18 zawyżanie wartości (patrz: tabela Bilirubina.) Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 384 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do 3000 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Porównanie metod 1: Test porównywano z testem IMMULITE Kortyzol w grupie 97 próbek. (Zakres stężeń około: 2 do 50 µg/dl. Patrzy Wykres Porównanie metod 1.) Uzyskano nastpujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,92 (IML) + 0,07 µg/dl r = 0,990 Średnie: 17,3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18,8 µg/dl (IMMULITE) Porównanie metod 2: Test porównywano z testem Coat-A-Count (RIA) Kortyzol w grupie 97 próbek. (Zakres stężeń około: 2 do 50 µg/dl. Patrzy Wykres Porównanie metod 2.) Uzyskano nastpujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,98 (CAC) 0,83 µg/dl r = 0,983 Średnie: 17,3 µg/dl (IMMULITE 2000) 18,5 µg/dl (Coat-A-Count) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE and Coat-A-Count are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Origin: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KCO 7 {23} Changes in this Edition: cc#eu21838: Removed Siemens control (CON6) from the Kit Components Supplied Separately section. Under Quality Control Samples, added information for quality control frequency, materials, and performance. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE 18 IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, )

19 Symbol Definition En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie LOT Symbol Definition En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) BEAD PACK En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Harmful Cz: Škodlivé El: Επιβλαβές Pl: Szkodliwy lub drażniący En: Corrosive Cz: Korozivní El: Διαβρωτικό Pl: Żrący En: Toxic Cz: Toxické El: Τοξικό Pl: Toksyczny En: Dangerous for the environment Cz: Nebezpečné pro životní prostředí El: Επικίνδυνο για το περιβάλλον Pl: Niebezpieczny dla środowiska En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami IMMULITE 2000 Cortisol (PIEL2KCO-7 {23}, ) 19