IL2R. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 IL2R For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 IL2R English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of soluble interleukin 2 receptor (IL2R) in serum, as an aid in the study of inflammatory diseases. Catalog Number: L2KIP2 (200 tests) Test Code: I2R Color: Light Blue Summary and Explanation The receptor of the cytokine interleukin 2 (IL-2) plays a crucial role in the regulation of the immune response. Binding of IL-2 to its receptor (IL2R) on the surface of T-lymphocytes triggers a series of intracellular signaling events that result in the activation and proliferation of resting T cells and, ultimately, in the generation of helper, suppressor and cytotoxic T cells, which mediate immune reactions. The IL-2 receptor is unique among growth factor receptors in that it is made up of at least three distinct membrane components: the chain (IL2R ) the so-called Tac antigen (MW 55kDa), a -chain (IL2R ; MW kda), and the -chain (IL2R ; MW 64 kda). Different combinations of these three components give rise to the generation of various forms of the IL-2 receptor, each of which manifests different binding affinities to IL-2. Most resting T cells, B cells, large granular lymphocytes (LGLs) and monocytes do not express significant numbers of this receptor on their surfaces. Upon activation, receptor molecules are expressed on the surface of the cells, and a soluble form (sil2r) is released, which is about 10 kda smaller than the membrane-bound protein. It has been found that sil2r is present at low levels in serum of healthy individuals and at significantly elevated levels in a broad range of disorders such as neoplastic diseases, autoimmune diseases, organ allograft rejection and different infections. Thus, it appears that sil2r can serve as a marker for diagnosis, therapeutic evaluation and management of cancer, as well as an indicator of a wide spectrum of disorders involving immune activation. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 IL2R is a solid-phase, two-site chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (a bead coated with murine monoclonal anti-il-2r antibody) is mixed with reagent (containing alkaline phosphatase conjugated to a rabbit anti-il-2r polyclonal antibody) and sample. Solid phase, reagent, and sample are incubated together. Soluble IL-2R in the sample binds to the solid phase antibody and reagent antibody forming a sandwich complex on the bead. Unbound enzyme conjugate is then removed by a centrifugal wash. Finally, chemiluminescent substrate is added to the bead and signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes Specimen Collection EDTA plasma should not be used as a sample type. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. 2 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

3 IMMULITE 2000 IL2R has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 15 µl serum Storage: 2 days at 2 8 C or for longer at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Warning! Harmful if swallowed or in contact with skin. Harmful to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/ protective clothing/eye protection/face protection. Avoid release to the environment. IF SWALLOWED: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. IF ON SKIN: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium azide; IL2R Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. IL2R Bead Pack (L2IP12) With barcode. 200 beads, coated with a murine monoclonal anti-il2r antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KIP2: 1 pack IL2R Reagent Wedge (L2IPA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to rabbit polyclonal anti-il2r antibody in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KIP2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. IL2R Adjustors (LIPL, LIPH) Two vials (Low and High) of lyophilized IL2R in a protein-based buffer, with preservative. Reconstitute each vial with 3.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 3 months after reconstitution. Do not freeze. Following reconstitution, the Adjustors should be aliquoted, to avoid contamination from repeated usage. L2KIP2: 2 sets Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For the on-board dilution of patient samples. One vial of concentrated (ready-to-use), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 3

4 Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcode can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LILCM: IMMULITE Cytokine Control Module (Bi-level, human serum-based) Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of IL2R. Expected Values A study performed with IMMULITE 2000 IL2R on 100 apparently healthy adults yielded a median of 333 U/mL and a 95% reference range of 158 to 623 U/mL. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Dilution of samples to concentrations below 200 U/mL is not recommended. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in U/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 50 to 7,500 U/mL Analytical Sensitivity: 5 U/mL High-dose Hook Effect: None up to 1,030,000 U/mL Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three IL2R solutions (5,000, 25,000 and 50,000 U/mL) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for IL2R. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 512 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. 4 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

5 Method Comparison: The assay was compared to IMMULITE IL2R on 131 spiked and unspiked patient samples. (Concentration range: approximately 130 to 6,990 U/mL. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.03 (IML) U/mL r = Means: 767 U/mL (IMMULITE 2000) 736 U/mL (IMMULITE) References 1) Rubin LA, et al. Identification and characterization of a released form of the Interleukin-2 Receptor. Leukocytes and host defense 1986; ) Rubin LA, et al. Soluble interleukin-2 receptors are released from activated human lymphoid cells in vitro. J Immunol 1985;135: ) Rubin LA, et al. The released interleukin-2 receptor binds interleukin-2 efficiently. J Immunol 1986;137: ) Pizzolo G. The soluble Interleukin-2 receptor as a new biological marker in diseases. Immunol Clin 1988;VII:1. 5) Pui Ch- H. Serum Interleukin-2 Receptor: Clinical and biological Implications. Leukemia 1989;3: ) Rubin LA. The soluble Interleukin-2 Receptor: biology function, and clinical application. Annals Internal Med 1990;113: ) Zerler B. The soluble Interleukin-2 Receptor as a marker for Human Neoplasia and Immune status. Cancer Cells 1991;3: ) Taniguchi T, Minami Y. The IL-2/IL-2 Receptor System: A current overview. Cell 1993;73:5-8. 9) Waldmann ThA. The IL-2/IL-2 receptor system: a target for rational immune intervention. Immunol Today 1993;14: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (U/mL) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % 4 1, % % 5 3, % % 6 6, % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Specificity Compound 1 U/mL Added 2 Apparent U/mL 3 % Crossreactivity 4 IL-1 10,000 ND ND IL-2 10,000 ND ND IL-4 10,000 ND ND IL-6 10,000 ND ND IL-8 10,000 ND ND IL-1 10,000 ND ND Interferon 10,000 ND ND TNF 10,000 ND ND ND: not detectable 5 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % ιασταυρ.αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Zmierzona, 4 % reaktywności Krzyżowej, 5 ND: Nieoznaczlne. IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 5

6 Method Comparison IMMULITE 2000 IL2R IMMULITE IL2R, U/mL (IML 2000) = 1.03 (IML) U/mL r = English. IL2R Česky. IL2R. Ελληνικά. IL2R. Polski. IL2R. Linearity (U/mL) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % 6 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (U/mL) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B 1,625 1, % C 3,075 2, % A % B 1,556 1,582 98% C 2,981 2, % A % B 1,726 1, % C 3,072 2, % A % B 2,273 1, % C 4,200 3, % 5 1,244 A 1,466 1, % B 2,408 2,432 99% C 3,985 3, % 6 2,772 A 2,869 2, % B 4,029 3, % C 5,398 5, % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 ιάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. 6 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

7 Česky IMMULITE 2000 IL2R Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace rozpustného receptoru interleukinu 2 (IL2R) v séru, jakožto pomůcky při zkoumání zánětlivých onemocnění. Katalogové číslo: L2KIP2 (200 stanovení) Kód metody: I2R Barva: světle modrá Shrnutí a vysvětlení Receptor cytokinového interleukinu 2 (IL-2) hraje zásadní úlohu při regulaci imunitní odpovědi. Navázáním IL-2 na jeho receptor (IL2R) na povrchu T-lymfocytů se spustí série vnitrobuněčných signálních jevů, které pak vyústí v aktivaci a proliferaci klidových T buněk a, hlavně, v tvorbu pomocných, supresních a cytotoxických T buněk, které zprostředkovávají imunitní reakce. Receptor IL-2 je mezi receptory faktoru růstu unikátní, protože je tvořen nejméně třemi různými membránovými složkami: řetězcem (IL2R ) takzvaným Tac antigenem (mol. hm. 55kDa), - řetězcem (IL2R ; mol. hm kda) a - řetězcem (IL2R ; mol. hm. 64 kda). Různé kombinace těchto tří složek umožňují tvorbě různých forem receptoru IL-2, přičemž každá forma se vyznačuje různou vazební afinitou k IL-2. Většina klidových T buněk, B buňky, velké zrnité lymfocyty (LGLs) a monocyty nemají na svém povrchu významné množství tohoto receptoru. Po aktivaci jsou molekuly receptoru exprimovány na povrchu buněk a uvolní se rozpustná forma (sil2r), která je přibližně 10 kda menší než protein navázaný na membránu. Bylo zjištěno, že sil2r se v malém množství vyskytuje v séru zdravých jedinců a v značně zvýšené koncentraci u širokého spektra poruch jako jsou novotvary, choroby autoimunity, rejekce implantovaných orgánů a při různých infekcích. Proto se jeví, že sil2r lze využít jako marker při diagnóze, terapeutickém hodnocení a léčbě rakoviny a též jako indikátor širokého spektra poruch postihujících aktivaci imunitní reakce. Princip stanoveni IMMULITE 2000 IL2R představuje oboustrannou chemilumiscenční imunochemickou reakci v pevné fázi. Pevná fáze (kulička, potažená myší monoklonální protilátkou proti IL-2R) je smíchána s reagencií (obsahující alkalickou fosfatázu konjugovanou s králičí polyklonální protilátkou proti IL-2R) a vzorkem. Pevná fáze, reagencie a vzorek jsou společně inkubovány. Rozpustný IL-2R ve vzorku se naváže na protilátku na kuličce a s protilátkou obsaženou v reagencii utvoří sendvičový komplex. Nenavázaný enzymový konjugát je poté odstraněn centrifugačním mytím. Na závěr je přidán chemiluminiscenční substrát ke kuličce a vzniklý signál odpovídá množství navázaného enzymu. Inkubační cykly: 1 30 minut Odebírání vzorků Vzorky EDTA plazmy nejsou vhodné. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení IL2R na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 15 μl séra Skladování: 2 dny při teplotě 2 8 C nebo delší skladování při 20 C. IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 7

8 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Upozornění: Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Výstraha! Zdraví škodlivý při požití a při styku s kůží. Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ ochranné brýle/obličejový štít. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. PŘI POŽITÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI STYKU S KŮŽÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: azid sodný; IL2R kalibrátory Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. IL2R zásobník s kuličkami (L2IP12) S čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti IL2R. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KIP2: 1 balení IL2R reagencie (L2IPA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální králičí protilátkou proti IL2R v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KIP2: 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. IL2R kalibrátory (LIPL, LIPH) Dvě ampulky s nízkou a vysokou koncentrací lyofilizovaného IL2R v matrici na proteinovém základě, s konzervačním prostředkem. K rekonstituci každé ampule použijte 3,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemnými krouživými pohyby nebo převracením až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při teplotě 2 8 C 3 měsíce po rozpuštění. Nezamrazovat. Po rozpuštění by měly být kalibrátory rozděleny na alikvotní podíly, aby se zabránilo kontaminaci opakovaným používáním. L2KIP2: 2 sady Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť Multi-diluent 2 (L2M2Z, L2MZ4) Pro automatické ředění vzorků pacientů analyzátorem. Jedna ampulka koncentrované (připravené k okamžitému použití) nehumánní bílkovino/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C třicet dnů po 8 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

9 otevření nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Štítky s čárovými kódy jsou dodávané pro použití diluentů. Před použitím umístěte vhodnou nálepku na testovací zkumavku (16 x 100 mm) tak, aby čárový kód mohl být přečten čtečkou čárových kódu v přístroji. L2M2Z: 3 štítky L2M2Z4: 5 štítky L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek pro diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 uzávěrů zkumavek pro diluent vzorků. LILCM: IMMULITE Kontrolní modul pro cytokiny (dvojúrovňový, na bázi lidského séra) Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontrolní vzorky nebo směsný vzorek s alespoň dvěma koncentracemi IL2R (nízkou a vysokou). Očekávané hodnoty Výsledkem výzkum uskutečněného na analyzátorech IMMULITE 2000 na 100 zjevně zdravých dospělých jedincích byl medián 333 U/ml a 95%. referenční rozmezí 158 až 623 U/ml. Tyto hodnoty považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Nedoporučuje se ředění vzorků na koncentraci nižší než 200 U/ml. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, anamnézou pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v U/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových separátorů nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 50 až U/ml Analytická citlivost: 5 U/ml High-dose Hook Effect: Do U/ml žádný Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearita.) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků s přídavkem tří roztoků IL2R (5 000, a U/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní údaje najdete v tabulce Zpětná výtěžnost.) Specificita: Protilátka je vůči IL2R silně specifická. (Viz tabulka Specificita.) IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 9

10 Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 512 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s testem IMMULITE IL2R na 131 vzorcích od pacientů, které byly navýšeny. (Koncentrační rozsah: přibližně 130 až U/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,03 (IML) + 5,5 U/ml r = 0,995 Střední hodnoty: 767 U/ml (IMMULITE 2000) 736 U/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 IL2R Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό του διαλυτού υποδοχέα ιντερλευκίνης 2 (IL2R) στον ορό, ως βοήθημα στη μελέτη φλεγμονωδών νόσων. Αριθμός καταλόγου: L2KIP2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: I2R Χρώμα: Ανοικτό μπλε Περίληψη και επεξήγηση Ο υποδοχέας της κυτοκίνης ιντερλευκίνη 2 (IL-2) παίζει ένα κρίσιμο ρόλο στη ρύθμιση της ανοσολογικής ανταπόκρισης. Η δέσμευση της IL-2 στον υποδοχέα της (IL2R) στην επιφάνεια των T-λεμφοκυττάρων παράγει μια σειρά ενδοκυτταρικών σημάτων που έχει ως αποτέλεσμα την ενεργοποίηση και αναπαραγωγή των αδρανών κυττάρων T και, στη συνέχεια, τη δημιουργία βοηθητικών κατασταλτικών και κυτοτοξικών κυττάρων Τ, τα οποία προκαλούν ανοσολογικές αντιδράσεις. Ο υποδοχέας IL-2 είναι μοναδικός μεταξύ των υποδοχέων αυξητικών παραγόντων, καθώς αποτελείται από τουλάχιστον τρία διαφορετικά μεμβανώδη στοιχεία: την αλυσίδα (IL2R ) το λεγόμενο αντιγόνο Tac (MW 55kDa), μια αλυσίδα (IL2R ; MW kda) και την αλυσίδα (IL2R ; MW 64 kda). Οι διάφοροι συνδυασμοί αυτών των τριών στοιχείων παράγουν διάφορες μορφές του υποδοχέα IL-2, η κάθε μια από τις οποίες εμφανίζει διαφορετικές συγγένειες ένωσης με την IL-2. Τα περισσότερα αδρανή κύτταρα Τ, κύτταρα Β, μεγάλα κοκκώδη λεμφοκύτταρα (LGLs) και μονοκύτταρα δεν διαθέτουν μεγάλες ποσότητες από αυτό τον υποδοχέα στην επιφάνειά τους. Τα μόρια του υποδοχέα εμφανίζονται στην επιφάνεια αυτών των κυττάρων κατά την ενεργοποίησή τους και εκκρίνεται μια διαλυτή μορφή (sil2r), η οποία είναι κατά περίπου 10 kda μικρότερη από την πρωτεΐνη που ενώνεται με τη μεμβράνη. Ανακαλύφθηκε ότι ο sil2r είναι παρών σε χαμηλά επίπεδα στον ορό υγιών ατόμων και σε σημαντικά αυξημένα επίπεδα σε ένα ευρύ φάσμα διαταραχών, όπως είναι οι νεοπλασματικές νόσοι, οι αυτόνοσες νόσοι, η απόρριψη ομοιομοσχευμάτων και οι διάφορες μολύνσεις. Συνεπώς, φαίνεται ότι ο sil2r μπορεί να λειτουργήσει ως δείκτης για τη διάγνωση, τη θεραπευτική αξιολόγηση και τη διαχείριση του καρκίνου, καθώς και ως δείκτης για ένα ευρύ φάσμα διαταραχών που προκαλούν ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος. Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 IL2R είναι μια στερεής φάσης, δύο θέσεων, χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεή φάση (σφαιρίδιο επικαλυμμένο με μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-il-2r ποντικού) αναμειγνύεται με αντιδραστήριο (που περιέχει αλκαλική φωσφατάση 10 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

11 συνδεδεμένη με ένα πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-il-2r κουνελιού) και με το δείγμα. Η στερεή φάση, το αντιδραστήριο και το δείγμα επωάζονται μαζί. Ο διαλυτός IL-2R του δείγματος ενώνεται με το αντίσωμα της στερεής φάσης και το αντίσωμα του αντιδραστηρίου, συγκροτώντας έτσι ένα σύμπλεγμα sandwich στο σφαιρίδιο. Το ελεύθερο από χημικό δεσμό ενζυμικό παράγωγο απομακρύνεται με φυγόκεντρη πλύση. Τέλος, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σφαιρίδιο και παράγεται σήμα σε αναλογία με το δεσμευμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά Συλλογή δειγμάτων Το πλάσμα EDTA δεν πρέπει να χρησιμοποιείται ως τύπος δείγματος. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 IL2R δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Απαιτούμενος όγκος: 15 µl ορού Φύλαξη: 2 μέρες στους 2 8 C, ή για μακροβιότερη αποθήκευση στους 20 C. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Προειδοποίηση! Επιβλαβές σε περίπτωση κατάποσης ή σε επαφή με το δέρμα. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/ πρόσωπο. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΕΡΜΑ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: αζίδιο νατρίου, Ρυθμιστές IL2R Αντιδραστήρια: ιατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 11

12 Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ένα ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων IL2R (L2IP12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντί-il2r αντίσωμα ποντικού. Σταθερά στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KIP2: 1 συσκευασία οχείο αντιδραστηρίου IL2R (L2IPA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένης με πολυκλωνικό αντίσωμα αντί-il2r κουνελιού σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KIP2: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές IL2R (LIPL, LIPH) ύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), λυοφιλοποιημένου ελεύθερου IL2R σε ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με 3,0 ml απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ή με αναστροφή έως ότου το λυοφιλοποιημένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Σταθεροί στους 2 8 C επί 3 μήνες μετά την ανασύσταση. Μη καταψύχετε. Μετά την ανασύσταση, οι ρυθμιστές πρέπει να διαχωριστούν, ώστε να αποφευχθεί η μόλυνση λόγω της επανειλημμένης χρήσης. L2KIP2: 2 σετ Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Πολύ-αραιωτικό 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Για την αραίωση των δειγμάτων των ασθενών στο μηχάνημα. Ένα φιαλίδιο που περιέχει συμπυκνωμένη (έτοιμη για χρήση), μήτρα μη ανθρώπινης πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C επί 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή επί 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν τη χρήση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες σε δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του οργάνου. L2M2Z: 3 ετικέτες L2M2Z4:5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 x 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος LILCM: Μονάδα ελέγχου κυτοκίνης IMMULITE (δύο επιπέδων με βάση ανθρώπινο ορό) Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. ιαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες 12 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

13 είγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιείτε ελέγχους ή δείγματα σε δύο τουλάχιστον επίπεδα (χαμηλό και υψηλό) IL2R. Αναμενόμενες τιμές Μελέτη που διενεργήθηκε με την IMMULITE 2000 IL2R σε 100 φαινομενικά υγιείς ενήλικες έδωσε διάμεση τιμή 333 U/mL και εύρος αναφοράς 95% για 158 έως 623 U/mL. Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμός εν συνιστάται η αραίωση των δειγμάτων σε συγκεντρώσεις κάτω των 200 U/mL. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] είγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε U/mL. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος αναφοράς: 50 έως U/mL Αναλυτική ευαισθησία: 5 U/mL Υψηλή δόση φαινομένου Hook: Καμιά επίδραση έως τις U/mL Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα "Precision".) Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διαφορετικές αραιώσεις. (βλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα IL2R (5 000, και U/mL) και αναλύθηκαν. (βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή εξειδίκευση στην IL2R. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης (συνδεδεμένης και έμμεσης) σε συγκέντρωσεις έως 200 mg/l δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 512 mg/dl δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Σύγκριση της μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την αντίστοιχη μέθοδο της IMMULITE IL2R σε 131 εμπλουτισμένα και μη εμπλουτισμένα δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 130 έως U/mL. ες γράφ.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,03 (IML) + 5,5 U/mL r = 0,995 Μέσοι όροι: 767 U/mL (IMMULITE 2000) 736 U/mL (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 13

14 Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 IL2R Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do ilościowego oznaczenia poziomu rozpuszczalnego receptora dla interleukiny 2 (IL2R) w surowicy. Test przeznaczony jest do monitorowania chorób wiążących się ze stanami zapalnymi. Numer katalogowy: L2KIP2 (200 testów) Kod testu: I2R Kolor: jasnoniebieski Wprowadzenie Receptor dla cytokinowej interleukiny 2 (IL 2) odgrywa kluczową rolę w regulacji odpowiedzi odpornościowej. Powiązanie związku IL 2 z odpowiadającymi mu receptorami (IL2R) na powierzchni limfocytów T uruchamia sekwencję sygnałowych reakcji wewnątrzkomórkowych prowadzących do aktywacji i proliferacji komórek limfocytów T spoczynkowych oraz doprowadzając ostatecznie do wytworzenia się pomocniczych, supresorowych i cytotoksycznych limfocytów T, które uczestniczą w reakcjach odpornościowych. Receptor IL-2 posiada unikalną dla receptorów czynników wzrostowych strukturę, składając się z co najmniej trzech dających się wyróżnić elementów błony komórkowej: łańcucha (IL2R ), tzw. antygenu Tac o ciężarze cząsteczkowym 55 kda; łańcucha (IL2R o ciężarze kda i łańcucha (IL2R o ciężarze 64 kda. Łączenie się tych trzech komponentów w różnych kombinacjach prowadzi do powstania różnych form receptora IL-2, z których każda wykazuje odmienne powinowactwo wiązania z IL-2. Większość spoczynkowych limfocytów T, limfocytów B i dużych limfocytów ziarnistych (LGLs) oraz monocytów wykazuje nieznaczną ekspresję receptora IL2R na swojej powierzchni. Przy aktywacji następuje ekspresja cząsteczek receptorowych na powierzchni komórek i zostaje uwolniona forma rozpuszczalna (sil2r), mniejsza o ok. 10 kda od białka związanego z błoną komórkową. Odkryto, że poziom sil2r w surowicy ludzi zdrowych jest niski. Jego wzrost stwierdzany jest natomiast w szerokiej gamie schorzeń: chorobach nowotworowych, chorobach autoimmunologicznych, reakcjach odrzucania alloprzeszczepów i infekcjach różnego typu. Wydaje się więc, że oznaczanie sil2r może odgrywać rolę w diagnostyce oraz wyborze i monitorowaniu leczenia raka, a także być wskaźnikiem szeregu schorzeń wiążących się z aktywacją systemu odpornościowego. Zasada postępowania IMMULITE 2000 IL2R jest chemiluminescencyjnym, dwupunktowym testem imunometrycznym fazy stałej. Faza stała (kulka opłaszczona mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-il-2r) jest mieszana z odczynnikiem (zawierającym zasadową fosfatazę sprzęgniętą z króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-il-2r) oraz z próbką. Faza stała, odczynnik oraz próbka są następnie razem inkubowane. Rozpuszczalny IL-2R w próbce wiąże się z przeciwciałem w fazie stałej oraz przeciwciałem odczynnika, tworząc na kulce grupę zwaną kanapką. Część niezwiązana koniugatu jest następnie odpłukiwana i usuwana poprzez wirowanie. Na koniec do kulki dodawany jest substrat chemiluminescencyjny i generowany jest sygnał proporcjonalny do ilości związanego enzymu. Cykle inkubacji: 1 30 minut Preparatyka próbek Osocze z EDTA nie jest materiałem odpowiednim do oznaczania. Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. 14 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

15 Odwirowanie próbek surowicy przed zakończeniem wykrzepiania może doprowadzić do pojawienia się w nich fibryny. W celu wyeliminowania błędnych wyników spowodowanych obecnością fibryny, przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Stosowane przy pobieraniu krwi probówki różnych producentów mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotny jest materiał i domieszki, np. żel lub bariery fizjologiczne, aktywatory krzepnięcia oraz/lub antykoagulanty. Test IMMULITE 2000 IL2R nie został przeprowadzony przy użyciu wszystkich możliwych wariantów probówek. Wymagana objętość: 15 µl surowicy Przechowywanie: 2 dni w temp. 2 8 C lub dłużej w temp. 20 C. Ostrzeżenia i środki ostrożności Do użytku diagnostycznego in vitro. PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. H302 + H312, H412 P280, P273, P301 + P312, P302 + P312, P501 Ostrzeżenie! Działa szkodliwie po połknięciu lub w kontakcie ze skórą. Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ ochronę oczu/ ochronę twarzy. Unikać uwolnienia do środowiska. W PRZYPADKU POŁKNIĘCIA: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: azydek sodu; IL2R Kalibratory Odczynniki: Przechowywać w temp. 2 8 C. Utylizować zgodnie z mającymi zastosowanie przepisami. Zachować ogólne środki ostrożności i obchodzić się ze wszystkimi składnikami, zakładając, że mogą one stanowić źródło zakażenia. Materiał źródłowy pochodzący z ludzkiej krwi został przetestowany i uznany za niereaktywny w przypadku syfilisu, przeciwciał HIV 1 i 2, antygenu powierzchniowego żółtaczki typu B oraz przeciwciał żółtaczki typu C. Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl został dodany jako środek konserwujący. Wykorzystane odczynniki spłukiwać dużą ilością wody, aby zapobiec osadzaniu się stwarzających potencjalne zagrożenie wybuchem azydków metalicznych w rurach ołowianych lub miedzianych. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim działaniem światła słonecznego (patrz ulotka). Woda: Używać wody destylowanej lub dejonizowanej. Elementy zestawu Składniki tworzą dopasowany zestaw. Etykiety po wewnętrznej stronie pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Pojemnik z kulkami IL2R (L2IP12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych monoklonalnym mysim przeciwciałem anty-il2r. Stabilne w temp. 2 8 C przed upływem daty ważności. L2KIP2: 1 pojemnik Klin odczynnikowy IL2R (L2IPA2) Z kodem kreskowym. 11,5 ml zasadowej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z króliczym poliklonalnym przeciwciałem anty- IL2R w buforze, ze środkiem konserwującym. Stabilne w temp. 2 8 C przed upływem daty ważności. L2KIP2: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą w wyperforowanym miejscu, nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową plombę w górnej części klina. Wsunąć przesuwne zamknięcie w dół w prowadnice w pokrywie odczynnika. IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 15

16 Kalibratory IL2R (LIPL, LIPH) Dwie fiolki (niska i wysoka) zawierające zliofilizowany związek IL2R w buforze na bazie białka, ze środkiem konserwującym. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować 3,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Mieszać przez delikatne obracanie lub odwracanie aż do całkowitego rozpuszczenia liofilizowanego materiału. Stabilne w temp. 2 8 C przez 3 miesiące po rekonstytucji. Nie zamrażać. Po rekonstytucji kalibratory należy rozpipetować, aby uniknąć zanieczyszczenia przy wielokrotnym używaniu. L2KIP2: 2 zestawy Przed przystąpieniem do kalibracji umocuj na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Elementy zestawu dostarczane odrębnie Multirozcieńczalnik 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Do rozcieńczania w aparacie próbek pobranych od pacjentów. Jedna fiolka skoncentrowanej, gotowej do użycia, buforowej, białkowej matrycy zwierzęcej ze środkiem konserwującym. Stabilne w temp. 2 8 C przez 30 dni po otwarciu lub przez 6 miesięcy (rozpipetowane) w temp. -20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Nalepki z odpowiednimi kodami kreskowymi są dostarczane wraz z rozcieńczalnikiem. Przed użyciem umieścić odpowiednią nalepkę na probówce o wymiarach mm, by umożliwić rozpoznanie kodu przez czytnik aparatu. L2M2Z: 3 nalepki L2M2Z4: 5 nalepek L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Zestaw do oczyszczania LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek (o wymiarach 16 na 100 mm) na rozcieńczalnik do próbek L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik LILCM: Zestaw kontrolny IMMULITE cytokina (dwupoziomowy, na bazie surowicy ludzkiej) Również wymagane woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. Procedura oznaczania próbek Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 4 tygodnie Próbki kontrolne: Stosować kontrole lub zestawy próbek o co najmniej dwu poziomach stężenia (niskim i wysokim) IL2R. Oczekiwane wartości Badania przeprowadzone przy użyciu testu IMMULITE 2000 IL2R na grupie 100 zdrowych osób dorosłych dały medianę równą 333 U/mL a 95% zakres referencyjny wyniósł od 158 do 623 U/mL. Powyższe wyznaczniki należy traktować jedynie jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenie Nie jest zalecane rozcieńczanie próbek do stężenia poniżej 200 U/mL. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi składnikami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczania in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin. Chem. 1988: 34: (Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33)] Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych na próbkach pobranych od osób mających stały kontakt ze zwierzętami lub z produktami na bazie surowicy zwierzęcej, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji 16 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )

17 przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej mogą wystąpić oddziaływania pomiędzy rzadkimi rodzajami surowic a składnikami testu. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być zawsze interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w Tabelach i rysunkach. Wyniki wyrażono w U/mL. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy zebranych w probówkach bez bariery żelowej lub domieszek przyspieszających krzepnięcie.) Odnotowywany zakres: od 50 do U/mL Czułość analityczna: 5 U/mL Efekt wysokiej dawki (High-Dose Hook Effect): Nie stwierdzany do U/mL Precyzja: Próbki oznaczano w duplikatach w ciągu 20 dni, po dwie serie dziennie, otrzymując 40 serii i 80 powtórzeń (patrz tabela Precyzja). Liniowość: Oznaczano próbki poddane różnym rozcieńczeniom. (Aby porównać reprezentatywne wyniki, patrz tabela Liniowość.) Odzysk: Oznaczano próbki wzbogacone w stosunku objętościowym 1 do 19 trzema roztworami IL2R o stężeniach: 5 000, i U/mL. (Aby porównać reprezentatywne wyniki, patrz tabela Odzysk.) Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne dla IL2R (patrz tabela Specyficzność). Bilirubina: Obecność sprzężonej i niesprzężonej bilirubiny w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wyniki w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 512 mg/dl nie wpływa na wyniki w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do mg/dl nie wpływa na wyniki w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Porównanie metod: Wyniki porównano z wynikami uzyskanymi przy zastosowaniu testu IMMULITE IL2R w grupie 131 wzbogaconych i niewzbogaconych próbek pobranych od pacjentów. (Zakres stężeń: od ok. 130 do U/ml. Porównaj wykres.) Równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 1,03 (IML) + 5,5 U/mL r = 0,995 Średnie: 767 U/mL (IMMULITE 2000) 736 U/mL (IMMULITE) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KIP 2 {12} Changes in this Edition: cc#eu22516: 1) Removed references to discontinued products. 2) Under Warnings and Precautions, added caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, ) 17

18 terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej LOT Symbol Definition En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii 18 IMMULITE 2000 IL2R (PIEL2KIP-2 {12}, )