چكيده. پست الكترونيك:

Transcript

1 نشريه ميكربيولوژي دامپزشكي/ دوره نهم شماره دوم 1392 پياپي : جداسازي باكتريوفاژ اختصاصي O157:H7 از خاك كشاورزي باكتري اشريشيا كلي سويه 2 2 *1 سيده الهام رضاتوفيقي كبري كوه نشين امير تاج بخش 1. استاديار بخش ميكروبيولوژي گروه زيست شناسي دانشكده علوم دانشگاه شهيد چمران اهواز اهواز ايران 2. كارشناس ارشد ميكروبيولوژي بخش ميكروبيولوژي گروه زيست شناسي دانشكده علوم دانشگاه شهيد چمران اهواز اهواز ايران تاريخ دريافت: 15 تير 1392 تاريخ پذيرش: 19 شهريور 1392 چكيده باكتريوفاژ درماني از جمله راهكارهاي جانبي نسبت به آنتي بيوتيك درماني براي باكتريهاي مقاوم به آنتي بيوتيكهاست. ثابت شده كه فاژ درماني داراي يك سري مزايا است از جمله اين كه روشي بسيار اختصاصي موثر و توانمند نسبت به آنتي بيوتيكهاست. هدف از اين مطالعه جداسازي فاژهاي اختصاصي باكتري اشريشيا كلي O157:H7 بود. براي جداسازي فاژ از نمونههاي خاك خاك كشاورزي غني شده با كود حيواني و فاضلاب استفاده شد.از روش ارزيابي نقطه ايي و تكنيك كشت دو لايه آگار نرم براي جداسازي فاژ و براي مشاهده ساختمان فاژ از ميكروسكوپ الكتروني استفاده شد. اختصاصيت فاژ جدا شده نيز بررسي شد. فاژ باكتري اشريشيا كلي O157 از خاك كشاورزي غني شده با كود حيواني جدا شد. اين فاژ پلاكهاي شفافي به قطر 0/3-0/2 mm روي باكتري ايي كلي O157 ايجاد ميكرد ولي روي ديگر باكترها تاثيري نداشت. تعداد فاژ PFU/ml بدست آمد. ويرونهاي فاژ با ميكروسكوپ الكتروني مشاهده و تاي يد شدند. از فاژ حاد جدا شده در اين مطالعه ميتوان براي كنترل بيولوژيكي باكتري ايي كلي O157 در حيوانات و يا مواد غذايي تازه استفاده كرد بدون اين كه روي ديگر باكتريهاي فلور و يا كيفيت غذا تاثيري داشته باشد. كلمات كليدي: باكتريوفاژ اشريشيا كلي O157:H7 خاك كشاورزي. نويسنده مسي ول: سيده الهام رضاتوفيقي آدرس: بخش ميكروبيولوژي گروه زيست شناسي دانشكده علوم دانشگاه شهيد چمران اهواز اهواز ايران. تلفن: (3594) پست الكترونيك: e.tofighi@scu.ac.ir

2 و 1 92 نشريه ميكروبيولوژي دامپزشكي/ دوره نهم شماره دوم 1392 پياپي 27 مقدمه روش استفاده از باكتريوفاژها براي درمان بيماريهاي باكتريايي قبل از كشف آنتي بيوتيكها پيشنهاد شد ولي پس از كشف پني سيلين و ساير آنتي بيوتيكهاي وسيع الطيف كاربرد آنها كم كم به فراموشي سپرده شد (1 و 6). ظهور باكتريهاي بيماريزاي مقاوم به آنتي بيوتيكها و از طرفي ديگر افزايش بيماران دچار تضعيف سيستم ايمني موجب كاهش كارايي آنتي بيوتيكها در درمان عفونتهاي باكتريايي شده است. فاژ درماني روشي كم هزينه عليه انواع باكتريها و به ويژه عفونتهاي مقاوم به درمان ميباشد. فاژها برخلاف آنتي بيوتيكها بسيار ارزان قيمت بوده و فاقد عوارض جانبي شناخته شده هستند. همچنين عليه تمامي باكتريها قابل توليد بوده و براي درمان از همهي روشهاي شناخته شده از جمله داخل عروقي عضلاني خوراكي و حتي داخل مغزي ميتوان استفاده نمود. علاوه بر اين به آساني با هزينه اي پايين از محيط زندگي انسان قابل جداسازي و تخليص است. از طرفي باكتريها توانايي مقاومت در برابر آن را ندارند و يا حداقل مقاومت در برابر آنها پايين است 4) 5 و 12). فاژها از نظر تاثير بر روي باكتريها بسيار اختصاصي عمل ميكنند به اين ترتيب كه فقط باكتريهاي بيماريزا را هدف ميگيرند (9). براي هر باكتري بيماريزا حداقل يك و يا تعداد بيشتري باكتريوفاژ كاملا اختصاصي وجود دارد كه ميتوان از آن براي درمان استفاده نمود. در حالي كه آنتي بيوتيكها بدون استثنا تعداد زيادي از باكتريها را از بين ميبرند. مثلا با مصرف آنتي بيوتيكها باكتريهاي مفيد روده كه مزيتهاي زيادي براي انسان دارند از بين رفته و باكتريهاي مضر شروع به تكثير ميكنند تكثير در داخل باكتريها با مقادير پايين عفونتها را ريشه كن ميكنند و به خوبي در عمق بافتها نفوذ ميكنند. در ضمن فاژها به علت اين كه فقط در ميزبانهاي اختصاصي خود رشد و تكثير ميكنند با مرگ تمام باكتريهاي حساس فاژها نيز به سرعت از بين ميبرند ) 14). اشريشيا كلي بيماريزا به دستههاي گوناگوني تقسيم ميشود كه يكي از آنها اشريشيا كلي انتروهموراژيك ) Escherichia Enterohemorrhagic (coli (EHEC) ميباشد. همچنين بهعلت توليد توكسين به آن اشريشيا كلي توليد كننده وروتوكسين (VTEC) (Verocytotoxin producing E. coli) و يا STEC coli) (Shiga Toxin- producing E. هم گفته ميشود. يكي از مهمترين سروتيپهاي اين گروه اشريشيا كلي O157:H7 است كه در دهههاي اخير عامل ايجاد چندين اپيدمي و مرگ و مير در دنيا بوده است. اين باكتري در بسياري از موارد مشابه شيگلا بوده و قادر است سمي شبيه شيگلاتوكسين (stx) توليد نمايد. محل بيماريزايي اشريشيا كلي O157:H7 روده بزرگ بوده و بيماري ايجاد شده ميتواند يه صورت بدون علامت اسهال معمولي اسهال خوني كوليت هموراژيك سندرم اورمي هموليتيك در كودكان و پورپورآي ترومبو سيتوپنيك ترومبوتيك در بزرگسالان باشد (13). در اين مطالعه فاژهاي اختصاصي اين باكتري بيماريزا جستجو شد. مواد و روش كار جداسازي باكتريوفاژ براي جداسازي فاژ از فاضلاب خاك و زمين كشاورزي غني شده با كود حيواني نمونه برداري شد. ميزان 10 گرم خاك از عمق 10cm جمع آوري شد. از هر محل سه نمونه تهيه شد و در نهايت نمونهها با هم (9). از ديگر مزيتهاي فاژها اين است كه به علت مخلوط شد. از فاضلاب نيز سه نمونه هر كدام 10cc

3 و ه ی و س کلی ا ی ش ی ر ش ا ی ر ت ک ا ب ی ص ا ص ت خ ا ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ی ز ا س ا د ج ه ن ا گ ا د ج ت ر و ص ه ب ا ه ه ه ه ن و م ن.. د ش ه ی ه ت ط س و ت ن و ا ه ن و ر د و د ش ه ف ا ض ا ب آ ی ر ا د ق م ا ه ن آ ه ب س پ س و ن ژ ر م ه ه ق ی ق د 0 1 ت د م ه ب ا هه ن و م ن. شد ریخته 5 4 cc ی ا ه ن و ک ل ا ف ی ا م د ر د rpm ت ع ر س ا ب C ژ 4 و ف ی ر ت ن ا س ی م ا م ت د ع ب ه ب مرحله این ز ا. شد برداشت ی ی و ر ع ی ا م ر ی ز ر د ی گ د و ل آ از جلوگیری برای فرایندددها د و ه و د ن د ش رویی مایع. ت ف ر ی ذ پ م ا ج ن ا ه ل ع ش ر ا ن ک و ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ی ا ه ر ت ل ی ف ز ا و لق ع م ز ی ر ت ا ذر ا ت ه د ا د ور ب ع 0/5 4 µm جدا کنند ر و ب ع ر ت ل ی ف ن ی ا ز ا د ن ن ا و ت ی م ن ه ک ی ی ا ه ی ر ت ک ا ب ی ی و ر ع ی ا م سپس. شوند ی ا ه رررر ر رر ت ل ی ف ا ب ا د د ج م ی ا م د ا ب ل ا چ خ ی ن و ر د ژ ا ف حاوی مایع و کرده فیلتر 0/2 2 µm 4 C ز ا ژ ا ف ی ز ا س ی ن غ ر و ظ ن م ه ب. د ش ی ر ا د ه گ ن ر و ن ز ا ر و د ه ب )LBM( MgSO 4 ل و م ی ل ی م 5 ی و ا ح ی ن ا ت ر ب ا ی ر و ل ط ی ح م ه د ا ف ت س ا ی ر ت ک ا ب خالص پررررررگنه. د ش ط ی ح م ر د O157:H7 ت ع ا س 6 1 ت د م ه ب 7 3 C ت ش ک LB ی ی ی ی ی ل ک ا ی ش ر ش ا ی ا م د ر د و د د د ش ه د ا د ش و س ( دددد د شدد ه ب و ک ن ا ی ر ت ک ا ب ه ا گ ش ن ا د ی ک ش ز پ م ا د ه د ک ش ن ا د ز ا O157:H7 کلی اشرشیا ه ی ه ت د د ج م ت ش ک ی ر ت ک ا ب ز ا س پ س. ) د ش ت ف ا ی ر د ن ا ر ه ت د ن ل ر ا ف ک م م ی ن کدورت به کشت محیط کدورت تا د ش باکتری برای ن ا م ز ن ی ا ال و م ع م که برسد 5/ ت 2 ع ا س ی و ا ح ی لل ل ک ا ی ش ش ش ر ش ا ن ل ر ا ه ب ه د ش ر ت ل ی ف ع ی ا م ز ا ی س ی س ه د. ت س ا ی و حا ت ش ک یط ح م ز ا 1cc 0 1 و د ن ل ر ا ف ک م م ی ن د ش ر ی 0 س ی س ه ر و د در ی ر ت ک با ط ی ح م ه ز ا ت LBM ر و د ا ب ر ا د ر ک ی ش ر و ت ا ب و ک ن ا ر د ط ی ح م. شد داده ل ا ق ت ن ا 1 مدت برای 7 3 C ی ا م د rpm ط س و ت ا ه ی ر ت ک ا ب ا ت ت ش گ مورد فاژهای ت 8 ع ا س ت ن و ف ع ه ب و ک ن ا ر ا ر ق گذشت از د ع ب. د ب ا ی ر ثی ک ت ر ظ ن د ر و م ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب و ه ت ف ر گ ن ا م ز 1 محیط 8 ساعت. / 2 2 µm ی ا ه ر ت ل ی ف ط س و ت و ژ و ف ی ر ت ن ا س ت ش ک 1(. 1 و )2 د و ش ص ل ا خ ژ ا ف ا ت د ش ر ت ل ی ف Spot ( ی ی ا ه ط ق ن ش و ر ز ا ژ ا ف ر و ض ح ه د ه ا ش م ت ه ج ی و ر ه د ش ر ت ل ی ف ع ی ا م ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م ه د. د ش ه د ا ف ت س ا ) assay ت ش ک ح ط س باکتری چمنی O157:H7 ی ی ی ل ک ا ی ش ی ر ش ا ه د ش فیلتر مایع ر د ژ ا ف د و ج و صورت در. شد چکانده 1(. 1 ( د ش ی م د ا ج ی ا ی ر ت ک ا ب کشت محیط ر د ف ا ف ش ط ا ق ن ر ا گ آ ه ت ی ال و د ر ا تت گ آ ک تت ی ن ک ت ز ا Soft agar ( م م م ر ن overlay technique ت( ه ج ی ا ه ک ال ت پ ه د ه ا ش م ک ت ک م ک ا ب ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ز ا ا د ت ب ا که ترتیب ن ی د ب. شد استفاده ل ی ر ت س ا سولفات منیزیوم ک م ن ر ف ا ب 6 ر ه ز ا µl س پ س. د ش ه ی ه ت 0 1 ˉ µl ی و ت ح م ل ی ر ت س ا ت د م ه ب و ه د ا د ل ا ق ت ن ا ی ا ه ت ت ت ت ت ق ر 1 ا ت 0 1 ˉ ( شد انکوبه 7 3 C ی ا م د ی ا ه هههههه ه لهه و ل ه ب ت ق ر O157:H7 ی ی ل ک اا ا ی ش ی ر ش ا ی ر ت ک ا ب ب ذ ج ت ه ج ه ق ی ق د 0 1. )11 ی ا ه ه ه ل و ل ه ب ژ ا ف ی- ر ت ک ا ب ن و ی س ن ا پ س و س ر ا گ آ + LBM( ( ( ( ( ( آگارمذاب سافت ر د ژ ا ف ی و ت ح م 3ml ) د ص ر د 0/5 7 ر ب ت ع ر س ه ب ن د ر ک ط و ل خ م ز ا د ع ب و د ش ه د ا د ل ا ق ت ن ا ش ی پ ز ا LBM ر ا گ آ ه ی ا پ ی و ت ح م ی ا ه ت ی ل پ ح ط س 2 ت د م ه ب ا ه ت ی ل پ. شد پخش ه د ش ه ل ح ر م ر د. شدند انکوبه 7 3 C ت 4 ع ا س ی ا ه ک ال ت پ ر ت خ آ ه د ا م آ ر و ت ا ب و ک ن ا ر د د ا ج ی ا ک پتال شتمارش واحتد ن ی ی ع ت و ی ژ و ل و ف ر و م ر ظ ن ز ا ه د ش فوق مراحل ز ا د ع ب. گرفتند قرار ی س ر ر ب د ر و م ) PFU( پ و ک س و ر ک ی م ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ی ی ا ه ن د ی ی ا ت. ) 1 1 و 2( گرفت صورت ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ی گ ژ ی و ش ی ا م ز آ ی ن و ر ت ک ل ا TEM د ش ه د ا ف ت س ا ت ی ص ا ص ت خ ا ت س ت ی ا ر ب که باکتریهایی ه ک د ر ا د ن ا ت س ا ی ا ه ی ر ت ک ا ب ل و ا ه ت س د. د و ب ه ت س د و د ل م ا ش ل م ا ش ه ی و س ی ی ی ل ک اا ا ی ش ی ر ش ا گ گ ی ش DH5α ال ( س س س س و ئ ر و ا س و ک و ک و ل ی ف ا ت س ا )PTCC )1188 ا ن و م و د و س 1431( س ی ی ی ر ت ن ا س ی د PTCC. د و ب )PTCC )1562 اا ا ز و ن ی ژ و ر ئ آ ت ا ن ا و ی ح ا ی و د ا ر ف ا ز ا که بیماریزا ی ا ه ی ر ت ک ا ب م و د ه ت س د ل م ا ش ه ک د و ب ه د ش ا د ج ر ا م ی ب و د و د ی ر ا ر د ا ت ن و ف ع ز ا شده جدا للی ل ک اا ا ی ش ی ر ش ا ی ر ت ک ک ک ا ب ی ی ل ک اا ا ی ش ی ر ش ا ی ی ر ت ک ا ب

4 ل) ک ش و 1 م ه ن ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن م و د ه ر ا م ش 7 2 ی پ ا ی پ 4 9 گوارش دستگاه ر و ل ف و موریوممممممم اتیفی سالمونل ن ا س ن ا. د و ب ر ا م ی ب م ا د ز ا ه د ش ا د ج س ی ر ا گ ل و س و ئ ت و ر پ ی ن و ر ت ک ل ا پ و ک س و ر ک ی م ا ب ژ ا ف ه د ه ا ش م ی ز ی م آ گ گ ن ر ز ا ژ ژ ا ف ن ا م ت خ ا س ه د ه ا ش م ت ه ج اورانیل استات ی ف ن م ز ا ی ر ی گ ه ه ن و م ن ا ا ا ا ا ا د ت ب ا. د ش ه د ا تف س ا % 2 ر د ا ه ه ن و م ن. شد انجام جداگانه بصورت ا ه ک ال پ ه ی ش ا ح ی س م د ی ر گ ک ی. د ش ل ح م ال ی و ر ب آ ی و ر ژ ا ف 0 2 µl ز ا س پ. شد داده ر ا ر ق ه ق ی ق د 4 ت د م ه ب ب آ ر د ه د ش ل ح و ه ت ف ر گ ه ن و م ن ی ه ف ا ض ا ی ف ا ص ذ غ ا ک ا ب ق و ف ه ل ح ر م م ا م ت ا ی و ر ه ق ی ق د و د ت د م ه ب ی ز ی م آ گ ن ر ت ه ج د ی ر گ ر ه ا ه ه ه ن و م ن. ) 0 1 و )8 ت ف ر گ ر ا ر ق % 2 ل ی ن ا ر و ا ت ا ت س ا 0 4 µl پ و ک س و ر ک ی م ا ب. د ن د ش ه د ه ا ش م )Germany ج ی ا ت ن Leo906E, Zeiss, ( TEM ی ی ی ن و ر ت ک ل ا ی ا ه ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ش ه و ژ پ ن ی ا ر د ی ز ا س ا د ج O157:H7 ی ی ی ل ک ا ی ش ر ش ا. )2 ی ز ا س ا جد مکانبرای بهترین باکتری اختصاصی د د د د د ش ژ ا وف ی ر ت ک ا ب ن ی ا ی ی ی ا ه ل ل ل ک ش ( ر د ن ی ا و د و ب ی ن ا و ی ح ی ا ه د و ک ا ب ه ا ر م ه ی ز ر و ا ش ک ک ا خ ت س ا ی ل ا ح ز ا ی ر ت ک ا ب این اختصاصی ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ه ک ا ب ر ظ ن د ر و م ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ت ی ص ا ص ت خ ا. د ش ن جدا فاضالب ی ا ه ی ر ت ک ا ب ز ا ه د ا ف ت س ا ر د ژ ا ف. د ش بررسی شده ر ک ذ د ا ج ی ا ک ا ل پ ا ه ی ر ت ک ا ب ن ی ا ز ا کدام هیچ کشت محیط. د ر ک ن د و ج و ژ ا ف ن ی ن چ ه و ل ک ش ق ی ر ط ز ااا ا ا ا ا ا ا اا ا ا ا ا ا اا ن آ گرفت قرار ی س ر ر ب د ر و م M E T ی ن و ر ت ک ل ا ب و ک س و ر ک ی م ی س و ر ی و ل ک ی ت ر ا پ ن ا ز ی م. ) 3 ر د. د ش ه ب س ا ح م PFU ر ب ا ر ب ه ن و م ن ز ا ر ت ی ل ی ل ی م ر ه ر ی و ا ص ت ه ب ه ج و ت ا ب ن ا م ت خ ا س ی ا ر ا د ژ ا ف ن ی ا ی ن و ر ت ک ل ا پ و ک س و ر ک ی م ت س ی ب ر د فاژ این ه ز ا د ن ا. د ش ا ب ی م کوتاه دمی ی ا ر ا د و ی ه ج و یباشد. م 0 2 0nm د و د ح ش و ر ر د ژ ا ف ط س و ت ه د ش د ا ج ی ا ی ا ه ک ال پ : 1 ر ی و ص ت ی ی ا ه ط ق ن ی ز ا س ا د ج ط خ ه ز ا د ن ا ( ی ن و ر ت ک ل ا پ و ک س و ر ک ی م ا ب ه د ش ه د ه ا ش م ژ ا ف : ر 2 ی و ص ت ) د ش ا ب ی م nm ش ک ی ر ی گ ه ج ی ت ن و ث ح ب ی ت ن آ ه ب مت و ا ق م ش ر ت س گ ا ب ر ی خ ا ل ا س د ن چ ر د ز ا ه د ا ف ت س ا بیماریزا میانباکتریییییییهای ر د ا ه ک ک ی ت و ی ب ژ ا ف ز ا. د س ر یی یی ی ی ی یی ی ی ی ی می ر ظ ن ه ب د ن م د و س ی ر م ا ا ه ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ی ت ن آ ر ا ن ک ر د جانبی روشی ن ا و ن ع ه ب ن ا و ت ی م ی ن ا م ر د ن ا م ر د ه ب م و ااا ا ا ق م ی ا ه ی ی ی ر ت ک ا ب ا ب ه ل ب ا ق م ی ا ر ب ا ه ک ی ت و ی ب ح ط س ه ب )Adsorption( ژ ااا اا ا ا ا ا اا ف ب ذ ج. د ر ک ه د ا ف ت س ا ه ب ی گ ت س ب ت س ا ژ ا ف ت ن و ف ع ه ل ح ر م ن ی ل و ا ه ک ا ه ی ر ت ک ا ب. 1( 1 ( د د د ر ا د ی ر ت ک ا ب ه ر ا و ی د سطح روی ر ب گیرنده وجود ی ل پ و پ ی ل کلییی اشریشیااا ی ر ت ک ا ب ر د ا ل و م ع م ژ ا ف ه د ن ر ی گ ی ا ه هههههه ه ه ه ی و س ر د لیپید این. ت س ا خارجی غشاء د ی ر ا ک ا س ین ا ی ا ه ژ فا ل ی ل د ن ی م ه به و ت س ا ت و ا ف ت م ف ل ت خ م

5 ه ی و س کلی ا ی ش ی ر ش ا ی ر ت ک ا ب ی ص ا ص ت خ ا ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ی ز ا س ا د ج ن د و د ز ی ا ر ب ن ا ر ا ک م ه و Hudson ی ص ا ص ت خ ا صورت به د ن ا و ت ی م و ت س ا ع و ن ت م م ه ی ر ت ک ا ب ژ ا ف ل ا ص ت ا ه ب م و ی ز ی ن م ک م ن کردن اضافه 1(. 1 ( کند عمل ک م ک ل و ل س ح ط س ه ب ی ا ر ب ژ ا ف ا ر ی ز د ن ک ی م ز ا ی ن ل ا ص ت ا ی ر ت ک ا ب ر گ ا. ) )3 د ر ا ددد د د م و ی ز ی ن م ا ی و کلسیم یونهای ه ب ر ا چ د ا ی د ه د ب ت س د ز ا ا ر خود سطحی ساکارید پلی و پ ی ل د ر ا د ن ا ر ی ر ت ک ا ب ه ب ل ا ص ت ا ی ی ا ن ا و ت ژ ا ف ر گ ی د د و ش ر ی ی غ ت ک تال پ ت ت ش ک ط ی ت ح م ر د و شده مقاوم ی ر ت ک ا ب ه ج ی ت ن ر د ر د ه د ش ا د ج ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب. د و ش ی م ن د ا ج ی ا ش ه و ژ پ ن ی ا از مییییییییتوان که میییییییییییباشد ه ژ ی و ت ی م ه ا د ن چ ی ا ر ا د ت ن و ف ع م د ع ه ج ی ت ن ر د و ن آ ت ی ص ا ص ت خ ا م د ع ن ی ن چ م ه و ه د و ر ل ا م ر ن ر و ل ف دا ج آن زایی ی ا ر ب ی ا ر ب جانبی عوارض ژ ا ف و ی ر ت ک ا ب ن د و ب ی ص ا ص ت خ ا ت ل ع. کرد یاد ر ا م ی ب ص خ ش ا ل ا م ت ح ا ه د ش ی ص ا ص ت خ ا ساکارید لیپوپلی وی ر ژ فا این دگیرندههههههههههههای وجو ی ر ت ک ا ب ن ی ا. د ش ا ب ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی م فاژ این د ه د ی ی م ن ا ش ن ی ن و ر ت ک ل ا پ و ک س و ر ک ی م ر ی و ا ص ت گ ر ز ب ا ت ب س ن و ی ه ج و ت س ی ب ی ن ا م ت خ ا س ی ا ر ا د. د ش ا ب ی ی ی ی ی م ی ل و ک ل و م ی ا ه ش و ر ز ا د ی ا ب ژ ا ف ق ی ق د شناسایی برای ه ت ب ل ا ن ا و ت ی ی ی ی م ه ع ل ا ط م ن ی ا ر د ه د ش ا د ج ژ ا ف ز ا. گرفت کمک کنترل برای ی ک ی ژ و ل و ی ب ه د ا ف ت س ا ا ز ی ر ا م ی ب ی ر ت ک ا ب ن ی ا د ا و م ا ی و ب آ د ا ر ف ا ه ب ی ر ت ک ا ب ن ی ا ل ا ق ت ن ا ی ا ه ه ا ر ز ا. د ر ک. ت س ا ه د و ل آ ی ی ا ذ غ ک م ک ا ب ژ ا ف ی ک ی ژ و ل و ی ب ل ر ت ن ک ا ر باکتری غذایی د ا و م ت ی ف ی ک ه ب ب ی س آ ن و د ب ن ا و ت ی م. د ر ک ف ذ ح ی ر کت ا ب ر د O157 ی یی ی ی ل ک ا ا اا ا ی ش ی ر ش ا ه ب ه ج و ت ا ب. ) 3 1 ( د ن ک ی م ل ا ه س ا د ا ج ی ا ن ا گ د ن ن ک ر ا و خ ش ن ن ی ا ی ص ا ص ت خ ا ه د ش ا د ج د ا ح ژ ا ف ه ک ن ی ا آن از میییتوان ی ر ت ک ا ب ت س ا وال تت م ع م. د ر ت ک ه د ا ف ت ت س ا دررررررمتتان برای ا ه ژ ا ف و ا ه ک ی ت و ی ب ی ت ن آ ه ب ت ب س ن ن ا م ز ر و ر م ه ب ا ه ی ر ت ک ا ب ز ی ن د و خ ژ ا ف ه ک ن ی ا ه ب ه ج و ت ا ب ا م ا. د ن ن ک ی م ا د ی پ ت م و ا ق م ود ج و م این فراراز ی ا ر ب ا ر ی ی ا ه ر ا ک ه ا ر ت س ا ه د ن ز ی ت ن آ ی ا ر ب ه ک ی ل ا ح ر د د ن ک ی م ا د ی پ ت م و ا ق م. ) 1 1 ( ت س ی ن ق د ا ص ر م ا ن ی ا ا ه ک ک ک ک ک ی ت و ی ب O157 ی ی ی ل ک ز ا م ا خ ت ش و گ ز ا ی ص ا ص ت خ ا ژ ا ف اا ا ی ش ی ر ش ا ی ی ر ت ک ا ب ن ی ا ا د ج آنها توسط که فاژی. )7( کردند استفاده ی ر ت ک ا ب ه ه ه د ی ر ی و و ی م ه د ا و ن ا خ ه ب ط و ب ر م د و ب ه د ش Myoviridae ی گ د و ل آ حذف برای ز ی ن ن ا ر ا ک م ه و Tomat ت. س ا ه د و ب. 6( 1 ( د ن د ر ک ه د ا ف ت س ا ژ ا ف ز ا ت ش و گ. د و ب شده جدا مدفوع ز ا شد استفاده ا ه ن آ ط س و ت ه ک ی ژ ا ف ی ع م ج و Tomat ی ر ت ک ا ب ن د ر ب ن ی ب ز ا ی ا ر ب ا ه ژ ا ف ن ی ا ز ا ن ا ر ا ک م ه ز ا ر گ ی د ه د ا ف ت س ا شیر تخمیری ی ا ه د ن ی ا ر ف ر د O157 کلی اشریشیا ی ا ه ی ر ت ک ا ب ه ب ب ی س آ ن و د ب ه ع ل ا ط م ن ی ا ر د. ) 5 1 ( د ن د ر ک ط س س و ت O157 کلللی اشریشیااا ی ر ت ک ا ب شیر کننده تخمیر ن ی ا ژ ا ف حاضر مطالعه ر د. 5( 1 ( ت ف ر ن ی ب ز ا ژ ا ف ی ر ت ک ا ب ه ک ی ل ا ح ر د د ش ا د ج ی ن ا و ی ح د و ک ا ب شده غنی ک ا خ ز ا جداسازی فاژی ک ا خ و ب ال ض ا ف ز ا ی ا ه ی ی ی ر ا د ر ب ه ن و م ن ه ب ز ا ی ن ژ ا ف ی ز ا س ا د ج له ص و ح و و است فراوان. د ش ن د د ع ت م ز ا ی ر ا د بر ه ن و نم ت س ا ر ت به ن ی ا جداسازی امکان که محلهایی ی ا ر ب ه ت ب ل ا ر ب ص و ز ا ت س ا ر ت ش ی ب ژ ا ف ع و ف د م ی ن ا و ی ح د و ک ا ب ه د ش ی ن غ خاک فاضالب ه ل م ج ل ا ه س ا ه ب ال ت ب م ت ا ن ا و ی ح ا ص و ص خ ه د ن ن ک ر ا و خ ش ن ت ا ن ا و ی ح با ل ض ا ف ه ن و م ن. د ر ک ه د ا ف ت س ا ی ل ی س ا ب ی ل ک ه د ا ف ت س ا ه د ش تاال م ت ح ا و ت ت ش ا د ی ع و ف د م ی گ د و ل آ ر ت م ک ه ع ل ا ط م ن ی ا ر د ن ی د ب. د ش ا ب ی ی ی ب ال ض ا ف ز ا ژ ا ف ن د ش ن ا د ج ل ی ل د ر م ا ن ی ا ن ا و ت ی م ه د ش ا د ج ژ ا ف ن ی ا ر ت ل م ا ک و ر ت ه ب ت خ ا ن ش ا ب ب ی ت ر ت آنتی از ده ا ف ت س ا ر ا ن ک ر د ی ن ا رم د ژ ا ف ن ا و ن ع ه ب ن آ ز ا. کرد استفاده ا ه ک ی ت و ی ب ر ک ش ت و ر ی د ق ت شهید دانشگاه ی و ن ع م و ی ل ا م حمایتهای از ر ک ش ت ا ب اهواز چمران ه ی ل ک ل ح م ز ا ق ی ق تح ن ی ا لی ا م ع اب ن م ه ر ا م ش ه ب ز ا و ه ا چمران شهید دانشگاه ه ن ا ه و ژ پ. ت س ا شده تامین

6 م ه ن ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن م و د ه ر ا م ش 7 2 ی پ ا ی پ 6 9 Applied Environmental Microbiology 65: Lauer, P., Chow, M.Y., Loessner, M.J., Portnoy, D.A., Calendar, R. (2002). Construction, characterization, and use of two Listeria monocytogenes sitespecific phage integration vectors. Journal of Bacteriology 184: Mehdizade, M., Eskandari, S., Zavar, M., Piruz, B. (2008). The importance of infections caused by Escherichia coli O157:H7 in foodborn infection. Journal of Kerman University of Medical Sciences 15: Sulakvelidze, A., Alavidze, Z., Morris, J.G. (2001). Bacteriophage therapy (mini review). Antimicrobial Agents and chemotherapy 45: Tomat, D., Mercanti, D., Balagué, C., Quiberoni, A. (2013). Phage biocontrol of enteropathogenic and Shiga toxinproducing Escherichia coli during milk fermentation. Letters in Applied Microbiology 57: Tomat, D., Migliore, L., Aquili, V., Quiberoni, A., Balagué, C. (2013). Phage biocontrol of enteropathogenic and shiga toxin-producing Escherichia coli in meat products. Frontiers in Cellular Infection Microbiology 3: ع ب ا ن م 1. Alexander, S., Zemphira, A., Glenn, M.J. (2001). Bacteriophage therapy. Antimicrobial Agents and chemotherapy 45: Benson, H.J. (2001). Microbiological Applications Lab Manual, 8 th Edition, Mc Graw-Hill companies: Calendar, R. (1988). The Bacteriophages, Volume I, First edition, Plenum Press, New York: Gill, J.J., Sabour, P.M., Leslie, K.E., Griffiths, M.W. (2006). Bovine whey proteins inhibit the interaction of Staphylococcus aureus and bacteriophage K. Journal of Applied Microbiology 101: Greer, G.G. (1986). Homologous bacteriophage control of Pseudomonas growth and beef spoilage. Journal of food protection 49: Hanlon, G.W. (2007). Bacteriophages: an appraisal of their role in the treatment of bacterial infections. International Journal of Antimicrobial Agents 30: Hudson, J.A., Billington, C., Cornelius, A.J., Wilson, T., On, S.L., Premaratne, A., King, N.J. (2013). Use of a bacteriophage to inactivate Escherichia coli O157:H7 on beef. Food Microbiology 36: Jonathan, M. (2000). Phage isolation and investigation. Dartmouth Undergraduate Journal of Science 3: Keen, E.C. (2012). Phage therapy: Concept to cure. Frontiers in Microbiology 3: Knott, G. (2009). Biological TEM, an Introduction, Chapter Kudva, I.T., Jelacic, S., Tarr, P.I., Youderian, P., Hovde, C.J. (1999). Biocontrol of Escherichia coli O157 with O157-specific bacteriophages.

7 Journal of Veterinary Microbiology, Volume 9, Issue 2, 2013 The Isolation of Specific Bacteriophage Escherichia coli O157:H7 from Agricultural Soil Rezatofighi, S.E.* 1, Kouhneshin, K. 2, Tajbakhsh, A Assistant Professor Section of Microbiology, Department of Biology, Faculty of Science, Shahid Chamran University of Ahvaz 2- MS of Microbiology, Department of Biology, Faculty of Science, Shahid Chamran University of Ahvaz Received Date: 6 July 2013 Accepted Date: 10 September 2013 Abstract Bacteriophage treatment offers a possible alternative to conventional antibiotic therapy against multidrug-resistant bacteria. Phage therapy has already been proven to be advantageous since it is more specific, accurate and potent than antibiotics. The aim of this study was the isolation of E. coli O157:H7 specific phages. To isolate the phage from the samples of soil, agricultural soil enrichment with animal manure, and waste were investigated. Spot assay and soft agar overlay technique were used for the isolation of phage. Electron Microscope was used for observation of phage structure. Specificity of the phage isolated was investigated. E. coli O157 phage was isolated from agricultural soil enrichment with animal manure. This phage produced clear plaques (0.2 to 0.3 mm diameter) on E. coli O157 but not on the other tested bacteria. The number of phage was calculated PFU/ml. Phage virions were observed and confirmed by TEM. The virulent phage isolated in this study may be used for biocontrol of E. coli O157 in animals and fresh foods without compromising the viability of other normal flora or food quality. Keywords: Bacteriophage, Escherichia coli, O157:H7, Agricultural Soil. *Corresponding author: Rezatofighi, S.E. Address: Section of Microbiology, Department of Biology, Faculty of Science, Shahid Chamran University of Ahvaz. Tel: (3594) e.tofighi@scu.ac.ir